针刺辅助治疗重症急性胰腺炎的研究现状及展望

重症急性胰腺炎(SAP)是临床常见的急腹症之一,以其起病急、病情复杂多变、致死率高的特点,一直以来受到医学界广泛关注。单纯西医治疗具有一定的局限性,目前中西医结合在治疗SAP方面取得良好效果,并已成为治疗SAP的重要手段,中医在其中发挥着重要作用。针刺疗法是中医治疗方法中的重要组成部分,针刺辅助治疗SAP在镇痛、促进肠蠕动、抑制炎症反应、保护胰外器官等方面治疗效果明显,且针刺具有操作简便、廉价、无任何不良反应等特点,因此近年来得到越来越广泛的应用,具有良好的临床推广价值。大量的临床和基础研究都证实,针刺可以通过不同的作用机制对SAP发挥辅助治疗作用,且针刺辅助治疗在针刺方法、针刺时间、针刺穴位等方面尚缺乏统一标准。鉴于此,本文总结了近年来针刺辅助治疗SAP相关机制研究和临床研究,为进一步拓展针刺的临床治疗范围提供参考。

脓毒症急性肺损伤的中西医结合治疗概述

脓毒症急性肺损伤是临床常见的急危重症,其发病机制复杂,病死率高,严重影响患者预后。目前西医治疗主要以早期控制感染、液体复苏、血管活性药物及机械通气等手段为主,但临床上单纯的支持疗法效果欠佳。而中医理论中“整体观念”和“阴平阳秘”与脓毒症的病理变化特性相契合,故中医中药在脓毒症急性肺损伤的治疗中发挥重要作用。本文对脓毒症急性肺损伤的中西医结合治疗现状进行总结概括,针对其不同时期采取中西医结合防治策略,通过调动机体内源性保护系统,促进损伤脏器自限机制的恢复与稳态,以期为脓毒症急性肺损伤乃至临床危重症疾病的治疗带来新思路和策略。

脓毒症肺损伤相关信号转导通路研究进展

脓毒症是由宿主对感染反应失调引起的危及生命的器官功能障碍,作为人体重要器官,肺脏极易在脓毒症时发生损伤,导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发生。脓毒症引起的ARDS发病机制非常复杂,其确切发病机制尚不完全清楚,涉及多个信号通路被激活。本文主要综述目前研究较多的信号通路在脓毒症相关急性肺损伤(ALI)/ARDS中的作用及机制,分析信号通路不同蛋白质和基因之间的相互作用,以及不同信号通路之间的关联性,以期为探寻脓毒症相关肺损伤治疗靶点提供一定理论基础。

电针通过NLRP3/caspase-1通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症大鼠急性肺损伤

目的:观察电针足三里穴和肺俞穴是否通过NLRP3/caspase-1通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症诱导的大鼠急性肺损伤。方法:成年健康雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法分为5组:对照组、模型组、电针组、电针+NLRP3激活剂组、非经非穴电针组,每组6只。采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症模型。电针组选取双侧足三里穴和肺俞穴给予疏密波电针刺激(模型制备前5 d每天进行1次,模型制备过程中每6 h进行1次,30 min/次);非经非穴电针组以相同的参数电针刺激足三里穴和肺俞穴旁开5 mm非经非穴处。于模型制备前30 min电针+NLRP3激活剂组腹腔注射100 mg/kg尼日利亚菌素钠盐。建模后24 h时处死大鼠取肺组织,计算肺湿重/干重(W/D)比值,观察病理学结果并行肺损伤评分;采用ELISA法测定肺组织白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量;采用Western blot法检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cleaved-caspase-1)、N端消皮素-D(GSDMD-N)蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,模型组、电针组、电针+NLRP3激活剂组和非经非穴电针组肺损伤评分、W/D比值、IL-1β含量及IL-18含量均升高,肺组织NLRP3、ASC、cleaved-caspase-1及GSDMD-N蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组肺损伤评分、W/D比值、IL-1β含量及IL-18含量均降低,肺组织NLRP3、ASC、cleaved-caspase-1及GSDMD-N蛋白表达均下调,差异有统计学意义(P<0.05);与电针组比较,电针+NLRP3激活剂组肺损伤评分、W/D比值、IL-1β含量及IL-18含量均升高,肺组织NLRP3、ASC、cleaved-caspase-1及GSDMD-N蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:电针刺激足三里穴和肺俞穴减轻大鼠脓毒症急性肺损伤的机制可能与抑制NLRP3/caspase-1通路介导的经典细胞焦亡途径有关。

