基于豚鼠主动全身过敏实验和大鼠脑缺血再灌注炎症反应比较灯盏花素注射液和合成灯盏乙素注射液的安全性和有效性

[目的]比较盏花素注射液(BI)和合成灯盏乙素注射液(SSI)的安全性和抗炎疗效。[方法]豚鼠主动全身过敏实验:将豚鼠随机分为阴性对照组(氯化钠注射液),阳性对照组(牛血清白蛋白),BI低(BI-L,5 mg/kg)、高(BI-H,20 mg/kg)剂量组,SSI低(SSI-L,5 mg/kg)、高(SSI-H,20 mg/kg)剂量组,隔日致敏1次,共3次,于末次致敏后第12天激发,观察豚鼠是否出现过敏反应症状;抗大鼠脑缺血再灌注炎症反应实验:制备SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分成假手术组、模型组、尼莫地平组(1 mg/kg)、BI-L(2.1 mg/kg)、BL-H(4.2 mg/kg)、SSI-L(2.1 mg/kg)、SSI-H(4.2 mg/kg)剂量组,分别在连续给药1、3、7、14 d后检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)含量。[结果]豚鼠主动全身过敏实验:BI-L组1只弱阳性,5只阳性;BL-H组3只阳性,3只强阳性;SSI-L组5只阳性,1只强阳性;SSI-H组1只阴性,1只弱阳性,4只阳性。抗大鼠脑缺血再灌注炎症反应实验:与模型组相比,给药1 d后,BI-L组脑梗死体积显著减小(P<0.01),给药14 d后,尼莫地平组、BI-L组和SSI-H组脑梗死体积显著减小(P<0.05或P<0.01)。给药1 d后,TNF-α含量除SSI-H组,其他给药组均显著降低(P<0.05或P<0.01);IL-6、IL-1β含量除SSI-L组,其他给药组均显著降低(P<0.05或P<0.01)。给药3 d后,IL-10含量除SSI-L组,其他给药组均显著增加(P<0.05或P<0.01)。给药14 d后,TNF-α、ICAM-1、IL-1β含量给药组均显著降低(P<0.05或P<0.01);IL-6含量除BI-L组,其他给药组均显著降低(P<0.05或P<0.01);IL-10含量除BI-L组,其他给药组均显著增加(P<0.05或P<0.01)。[结论]SSI高剂量组过敏反应发生率较低,其安全性更好;BI低剂量组起效更快,SSI高剂量组作用更加持久。

玄归滴丸治疗实验性小鼠溃疡性结肠炎的作用研究

目的探究玄归滴丸对实验性小鼠溃疡性结肠炎(UC)的治疗作用,为指导玄归滴丸的临床应用提供实验数据支撑。方法将72只小鼠随机分成正常组,模型组,阳性药(柳氮磺吡啶肠溶片溶液)组,玄归滴丸高、中、低剂量组。模型组及给药组自由饮用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液(每只鼠7mL·d^(-1)),连续7 d,诱导小鼠UC模型。造模的同时,正常组与模型组灌胃给予等量的生理盐水,其他各给药组灌胃给予相对应的药物(0.1 mL/10 g)。观察记录实验小鼠一般状况;采用HE染色法观察结肠病理变化;ELISA法测定炎性因子TNF-α、IL-1β及PGE2水平。结果小鼠一般状况结果显示正常组体重、毛发及粪便均正常,未见便血,状态良好;模型组在给予5%DSS后第2日即出现大便稀软,随后出现便血及至纯血便;各给药组的小鼠大便性状与模型组相似,但症状较轻。小鼠结肠HE病理组织切片结果发现,模型组结肠上皮绒毛不完整,结肠黏膜多处糜烂溃疡,且有大量炎性细胞浸润;玄归滴丸干预后结肠炎性反应损伤轻于模型组;炎症介质ELISA结果显示模型组炎性因子水平相比于正常组呈上升趋势,玄归滴丸干预后PGE2、IL-1β含量与模型组比较,均呈下降趋势,TNF-α含量给药组较模型组低,且差异具有统计学意义(P<0.01)。结论玄归滴丸可以通过降低结肠组织炎症反应,改善结肠组织病理变化,对溃疡性结肠炎有一定的治疗作用。

