蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎模型大鼠IL-6的影响

目的探讨蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠胃黏膜及血清白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法将18只SD雄性大鼠随机分成空白对照组、模型组及蜥蜴散治疗组,除空白对照组外,均采用水杨酸钠和铜绿假单胞菌交替灌胃的方法制备CAG模型,治疗组用蜥蜴散治疗。通过对大鼠胃黏膜病理组织学、免疫组化法观察以及血清IL-6的检测,探究蜥蜴散对大鼠胃黏膜及血清IL-6的分子生物学水平影响。结果空白对照组胃黏膜结构正常,慢性萎缩性胃炎模型组胃黏膜可见不同程度萎缩,经蜥蜴散治疗组病理结果均有改善;免疫组化法对照组可见IL-6大量表达,CAG模型组IL-6表达明显下降,蜥蜴散治疗组IL-6表达回升;血清IL-6定量分析显示,对照组与治疗组血清IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05);模型组与对照组、模型组与治疗组血清IL-6水平差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果表明,血清IL-6水平在模型组中减少而在治疗组中恢复。结论蜥蜴散治疗CAG与IL-6相关。

基于裸磁珠体系检测血清淀粉样蛋白A浓度方法的建立与效果评估

传统链霉亲和素磁珠体系及酶促发光体系中通常存在生物素干扰强、发光率低、特异性差的缺陷。基于此,以裸磁珠为载体偶联血清淀粉样蛋白A(serumamyloidA,SAA)抗体,以吖啶酯作为发光标记物,依据双抗夹心原理,建立了一种快速测定SAA的方法,并对该方法的检测性能(包括:空白限、检测限、线性范围、精密度验证、干扰试验、HOOK效应、方法学比较等)进行了评估。结果表明,SAA抗体与裸磁珠成功偶联;该方法空白限为0.6 mg·mL^(−1),检出限为1.0 mg·mL^(−1);线性范围为1~100 mg·mL^(−1)(R^(2)>0.990);在精密度方面,以CV表示的重复性、室内精密度均<10%;血红蛋白、胆红素、甘油三酯对临床样本的干扰检测结果相对偏差均<10%。Bland-Altman偏倚分析表明,该方法检测值与西门子试剂的测量值差异基本在95%CI的一致性界限内波动,回归分析结果显示有较好的相关性(R^(2)=0.987)。上述结果表明,研究所建立的裸磁珠-吖啶酯发光检测体系性能参数可满足临床检测要求,适用于血清中SAA的快速检测。

山羊关节炎-脑炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,采用PCR方法扩增山羊关节炎-脑炎病毒CA蛋白编码基因序列,然后克隆至原核表达载体pET-28a(+),诱导含有重组载体pET-28a(+)-CA的大肠杆菌BL21(DE3)表达重组蛋白rHis-CA。采用Ni柱亲和层析方法纯化重组蛋白rHisCA,并以纯化的rHis-CA为包被抗原建立检测山羊关节炎-脑炎血清抗体的间接ELISA方法。结果表明重组蛋白rHis-CA以包涵体形式表达,具有良好的反应原性。所建立的rHis-CA间接ELISA方法的最适抗原包被质量浓度和血清稀释度分别为0.4 μg/mL和1∶100,血清阴阳性的D_(450)临界值为0.45。该方法仅与山羊关节炎-脑炎病毒阳性血清发生特异性反应,不与山羊痘病毒、蓝舌病病毒和口蹄疫病毒阳性血清发生交叉反应。对来自陕西地区的48份山羊血清进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA和琼脂凝胶免疫扩散试验的阳性检出率分别为35.41%(17/48)和31.25%(15/48)。对来自天津地区2个山羊场的240份山羊血清样本进行CAEV抗体检测,rHis-CA ELISA方法和琼脂凝胶免疫扩散试验的检测结果均为阴性。

食管鳞癌长链非编码RNA谱的筛选和共表达关联分析

目的构建食管鳞癌lncRNA差异表达谱,并进行共表达关联分析。方法选取2015年6—9月在安阳市肿瘤医院胸外科行食管癌根治术的6例食管鳞癌患者为研究对象,取食管鳞癌组织及匹配的癌旁正常组织,采用微阵列分析食管鳞癌lncRNA和mRNA差异表达谱,进行共表达关联分析、靶基因预测、转录因子预测,以及基因本体论(GO)、通路(Pathway)和疾病(Disease)富集分析。结果共筛选出差异表达lncRNA 2052个,其中670个上调,1382个下调;差异表达mRNA 3240个,1732个上调,1508个下调(差异倍数为2倍以上变化且P<0.05)。共表达关联分析显示lncRNA与m RNA可形成复杂的调控网络。靶基因预测结果显示,共有792个差异表达lncRNA通过顺式和反式2种方式调控靶基因,410个lncRNA有cis-调控的靶基因,370个lncRNA有trans-调控的靶基因,12个lncRNA同时有cis-和trans-调控的靶基因。GO分析结果显示,lncRNA可能调控的靶基因主要参与细胞过程、单组织过程和代谢过程等生物过程,黏合、催化活性和分子功能调节剂等分子功能,细胞器、细胞和细胞组分等细胞成分;Pathway分析显示,靶基因主要参与叶酸单碳池、补体和凝血级联和o-糖生物合成等通路。Disease分析显示,靶基因可能参与少淋巴细胞综合征(BLS)1型、进行性肌阵挛性癫痫、口腔和牙齿疾病以及局部常染色体隐性低肥厚症等。转录因子预测结果显示,lncRNA基因可能存在多种转录调控方式。结论ESCC组织的lncRNA表达谱相较于癌旁正常组织存在明显差异,lncRNA可能参与食管癌的发生发展,从而为食管癌的诊断和治疗提供新的依据。

