上皮膜蛋白1真核表达载体的构建及其对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的构建上皮膜蛋白1(EMP1)基因真核表达载体p EGFP-N1-EMP1,探讨EMP1基因对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应(PCR)扩增EMP1基因,双酶切法连接至真核表达载体p EGFP-N1双酶切产物大片段,构建p EGFP-N1-EMP1重组质粒。经测序鉴定后,通过脂质体介导法将p EGFP-N1-EMP1重组质粒和p EGFP-N1空载体转染至人舌鳞状细胞癌Tb3.1细胞,荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测转染后24、48、72 h的EMP1过表达水平。利用Transwell迁移及侵袭实验分析EMP1过表达对Tb3.1细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功克隆EMP1全长基因,经测序分析证实将EMP1基因准确插入真核表达载体p EGFP-N1,转染后细胞可见绿色荧光表达。实时荧光定量PCR结果显示,p EGFP-N1-EMP1重组质粒转染24 h组,Tb3.1细胞中EMP1表达量显著高于p EGFP-N1空载体组、野生型细胞组以及重组质粒转染48 h和72 h组。Transwell迁移及侵袭实验结果显示,EMP1过表达抑制了Tb3.1细胞的迁移和侵袭能力。结论成功构建了EMP1真核表达载体,并在体外证实了EMP1过表达可抑制舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭能力,为进一步研究EMP1基因在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及其分子机制奠定了基础。