丹参及其活性成分舒张血管的作用网络和差异靶标分析

丹参是一味常用中药,数百年来广泛用于对心血管疾病的治疗。总结近10年国内外的研究成果,按照丹参的不同有效成分,第1次从血管舒张的角度说明丹参的作用机制;并结合运用IPA(生物反应路径分析)构建的血管舒缩网络通路图,从细胞和组织水平分析丹参对血管活性作用靶标的差异,以说明丹参在血管活性研究方面的现状和前景。

基于实时细胞分析技术的乌头碱致心律失常体外评价技术研究

目的以乌头碱为工具药,建立基于实时细胞分析(real-time cell analysis,RTCA Cardio)系统的体外心律失常检测技术,为抗心律失常药物的研发提供可靠方法。方法利用八导生理记录仪从整体动物水平检测乌头碱对实验大鼠心律的影响;体外培养心肌细胞,首先利用RTCA方法考察心肌细胞的接种密度,利用RTCA Cardio系统监测乌头碱对心肌细胞搏动的影响,分析细胞的CI值、细胞搏动频率、振幅、不规则性节律等。结果八导生理记录仪检测50 mg·g^-1乌头碱对整体动物的影响结果发现乌头碱可诱发室速、室颤、RR间期缩短以及心率增加等心律失常的表现;RTCA Cardio系统显示2~8μmol·L^-1乌头碱可呈剂量依赖性的导致心肌细胞搏动频率增加、搏动幅度降低、搏动状态异常等心律失常现象。结论RTCA Cardio系统可以快速、敏感、准确检测乌头碱诱导的心肌细胞心律失常现象,为抗心律失常药物的研发提供了方法学参考。

芍药苷促进糖尿病创面愈合

目的 研究芍药苷(paeoniflorin,PA)对糖尿病创面愈合作用及作用机制。方法 采用糖尿病小鼠全层皮肤切除夹板模型,HE染色及Masson染色观察创面组织形态改变;免疫荧光法检测血管新生。PA干预人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)和小鼠成纤维细胞(fibroblast,FB),MTS、BrdU和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;Matrigel实验检测HUVECs成管能力,qPCR检测FB中Collagen Ⅲ、Fibronectin、α-SMA mRNA的变化;免疫荧光法观察α-SMA在FB中的表达部位及表达量的变化。结果 与db/db模型组相比,PA组创面肉芽组织,胶原形成和新生毛细血管密度明显增加(P<0.01)。PA对HUVECs增殖无影响,可明显促进HUVECs迁移和成管的能力(P<0.05 ,P <0.01)。PA可明显增加FB增殖和迁移的能力,明显增加Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA的表达(P<0.05 ,P <0.01),对Fibronectin mRNA的表达无影响,同时可增加α-SMA的荧光强度。结论 芍药苷可能通过促进细胞外基质生成和血管新生,促进糖尿病创面愈合。

川芎嗪通过抑制ERK5/P70S6K/Rac1信号通路发挥抗血小板活化及血栓形成作用

目的探讨川芎嗪抗血小板活化作用及其分子机制。方法运用缺氧诱导血小板损伤模型。采用比浊法检测血小板聚集,检测血小板在纤维蛋白原上的黏附,流式细胞术检测血小板CD62p的表达,CM-H2DCFDA染色检测血小板ROS的释放,Western blotting法检测ERK5、P70S6K、Rac1的磷酸化蛋白表达量,采用体内血栓形成试验检测川芎嗪对血栓的作用。结果川芎嗪可有效抑制血小板聚集,与模型组相比差异明显(P<0.01、P<0.001);与模型组比较,川芎嗪可显著抑制血小板在纤维蛋白原上的黏附,ROS的释放(P<0.05、P<0.001);同时川芎嗪能显著抑制血小板CD62p的表达,ERK5、P70S6K、Rac1的磷酸化,抑制血栓形成(P<0.05)。结论川芎嗪可通过ERK5/P70S6K/Rac1信号通路抑制血小板聚集、黏附、释放,从而抑制血栓形成。

