中国鹿源致病性大肠杆菌的分离鉴定及毒力基因分析

目的对中国东北地区鹿源致病性大肠杆菌血清型及携带毒力基因情况进行研究。方法根据大肠杆菌的不同毒力基因,设计了9对引物,应用单一PCR及多重PCR扩增,对85株大肠杆菌进行毒力基因检测。结果对中国东北地区患病鹿进行大肠杆菌的分离和鉴定,分离出85株鹿源大肠杆菌,通过血清学分类,鉴定出55株大肠杆菌,分别属于37个不同血清型,其中,EAST1基因阳性菌61株(71.76%),VT1基因阳性菌31株(36.47%),VT2基因阳性菌22株(25.88%),eae A阳性菌1株(1.18%),flich7基因阳性菌6株(7.06%),STb阳性菌1株(1.18%),LT阳性菌2株(2.36%),未检到STa、SLT-2e阳性菌。结论本研究初步阐明了我国东北地区鹿大肠杆菌病的主要血清型及主要致病基因,在临床治疗上应予重视。

鹿源肠道致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

对吉林省敦化及双阳两地区腹泻鹿进行了大肠杆菌的分离和鉴定,分离出68株鹿大肠杆菌,经过肠道致病性大肠杆菌血清学鉴定,其中10株为致病性大肠杆菌(EPEC),通过对耐药性监测,发现分离的菌株对多粘菌素B、红霉素、克林霉素、头孢氨苄、复方新诺明、青霉素G呈现不同程度的耐药;而对头孢唑啉、环丙沙星、阿莫西林、卡那霉素、庆大霉素、依诺沙星较为敏感,可以做为临床用药的参考。

乳酸克鲁维酵母Cu/Zn-SOD基因的克隆及在酿酒酵母中的表达研究

根据Genbank中乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的Cu/Zn-SOD基因序列设计引物,通过PCR扩增得到Cu/Zn-SOD基因。在PGK1启动子驱动下,将该基因与荧光报告基因GFP融合,分别构建重组质粒YEplac195-PSGA和YCplac33-PSGA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W303α菌株。通过菌落PCR和荧光显微观察证实乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的Cu/Zn-SOD基因在W303α中成功表达。将获得的阳性转化子在添加20mmol/L百草枯的发酵培养基中进行发酵,SOD的比活力和总活力分别是不添加百草枯培养基中发酵菌体的6.7倍和4.7倍。通过热激胁迫处理进一步探讨Cu/Zn-SOD对宿主sod1Δ酿酒酵母菌株EG118耐受力的影响,结果显示抗热击能力的顺序为EG118(YEplac195-PSGA)>EG118(YCplac33-PSGA)>EG118。以上结果为发酵工业中防止菌体老化和增强菌体的发酵能力提供一定的理论指导,也为后续的Cu/Zn-SOD体外分子定向进化改造奠定必要的基础。