血红素加氧酶⁃1通过调控bHLH亮氨酸拉链转录因子E3/高尔基体应激反应减轻小鼠内毒素性急性肺损伤

目的探讨在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中血红素加氧酶⁃1(HO⁃1)对bHLH亮氨酸拉链转录因子E3(TFE3)表达与核转位以及高尔基体应激反应的影响。方法将24只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为4组(每组6只):空白对照组(Ctrl组)、内毒素[脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)]急性肺损伤组(LPS组)、内毒素性急性肺损伤+HO⁃1激动剂氯高铁血红素(Hemin)组(LPS+Hemin组)和Hemin组。Ctrl组尾静脉注射生理盐水0.5 ml;LPS组尾静脉注射LPS 10 mg/kg建立小鼠内毒素性ALI模型;LPS+Hemin组腹腔注射Hemin 50 mg/kg,1 h后尾静脉注射LPS 10 mg/kg建立内毒素性ALI模型;Hemin组腹腔注射Hemin 50 mg/kg。造模12 h后对小鼠进行断颈处死,收取肺组织。苏木精⁃伊红染色(H⁃E染色)观察小鼠肺组织病理学变化并行肺损伤评分;计算肺组织湿重/干重(W/D)值;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡指数;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肺组织白细胞介素(IL)⁃6、肿瘤坏死因子(TNF)⁃α含量;流式细胞仪检测肺组织活性氧(ROS)的含量;免疫荧光染色观察TFE3核转位情况;蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定HO⁃1、TFE3、高尔基体基质蛋白130(GM130)、高尔基体重组和堆叠蛋白65(GRASP65)、囊泡转运蛋白小GTP酶20(RAB20)、突触融合蛋白3(STX3A)、WD重复结构域与磷酸肌醇相互作用蛋白1(WIPI1)的表达水平。结果与Ctrl组比较,LPS组小鼠肺组织病理学损伤加重,肺损伤评分、W/D值及细胞凋亡指数升高,ROS、IL⁃6及TNF⁃α含量明显升高,TFE3表达及核转位增多,HO⁃1、GRASP65、RAB20、STX3A的表达水平增加,WIPI1、GM130表达水平减少(均P<0.05),Hemin组小鼠上述各指标差异无统计学意义(均P>0.05)。与LPS组比较,LPS+Hemin组小鼠肺组织病理学损伤减轻,肺损伤评分、W/D值及细胞凋亡指数下降,ROS、IL⁃6及TNF⁃α含量减少,TFE3表达及核转位减少,HO⁃1、WIPI1、GM130表达水平增加,GRASP65、RAB20、STX3A表达水平减少(均P<0.05)。结论HO⁃1能够减轻内毒素诱导的小鼠ALI,其机制可能与其调控TFE3表达、核转位及高尔基体应激反应有关。