脑心通胶囊对Ⅱ型糖尿病小鼠伤口愈合的作用

[目的]研究脑心通胶囊(NaoXinTong,NXT)对Ⅱ型糖尿病小鼠伤口愈合的作用和作用机制。[方法]将8-12周db/+小鼠db/db小鼠适应性喂养1周后,按体质量随机分组db/+Saline组、db/db Saline、db/db NXT(0.7 g/kg)组,建立切除伤口夹板模型,每天灌胃给药并记录小鼠体质量,每两天监测空腹血糖并对伤口拍照测量伤口面积,分别在术后7、16 d取小鼠伤口处皮肤组织,小鼠伤口处皮肤组织进行切片或立即冷冻保存。HE染色观察伤口边缘肉芽组织的面积和上皮化,Lectin免疫荧光检测伤口周围毛细血管的密度,新鲜组织用来提取蛋白并用Western Blotting检测VEGF、PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT、eNOS/p-eNOS在伤口边缘的表达。[结果]与db/db Saline组相比,db/db NXT组小鼠伤口愈合率增加,肉芽组织面积和上皮化增加,伤口周围的血管密度和VEGF的表达增加,PI3K/AKT/eNOS的磷酸化增加,但在伤口愈合过程中糖尿病小鼠的体质量和空腹血糖没有变化。[结论]脑心通胶囊通过激活PI3K/AKT/eNOS信号通路增加VEGF表达促进血管新生,增加肉芽组织的形成和上皮化,加速Ⅱ型糖尿病小鼠伤口愈合。

疏血通注射液抗血小板活化作用机制研究

目的建立缺氧及氧化应激模型,探讨疏血通注射液抗血小板活化的作用机制。方法制备SD大鼠血小板悬液,建立1%O2诱导缺氧模型和500μmol/L过氧化氢诱导氧化应激模型。将血小板分为空白对照组、模型组、疏血通注射液低浓度组、疏血通注射液中浓度组、疏血通注射液高浓度组。采用比浊法检测血小板聚集;流式细胞术检测血小板CD62p的表达;蛋白免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶5(ERK5)和p70核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)的磷酸化蛋白表达;CM-H2DCFDA染色并检测血小板活性氧(ROS)的释放,观测血小板在纤维蛋白原上的黏附情况。结果与模型组相比,疏血通注射液可显著抑制血小板聚集,抑制血小板在纤维蛋白原上的黏附以及ROS的释放。同时疏血通注射液能有效抑制血小板CD62p的表达并抑制ERK5、P70S6K的磷酸化。结论疏血通注射液可能通过ERK5/P70S6K信号通路抑制血小板聚集、黏附、释放,从而抑制血栓形成。

血管新生在心血管疾病领域的文献计量学及可视化分析

目的使用CiteSpace软件分析近20年血管新生在心血管领域的研究热点、前沿动态和发展趋势。方法对SCI-Expanded数据库中2000~2019年血管新生在心血管领域的相关文献,通过CiteSpace进行文献可视化,对学科领域分布,作家、国家、机构之间的合作网络,关键词的共现网络以及作者、文献、期刊间的共被引网络进行分析。结果检索到相关文献6684篇,被引频次277549次。在2000~2013年间发文量快速增长,2014~2019年发文量处于稳定。学科领域主要是与周围性血管疾病、血液等学科相关。发文量较多的国家为美国、日本、德国、中国,且中国在2013~2019年发文量突发性增长。高产机构为哈佛大学、斯坦福大学等。发表和引文数最多的期刊为Circulation和Circulation Research。根据关键词和文献共引分析得到研究热点主要是祖细胞/干细胞的治疗心肌梗死等相关疾病,近5年miRNA、外泌体囊泡、炎症、巨噬细胞等与血管新生之间关系的研究突发性增长,成为该领域的研究前沿,启发人们通过研制或发现在这些方面有促进作用的相关药物,影响血管新生,从而改善心血管疾病。结论文章研究结果可为今后从事血管新生在心血管领域的研究人员快速掌握知识基础,了解该领域的热点和预测未来发展趋势提供依据。

