猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二重PCR检测方法的建立

通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检测到TGEV和PEDV,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)等均无扩增,其检测TGEV、PEDV的极限为104拷贝/μL;用该方法对临床收集的68份疑似病毒性腹泻仔猪粪便和肠道组织样本进行检测,结果表明本试验建立的二重PCR方法具有特异性强、灵敏度高等特点,能用于临床诊断及流行病学调查。

猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪A群轮状病毒多重PCR检测方法的建立

为了能够同时快速准确检测出猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Porcinetransmissible gastroenteritis virus,TGEV）及猪A群轮状病毒（Porcine rotavirus,RV）,试验通过设计引物、优化PCR条件构建了一个能同时检测出TGEV、PEDV及RV的多重PCR方法。结果表明：该方法能同时检测到TGEV、PEDV及RV,而对猪瘟病毒（CSFV）、猪呼吸与繁殖综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）、细小病毒（PPV）、日本乙型脑炎病毒（JEV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）等无扩增,TGEV、PEDV及RV的最低检测浓度为1×102拷贝/μL。说明试验设计的多重PCR方法不仅省时、省力,而且具有敏感性高、特异性强等优点。