肠道菌群在脓毒症相关性脑病中作用的研究进展

脓毒症是一种危及生命的器官功能障碍综合征,由宿主对感染的反应失调引起 [1]。全球每年有3 000多万脓毒症患者,每年造成的死亡人数在500万左右,是ICU患者死亡的最常见原因之一 [2]。器官功能障碍是脓毒症的主要并发症,其中脓毒症相关性脑病(SAE)发生率较高,约为70%,主要表现为从意识混乱到谵妄甚至昏迷等不同程度的脑功能障碍 [3]。SAE的发生显著延长了脓毒症患者ICU住院时间,并增加其死亡率和长期后遗症的发生率 [4]。肠道菌群与人体疾病的关系是近十年来研究的热点。研究表明,肠道菌群通过调节免疫系统、影响宿主易感性和炎症反应在脓毒症的发生和发展中起重要作用 [5]。研究显示,肠道菌群可能通过代谢产物改变血脑屏障、调节神经炎症反应、影响神经递质释放等参与肠-脑循环,从而影响认知功能 [6]。基于此,本文就肠道菌群在SAE中的作用以及基于肠道菌群治疗SAE的策略进行综述。

电针刺联合清胰陷胸汤治疗重症急性胰腺炎所致急性呼吸窘迫综合征的临床观察

目的观察电针刺联合清胰陷胸汤治疗重症急性胰腺炎(SAP)所致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的临床效果。方法选择2021年2月至2022年4月天津市南开医院重症医学科收治的120例SAP所致ARDS且辨证属于结胸里实证的患者,随机分为中药组和针药组,每组60例。中药组在常规西医治疗基础上给予清胰陷胸汤,针药组在中药组的基础上给予电针刺治疗,两组持续治疗7 d。主要结局指标为入住重症监护病房(ICU)后28 d内无呼吸机天数;次要结局指标为机械通气时间、ICU监护时间、总住院时间、腹内压恢复时间、器官功能评分、氧合指数(PaO2/FiO2)、血清炎症因子、血淀粉酶、尿淀粉酶等。结果与中药组比较,针药组患者入ICU后28 d内无呼吸机天数明显长于中药组〔d:22.10±2.29比20.97±2.31,P<0.05,优势比(OR)=1.24,95%CI可信区间(95%CI)为1.053~1.460,P<0.05〕,机械通气时间、ICU监护时间、总住院时间、腹内压恢复时间均明显缩短〔机械通气时间(d):5.90±2.29比7.03±2.31,ICU监护时间(d):8.07±1.89比12.08±2.23,总住院时间(d):19.55±6.82比22.28±5.19,腹内压恢复时间(d):6.05±1.81比8.45±1.76,均P<0.05〕。两组治疗7 d Murray评分和急性胰腺炎严重程度床旁指数(BISAP)评分均较治疗前明显降低,而PaO2/FiO2较治疗前明显升高,且治疗7 d时针药组Murray肺损伤评分显著低于中药组〔分:0.50(0.33,0.75)比1.00(1.00,1.33),P<0.05〕,PaO2/FiO2显著高于中药组〔mmHg(1 mmHg≈0.133 kPa):390.75±27.73比330.02±42.34,P<0.05〕。随治疗时间延长,两组治疗后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)等炎症因子及血清血淀粉酶和尿淀粉酶水平均持续降低,且治疗7 d时针药组炎症因子水平均明显低于中药组〔TNF-α(ng/L):38.20±10.00比45.35±5.09,IL-6(ng/L):0.95±0.44比7.42±1.39,CRP(mg/L):8.55±2.79比36.20±13.97,均P<0.05〕。亚组分析显示,胆道系统疾病是针药联合治疗ARDS的机械通气时间≥7 d的危险因素(OR=2.728,95%CI为1.293~5.754)。结论与单纯应用中药相比,针药结合治疗能够更好地减轻SAP所致ARDS患者临床症状,促进患者康复,减轻全身炎症反应,值得临床推广。