千层纸素A动员内皮祖细胞促进血管新生作用机制研究

目的探讨千层纸素A通过动员内皮祖细胞发挥促进血管新生作用的机制。方法将30只SPF级健康ICR小鼠制备单侧后下肢缺血模型,按照随机双盲的方法,将后下肢缺血模型造模成功的小鼠分成三组:模型组、千层纸素A组(Oroxylin A)和辛伐他汀组(Sim),每组各10只。采用激光多普勒点扫描成像系统分别检测小鼠术前、术后和给药3、7、14、28d血流量,采用HE染色观察术后28 d缺血腓肠肌组织形态变化;采用流式细胞术检测给药1、3、7d的外周血中内皮祖细胞数量;蛋白芯片检测术后3、7、14d缺血腓肠肌组织CXC型趋化因子配体16(CXCLl6)以及单核细胞趋化性蛋白1(MCP-1)的表达;Western blot检测后下肢缺血小鼠给药3、7、14d基质金属蛋白酶3(MMP3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;采用ELISA检测血浆中肝细胞生长因子(HGF)的表达。结果在后下肢缺血模型小鼠中,千层纸素A组和辛伐他汀组较模型组相比,外周血中GFP+/Sca-1+/Flk-1+内皮祖细胞的数量显著升高,且千层纸素A组小鼠腓肠肌病理形态较模型组明显改善。与模型组比较,给药后3d,千层纸素A组小鼠血浆中HGF的表达显著升高,给药后7d,缺血组织中MMP3、MMP9的蛋白表达量均显著升高。同时EPCs的细胞因子CXCL16及MCP-1的蛋白表达在给药后第7d显著升高。结论千层纸素A通过促进内皮祖细胞介导血管新生,从而发挥促缺血组织血流恢复及损伤修复作用。

桃叶珊瑚苷通过激活ERβ途径抑制心肌细胞凋亡

目的探讨桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)抑制心肌细胞凋亡发挥抗心肌缺血损伤从而改善急性心肌梗死后心功能的作用与可能机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎法制作小鼠急性心肌缺血(myocardial infarction,MI)模型。采用超声心动、Masson染色检测小鼠心功能及梗死面积。建立肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)/放线菌酮(cycloheximide,CHX)诱导的大鼠H9c2心肌细胞损伤模型。采用IncuCyte活细胞成像、TUNEL、Western blot等方法探讨了AU的抗心肌细胞损伤作用及其作用机制。结果研究结果表明,AU可以改善心肌梗死小鼠的心功能,降低梗死面积,减少由TNF-α/CHX诱导的心肌细胞凋亡,降低caspase-3蛋白质表达,上调Bcl2/Bax比值;同时AU可使ERβ(estrogen receptorβ,ERβ)表达升高,且雌激素受体β抑制剂可阻断AU的抗凋亡作用。结论该研究证实,AU可以通过抑制心肌细胞凋亡发挥抗心肌缺血损伤从而改善急性心肌梗死后心功能的作用,其部分作用机制与ERβ通路的激活有关。

线粒体DNA与心肌梗死后的炎症反应

近年来,线粒体DNA(mtDNA)作为一种免疫调节物质引起了人们的广泛关注。在正常生理状态下,线粒体DNA被包裹在线粒体的双层膜结构中。但在病理条件下,它会被释放到细胞质从而激活先天免疫信号通路,包括toll样受体、炎性小体和环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路,这些信号通路参与触发下游信号和刺激产生效应分子。

基于CiteSpace软件可视化分析:国内外心肌纤维化在心血管领域的文献计量学研究

目的心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病向终末期心脏病发展的共同病理过程,且在临床上主要导致心力衰竭(心衰)后死亡。对国内外近20年的心肌纤维化在心血管领域的相关文献进行文献计量学研究,利用CiteSpace软件行可视化分析,探索该研究领域的研究现状、热点、前沿及发展趋势。方法以Web of Science核心合集数据库为文献来源,检索2000~2019年心肌纤维化的相关文献研究。应用CiteSpace软件对关键词进行共现网络、共聚类及Burst分析,对国家、机构和作者进行合作网络分析,对作者、期刊和被引文献进行共被引网络分析,并绘制相应的可视化图谱后进行分析。结果本研究共检索到5997篇相关文献。分析结果表明2000~2019年,发文总量和所占百分比均呈稳步增长趋势;研究主要分布学科领域是医学影像学,发文量最高国家为美国(2136篇),发文量最高的机构为Harvard University(127篇),发文量最高的作者为Diez J,而共被引最高的作者为WEBER KT,达614次,共被引最高期刊为CIRCULATION(4255次),共被引文献最高的文献在2010年发表在CIRCULATION,被引用212次;关键词共现图谱结果提示研究热点为心肌梗死导致的心肌纤维化,心肌肥大和心衰,关键词共聚类分析及Burst分析揭示研究前沿为新型心脏核磁共振无创检测并对心肌纤维程度分级、弥散性心肌纤维化及对其定量、心肌纤维化生物标志物和揭示预后的指标,此外,脂联素和Gal-3也是该领域的可能研究方向。结论心肌梗死后心肌纤维化诱发心衰,及其伴随的炎症和肥大病理过程是研究热点。医学影像学方面的研究,即新型心脏核磁共振无创检测在体心肌纤维程度并对其进行定量为其研究热门学科。心肌纤维化生物标志物和患者的预后及其生活质量及定量、弥散性心肌纤维化、射血分数保留性心衰、T1Mapping、脂联素和Gal-3是该领域的研究前沿和未来可能的发展方向。