正交试验优选暑热宁口服液挥发性活性物质的提取工艺

目的：优选暑热宁口服液挥发性活性物质提取工艺。方法：以麝香草酚与香荆芥酚含量为考察指标,以蒸馏液体积倍数、浸泡时间、蒸馏速度为考察因素,通过单因素考察与正交试验优选暑热宁口服液挥发性活性物质提取工艺。结果：优选工艺为1.5倍提取蒸馏液浸泡12 h,蒸馏速度30~40滴/min。结论：优选的工艺合理、可行,可为工业化生产提供参考。

^131I-RGD—BSA—PCL用于非小细胞肺癌荷瘤裸鼠SPECT／CT显像及抑瘤作用

目的探讨^131I—RGD—BSA—PCL核素纳米载体对非小细胞肺癌荷瘤裸鼠模型SPECT／CT显像效果及其对肿瘤的抑制作用。方法构建纳米脂质体^131I—RGD—BSA—PCL及^131I—BSA—PCL，通过荧光共聚焦显微镜观察该载体在非小细胞肺癌细胞系H460的靶向性结合及细胞摄取情况；采用氯氨T法标记核素纳米载体：流式细胞术观察核素纳米载体对肿瘤细胞的杀伤作用。构建荷瘤裸鼠模型，研究核素纳米载体在荷瘤裸鼠体内的组织分布、肿瘤体积变化及各组荷瘤裸鼠SPECT／CT断层显像。结果给药后1和8h，H460细胞质和细胞核对RGD—BSA—PCL、BSA—PCL两种纳米载体均有明显摄取。Na^131I、^131I-BSA—PCL及^131I—RGD—BSA—PCL对H460细胞的早期凋亡率分别为（33．3±12．5）％、（68．4±8．0）％和（70．5±12．2）％。荷瘤裸鼠体内实验中，给药后24和72h，肿瘤^131I—RGD-BSA-PCL摄取率均高于^131I-BSA—PCL（t=9．53、5．03，P〈0．01）。给药后23d．^131I-RGD-BSA-PCL肿瘤体积抑制最明显（t=126．44，P〈0．01）。SPECT／CT显示，给药后21d，^131I-RGD—BSA—PCL在肿瘤内信号强度明显强于^131I-BSA-PCL。结论^131I标记的纳米脂质体^131I—RGD—BSA—PCL对H460细胞裸鼠移植瘤具有明显的抑瘤作用，且^131I—RGD—BSA—PCL能较长时间停留在肿瘤中。

基于pH响应的纳米载体制备及其黏液渗透性能研究

目的 制备pH响应的渗透性纳米载体（pMPPs）,观察其在小鼠生殖道黏膜组织中的分布情况,并评估其在肿瘤细胞中的放射治疗增敏效果.方法 合成含pH敏感腙键的双亲性高分子,并使用超声乳化法制备pMPPs.同时,分别选取疏水性高分子聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）和不含腙键的双亲性高分子PLGA-聚乙二醇,按同样方法制备黏附性纳米载体（MPs）和渗透性纳米载体（MPPs）.利用荧光显微镜观察荧光染料Cy5.5标记的3种纳米载体在小鼠生殖道黏膜组织中的分布情况.采用噻唑蓝实验检测纳米载体对人宫颈癌细胞HeLa的毒性.将含pH敏感腙键的双亲性高分子与油溶性金纳米颗粒结合形成多包裹纳米载体,再采用噻唑蓝实验评估其在HeLa细胞中的放射治疗增敏效果.结果 成功制备了pMPPs,粒径相对均一且分散性良好.荧光显微镜观察结果显示,pMPPs不仅具有良好的黏液渗透性能,还有效提高了纳米载体在小鼠生殖道黏膜组织中的进胞效率.噻唑蓝实验结果显示,当载体的质量浓度达0.80 mg/ml时,pMPPs组HeLa细胞存活率仍高于90％,且均高于MPs和MPPs组,表明pMPPs具有良好的生物安全性.在不同剂量的X射线照射下,希美纳溶液（0.80 mg/ml）组HeLa细胞存活率均高于相同质量浓度的多包裹纳米载体组（4 Gy：82.90％比61.79％;8 Gy：64.75％和42.36％）,表明相比于临床中常用的放射治疗增敏剂希美纳,多包裹纳米载体可更有效地增强肿瘤细胞对放射治疗的敏感性,从而提高放射治疗对肿瘤细胞的杀伤力.结论 本研究解决了纳米载体在黏膜组织应用中黏液渗透性能与细胞内吞设计上的冲突,为黏膜组织疾病的治疗提供了新思路.