右美托咪定对脓毒症小鼠急性肺损伤时DNA甲基转移酶表达的影响

目的评价右美托咪定对脓毒症小鼠急性肺损伤时DNA甲基转移酶表达的影响。方法清洁级健康雄性C57BL/6小鼠48只,6~8周龄,体质量20~25 g,采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(Sham组)、假手术+右美托咪定组(Sham+DEX组)、脓毒症组(Sepsis组)和脓毒症+右美托咪定组(Sepsis+DEX组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症模型。于制备模型前30 min,Sham+DEX组和Sepsis+DEX组腹腔注射右美托咪定0.05μg/g(生理盐水稀释至0.5 ml),Sham组和Sepsis组给予0.5 ml生理盐水。于盲肠结扎穿孔后24 h时处死小鼠取肺组织,确定肺湿质量/干质量(W/D)比值,HE染色法观察肺组织病理学结果,计算肺组织损伤评分,采用ELISA法测定IL-6、TNF-α、HMGB1含量、SOD、MPO活性和MDA含量,比色法测定全基因组DNA甲基化水平,采用Western blot法检测DNA甲基化转移酶(DNMTl、DNMT3a、DNMT3b)的表达。结果与Sham组比较,Sepsis组和Sepsis+DEX组小鼠肺组织损伤评分、肺W/D比值、IL-6、TNF-α、HMGB1、MDA含量、MPO活性和全基因组DNA甲基化水平升高,SOD活性降低,DNMT1和DNMT3a表达上调(P<0.05),Sham+DEX组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与Sepsis组比较,Sepsis+DEX组小鼠肺组织损伤评分、肺W/D比值、IL-6、TNF-α、HMGB1、MDA含量、MPO活性和全基因组DNA甲基化水平降低,SOD活性升高,DNMT1和DNMT3a表达下调(P<0.05)。结论右美托咪定减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制与抑制DNMT1和DNMT3a表达上调有关。

PIAS调控PPARγ的SUMO化修饰在小鼠内毒素性急性肺损伤内源性保护机制中的作用

目的评价小泛素相关修饰物(SUMO)E3连接酶(PIAS)调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的SUMO化修饰在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)内源性保护机制中的作用。方法实验Ⅰ清洁级野生型雄性C57BL/6小鼠24只,6~8周龄,体质量18~22 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):对照组(C组)、ALI组、ALI+PPARγ诱导剂TZD组(ALI+T组)、ALI+TZD+SUMO化抑制剂漆树酸组(ALI+T+A组)。尾静脉注射LPS 15 mg/kg制备内毒素性ALI模型。ALI+T+A组注射LPS前1 h时腹腔注射漆树酸5 mg/kg;ALI+T组和ALI+T+A组注射LPS前30 min时腹腔注射TZD 50 mg/kg。给予LPS 12 h后处死小鼠取肺组织,测定湿重/干重(W/D)比值,光镜下观察病理学结果,并行肺损伤评分;分别采用Western blot法和PCR法测定PIAS1、PIAS2、PIAS3和PIASy及其mRNA的表达。实验Ⅱ体外培养的小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S细胞)采用随机数字表法分为4组(n=5):对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS+PIAS2 siRNA组(L+P组)和LPS+Con siRNA组(L+C组)。C组常规培养,余3组给予10μg/ml LPS刺激MH-S细胞,制备内毒素攻击模型。L+P组和L+C组于加入LPS前48 h时分别转染50 nmol/L PIAS2 siRNA或Con siRNA。加入LPS孵育24 h时收集细胞,检测细胞活力;采用流式细胞术检测肺泡M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞水平,计算M1型/M2型比值;采用Western blot法检测PIAS2和PPARγ表达,采用免疫共沉淀法测定PPARγ-SUMO1共表达;采用PCR测定TNF-α和IL-10的mRNA表达。结果实验Ⅰ与C组比较,其余3组肺损伤评分和肺组织W/D比值升高,PIAS2及其mRNA表达上调(P<0.05);与ALI组比较,ALI+T组和ALI+T+A组肺损伤评分和肺组织W/D比值降低,PIAS2及其mRNA表达上调(P<0.05);与ALI+T组比较,ALI+T+A组肺损伤评分和肺组织W/D比值升高,PIAS2及其mRNA表达下调(P<0.05)。4组间肺组织PIAS1、PIAS3和PIASy及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。实验Ⅱ与C组比较,其余3组细胞活力降低,PPARγ表达和PPARγ-SUMO1共表达上调,M1型和M2型巨噬细胞水平、M1/M2型比值升高,TNF-αmRNA表达上调,IL-10 mRNA表达下调,L组和L+C组细胞PIAS2表达上调(P<0.05);与L组比较,L+P组细胞活力下降,PIAS2、PPARγ表达和PPARγ-SUMO1共表达下调,M1型巨噬细胞水平和M1型/M2型比值升高,TNF-αmRNA表达上调,IL-10 mRNA表达下调(P<0.05),L+C组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与L+C组比较,L+P组细胞活力下降,PIAS2、PPARγ表达和PPARγ-SUMO1共表达下调,M1型肺泡巨噬细胞水平和M1型/M2型比值升高,TNF-αmRNA表达下调,IL-10 mRNA表达上调(P<0.05)。结论PIAS2调控PPARγ的SUMO化修饰是小鼠内毒素性ALI的内源性保护机制,可能与抑制巨噬细胞向M1型极化,减轻炎症反应有关。