以表观遗传修饰为靶标的中药治疗心血管疾病的相关研究进展

表观遗传学研究是在DNA序列没有发生改变的情况下表型或基因表达的遗传变化,强调基因和环境相互作用,已成为生命科学中普遍关注的前沿领域。动脉粥样硬化和高血压等心血管疾病(CVDs)属于常见病和多发病,其发病机制不仅与多基因遗传相关,也受环境因素影响,因此表观遗传修饰对心血管疾病发病和防治起着重要作用。目前,中药对表观遗传的修饰作用正日益受到重视。中医药表里同治理论对心血管疾病临床用药具有积极指导作用,而近期的研究发现某些中药单体成分和复方对心血管疾病关键靶标的甲基化、乙酰化及microRNA表达均具有显著调节作用。为了从分子水平更加深入研究中药对于心血管疾病的作用机制,阐明治病机理,对挖掘治疗心血管疾病方面的中药提供合理设计和筛选依据,本文对近年来相关研究进行如下综述。

基于实时细胞分析系统的速效救心丸抗心律失常作用研究

目的利用实时细胞分析(RTCA)Cardio系统,通过体外细胞实验及整体动物实验评价速效救心丸抗心律失常作用。方法培养原代大鼠乳鼠心肌细胞,接种于E-Plate Cardio 96,分析3600/孔、20000/孔以及90000/孔接种浓度心肌细胞的细胞指数(CI)和搏动图形;MTT法检测速效救心丸(10、20、40、80、160μg/m L)对原代心肌细胞活力的影响;考察速效救心丸(160μg/m L)对乌头碱(8μmol/L)诱发心律失常的心肌细胞搏动频率、搏动幅度的影响;舌下iv乌头碱50μg/kg制备大鼠心律失常模型,利用八导生理记录仪观察速效救心丸(54、270 mg/kg)对Ⅱ导联心电图的影响。结果20000/孔为最佳接种浓度,CI值在观察时间内成对数生长,细胞形成同步搏动,波形正常且持续时间长;在10~160μg/m L浓度范围内,速效救心丸对心肌细胞活力均没有明显影响。RTCA Cardio系统检测结果显示,与模型组比较,速效救心丸能显著降低心肌细胞搏动速率(P<0.01)、显著增加心肌细胞的搏动幅度(P<0.01)。动物实验发现,速效救心丸能有效对抗乌头碱诱导的心律失常、改善乌头碱对实验动物RR间期的抑制作用和对心率的促进作用、降低乌头碱诱导的室颤发生率(P<0.01、0.001)。结论RTCA Cardio系统能实现对心肌细胞的实时监测,可以检测心肌细胞的搏动情况;速效救心丸能有效对抗乌头碱诱导的心律失常。

玄归滴丸对大鼠急性胃溃疡的保护作用

目的考察玄归滴丸对乙醇致大鼠急性胃溃疡的保护作用并探讨其作用机制。方法 65只SD大鼠随机分为对照组、模型组、西咪替丁(50 mg/kg)组和玄归滴丸低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg,分别为临床等效剂量的2、4、8倍)组。给药组ig给予相应的受试药物,对照组及模型组ig相同剂量的生理盐水,连续7 d,除了对照组外,其余各组均ig无水乙醇制备乙醇型胃溃疡模型。造模1 h后处死大鼠,取胃组织进行大体形态观察,并进行HE染色,光镜下观察病理形态变化;试剂盒法检测胃组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)和解痉多肽(SP)含量。结果玄归滴丸组的胃黏膜损伤程度、病理变化与模型组比较均有不同程度的减轻。与模型组比较,玄归滴丸中剂量组SOD和低、中剂量组MPO水平均显著升高(P<0.05、0.01);中剂量组MDA水平显著降低(P<0.05);各剂量组TNF-α水平呈降低趋势;低剂量组PGE2含量显著升高(P<0.05);高剂量组SP含量显著降低(P<0.05)。结论玄归滴丸对乙醇致急性胃溃疡实验大鼠的胃黏膜损伤有较好的保护作用,其作用机制可能与抗氧化、抗炎作用有关。