自动诱导表达体系表达片球菌素融合蛋白

分别采用IPTG诱导和自动诱导方法诱导E.coli BL21(DE3)基因工程菌表达片球菌素融合蛋白;采用稀释方法对变性后的片球菌素融合蛋白包涵体进行复性,复性后融合蛋白经Ni-IDA柱分离纯化后经肠激酶酶切得目的片球菌素蛋白;以单核细胞增多症李氏杆菌为指示菌,采用牛津杯法测定所得到的片球菌素活性,并对其热稳定性,耐酸碱性和耐蛋白酶活性进行了分析。实验结果表明,经过诱导后,IPTG诱导菌液最终OD_(600)值为3.5000,而自动诱导为7.6998,IPTG诱导融合蛋白包涵体采用尿素溶解后的蛋白浓度为0.1001 mg/m L,而自动诱导为0.2359 mg/m L;自动诱导体系所获得的片球菌素融合蛋白产量优于IPTG诱导体系。所获得的片球菌素对单核细胞增多症李氏杆菌有抑制作用,热稳定性好,耐酸性强而耐碱性弱,对胰蛋白酶,胃蛋白酶,木瓜蛋白酶和蛋白酶K敏感,可以被降解。自动诱导体系可以应用于片球菌素融合蛋白的E.coli BL21(DE3)基因工程菌高效表达片球菌素。

基于竞赛难度与能力提高的大学生竞赛定级方法

基于竞赛难度与能力提高的大学生竞赛定级方法通过问卷调查量化学生对竞赛难度与竞赛后能力提高的感受,运用迭代协同过滤算推荐算法来预测每个学生对竞赛的打分,合成了竞赛难度与竞赛后能力提高.进而结合竞赛综合性以及竞赛影响力,得到竞赛的综合分数.最后,利用Kmeans算法对各种竞赛的得分数聚类,最终实现竞赛定级.力求在竞赛定级时体现公平性、后效性、引导性以及合理性.

对大肠杆菌异源表达乳酸片球菌素包涵体复性方法的研究

本研究对E.coli BL21(DE3)基因工程菌高效表达的乳酸片球菌素融合蛋白包涵体进行了提取和变性溶解,并采用稀释复性,反稀释复性,透析复性,CTAB辅助复性和CTAB和β-CD结合辅助复性五种方法对乳酸片球菌素融合蛋白包涵体的变性溶液进行了复性的研究。结果表明CTAB和β-CD结合辅助复性的复性方法优于其它的复性方法,可以实现以较高浓度的包涵体变性蛋白溶液,较小体积的复性液来获得较高浓度的复性产物和达到相对稳定的复性率。