Sestrin2在脓毒症致多器官功能障碍中的保护作用

脓毒症是一种严重威胁人类健康和生命的感染性疾病,可导致危及生命的多器官功能障碍,目前尚缺乏有效的治疗方法.Sestrin2作为一种新型高度保守的应激诱导蛋白,与脓毒症发病过程密切相关.对Sestrin2进行干预具有潜在治疗价值,已成为当前研究的热点.文章综述Sestrin2的生物学功能、在脓毒症中的作用机制及其对脓毒症致多器官功能障碍的保护作用,以期为脓毒症治疗提供新的思路和见解.

敲除CCR2基因对肺气肿模型小鼠单核细胞型髓源性抑制细胞向肺脏迁移的实验研究

目的探讨CC类趋化因子受体2 ( C-C motif chemokine receptor 2,CCR2)对肺气肿小鼠模型中单核细胞型髓源性抑制性细胞(monocytic myeloid-derived suppressor cells,M-MDSC)向肺脏迁移的影响。方法将10只雄性野生型(wild type,WT)C57BL/6小鼠随机分为正常对照组和肺气肿模型组,每组5只。分别应用H&E染色和马松(Masson)染色方法观察两组小鼠肺组织病理特征;流式细胞技术检测两组小鼠肺组织中M-MDSC比例以及M-MDSC表达CCR2水平。采集WT小鼠骨髓细胞,体外刺激诱导生成髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs),标记羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)后分别过继转移给WT小鼠(WT组)和基因敲除肺气肿小鼠(CCR2-/-组),每组各3只,流式细胞术观察CFSE+ M-MDSC在两组受体鼠肺脏等组织的分布情况。结果 H&E染色结果显示肺气肿模型小鼠较对照组小鼠肺泡腔直径明显扩大,肺泡壁破坏增加,肺泡间隔断裂融合;Masson染色结果显示肺气肿模型小鼠肺组织中出现胶原纤维沉积。与对照组相比,肺气肿模型组小鼠M-MDSC占CD11b+细胞百分比显著增加,M-MDSC表达CCR2水平显著增加,差异具有统计学意义[(6.40±1.58)%比(12.96±3.79)%,(6424.56±2280.61)比(15660.02±945.95),t=3.575、7.481,P值均<0.05]。过继转移实验发现,与WT组相比,CCR2-/-组小鼠脾脏、肠系膜淋巴结、肺脏、派式结、血液中CFSE+ M-MDSC的百分率显著降低,差异具有统计学意义[%:(68.30±3.68)比(39.80±7.14),(47.17±7.98)比(21.53±4.82),(31.73±13.77)比(6.08±2.33),(42.87±4.38)比(0.01±0.00),(88.73±3.18)比(62.87±13.15),t=6.155、4.761、3.187、16.970、3.313,P值均<0.05]。WT组与CCR2-/-组小鼠骨髓中CFSE+ M-MDSC的百分比差异无统计学意义(P>0.05)。结论敲除CCR2基因能够有效抑制M-MDSC向肺气肿小鼠肺脏及肺外组织的聚集,提示CCR2通路可能参与肺气肿的发生发展进程。

NAD^(+)介导的SIRT1去乙酰化活性在小鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的评价烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))介导的沉默信息调节因子1(SIRT1)去乙酰化活性在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中的作用。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠25只,6~8周龄,体重20~25 g,野生(WT)型10只,NAD^(+)合成途关键酶烟酰胺单核苷酸腺苷酸转移酶1(NMNAT1)敲除(KO)型15只,采用随机数字表法,将WT型小鼠分为2组(n=5):对照组(WT+C组)和ALI组(WT+ALI组);将KO型小鼠分为3组(n=5):对照组(KO+C组)、ALI组(KO+ALI组)和ALI+NAD^(+)前体物质烟酰胺单核苷酸(NMN)组(KO+ALI+NMN组)。静脉注射LPS 15 mg/kg制备内毒素性ALI模型,KO+ALI+NMN组注射静脉注射LPS前1 h腹腔注射NMN 500 mg/kg。各对照组给予等容量生理盐水。注射LPS或生理盐水后12 h时,取腹主动脉血标本行血气分析,后处死小鼠留取肺组织,测定肺湿重/干重(W/D)比值,光镜下观察肺组织病理学改变,并行肺损伤评分;采用ELISA法检测肺组织IL-6、IL-1β、TNF-α含量,采用分光光度计法测定NAD^(+)含量,采用Western blot法测定肺组织SIRT1、乙酰化NF-κB(Ac-NF-κB)、乙酰化p53(Ac-p53)、乙酰化叉头框蛋白O1(Ac-FoxO1)、乙酰化过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子(Ac-PGC1α)水平。结果与各C组比较,各ALI组pH值和PaO_(2)降低,PaCO_(2)、肺W/D比值、肺损伤评分、肺组织IL-6、IL-1β、TNF-α和NAD^(+)含量升高,SIRT1表达上调,Ac-NF-κB、Ac-p53、Ac-FoxO1和Ac-PGC1α表达下调(P<0.05)。与WT+ALI组比较,KO+ALI组pH值和PaO_(2)降低,PaCO_(2)、肺W/D比值、肺损伤评分、肺组织IL-6、IL-1β和TNF-α含量升高,NAD^(+)含量降低,SIRT1表达下调,Ac-NF-κB、Ac-p53、Ac-FoxO1和Ac-PGC1α表达上调(P<0.05)。与KO+ALI组比较,KO+ALI+NMN组pH值和PaO_(2)升高,PaCO_(2)、肺W/D比值、肺损伤评分、肺组织IL-6、IL-1β和TNF-α含量降低,NAD^(+)含量升高,SIRT1表达上调,Ac-NF-κB、Ac-p53、Ac-FoxO1和Ac-PGC1α表达下调(P<0.05)。结论NAD^(+)介导的SIRT1去乙酰化活性增强参与了小鼠内毒素性ALI时的内源性保护机制。

电针对大鼠内毒素性急性肺损伤时高尔基体应激的影响

目的评价电针对大鼠内毒素性急性肺损伤时高尔基体应激的影响。方法清洁级雄性SD大鼠20只,2月龄,体重160~185 g。根据随机数字表法分为4组(n=5):对照组(C组)、内毒素组(LPS组)、电针+内毒素组(EA+LPS组)和假电针+内毒素组(SEA+LPS组)。采用静脉注射LPS 5 mg/kg的方法建立内毒素性急性肺损伤模型。造模前1~4 d和模型制备过程中EA+LPS组选取双侧足三里和内关穴进行电针,30 min/次,1次/d。SEA+LPS组将针灸针插入穴位表面,无电流刺激,其他参数同EA+LPS组。建模后6 h时取腹主动脉血样,采用ELISA法检测血清IL-6和TNF-α浓度。处死大鼠取肺组织,光镜下观察肺组织病理改变并评分,计算湿重/干重(W/D)比值,TUNEL法确定细胞凋亡指数,透射电镜观察高尔基体形态改变,WST-1法测定SOD活性,TBA法测定MDA含量,采用Western blot法和RT-PCR法分别检测高尔基体基质蛋白130(GM130)、高尔基体蛋白84(Golgin-84)、高尔基体磷酸化蛋白3(GOLPH3)及其mRNA的表达水平。结果与C组比较,其余3组肺损伤评分、W/D比值、细胞凋亡指数、血清IL-6和TNF-α浓度及肺组织MDA含量升高,SOD活性降低,GM130、Golgin-84及其mRNA表达下调,GOLPH3及其mRNA表达上调(P<0.05),高尔基体肿胀、空泡化。与LPS组比较,EA+LPS组肺损伤评分、W/D比值、细胞凋亡指数、血清TNF-α和IL-6浓度及肺组织MDA含量下降,SOD活性升高,GM130、Golgin-84及其mRNA表达上调,GOLPH3及其mRNA表达下调(P<0.05),高尔基体肿胀及空泡化减轻,SEA+LPS组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针减轻大鼠内毒素性急性肺损伤的机制可能与抑制高尔基体应激有关。

内毒素性急性肺损伤小鼠肺泡巨噬细胞极化时HO-1与PPARγ的关系

目的评价内毒素性急性肺损伤(ALI)小鼠肺泡巨噬细胞极化时血红素氧合酶-1(HO-1)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的关系。方法选择清洁级雄性C57BL/6小鼠30只(野生型小鼠24只和HO-1基因敲除小鼠6只),6~8周龄,体重18~22 g。采用随机数字表法将野生型小鼠分为4组(n=6):对照组(C组)、ALI组、ALI+HO-1激动剂氯高铁血红素(Hemin)组(ALI+H组)和ALI+Hemin+PPARγ拮抗剂T0070907组(ALI+H+T组)。HO-1基因敲除小鼠建立ALI模型为ALI+HO-1-/-组。采用尾静脉注射LPS 15 mg/kg制备内毒素性ALI模型。ALI+H+T组于给予LPS前1 h时腹腔注射T00709071.5 mg/kg;ALI+H组和ALI+H+T组于给予LPS前30 min时腹腔注射Hemin 50 mg/kg。给予LPS 12 h后处死小鼠取肺组织,测定湿重/干重(W/D)比值,观察肺组织病理学结果,并行肺损伤评分;采用流式细胞术检测F4/80+/CD86+标记的M1型肺泡巨噬细胞水平和F4/80+/CD206+标记的M2型肺泡巨噬细胞水平;采用ELISA法测定细胞上清液M1型肺泡巨噬细胞相关基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型肺泡巨噬细胞相关基因精氨酸酶-1(Arg-1)含量;采用Western blot法测定肺组织HO-1和PPARγ表达。结果与C组比较,其余4组肺损伤评分、肺组织W/D比值、CD86和CD206水平、iNOS和Arg-1含量均升高,PPARγ表达上调,ALI组、ALI+H组和ALI+H+T组肺组织HO-1表达上调(P<0.05)。与ALI组比较,ALI+HO-1-/-组肺损伤评分、肺组织W/D比值、CD86和iNOS水平均升高,CD206和Arg-1水平降低,HO-1和PPARγ表达下调,ALI+H组肺损伤评分、肺组织W/D比值、CD86和iNOS水平均降低,CD206和Arg-1水平升高,HO-1和PPARγ表达上调(P<0.05),ALI+H+T组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与ALI+H组比较,ALI+H+T组肺损伤评分、肺组织W/D比值、CD86和iNOS水平均升高,CD206和Arg-1水平降低,PPARγ表达下调(P<0.05),HO-1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论HO-1可通过上调PPARγ的表达,抑制肺泡巨噬细胞向M1型极化,促进其向M2型极化,从而在小鼠内毒性ALI中发挥内源性保护作用。