热休克蛋白gp96与肿瘤免疫研究进展

热休克蛋白gp96作为分子伴侣参与了肿瘤抗原向MHC-I类分子途径的递呈过程,并与抗原肽形成gp96-肽复合物激活CD8+T淋巴细胞,产生抗肿瘤的特异性免疫反应。此外,还能不依赖于抗原肽通过激活NF-κB信号转导,产生细胞因子和趋化因子,诱导树突状细胞成熟等多种作用而调节非特异性免疫反应。gp96-肽复合物疫苗为肿瘤的免疫治疗提供了新的思路。

干扰素调节因子与Th细胞分化

干扰素调节因子家族是公认的调节干扰素效应的转录因子。近年来研究发现,干扰素调节因子家族各成员之间以及与其它转录因子相互作用,通过调节抗原提呈细胞的功能以及直接作用于Th细胞本身,对Th向Th1或Th2分化起重要作用,可作为肿瘤或过敏性疾病治疗的一个靶点。

shRNA干扰Bmi-1基因表达载体构建及其对膀胱癌5637细胞增殖抑制作用的研究

目的:构建shRNA体内表达载体pGeneClipTM-shRNA,研究抑制Bmi-1基因表达对膀胱癌5637细胞凋亡的影响。方法:构建靶向Bmi-1的shRNA真核表达质粒pGe-neClipTM-B1、pGeneClipTM-B2以及pGene-ClipTM-B-neg(阴性对照质粒),采用脂质体转染试剂转染膀胱癌5637细胞,采用RT-PCR、蛋白质印迹法技术检测转染前后5637细胞中Bmi-1基因表达的变化;利用MTT法检测表达质粒对5637细胞增殖的影响;并利用流式法和蛋白质印迹法技术检测表达质粒对5637细胞凋亡的作用及影响机制。结果:经酶切、测序鉴定,重组质粒均在1 200 bp左右出现酶切条带,符合设计要求。RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,5637细胞经小RNA干扰后Bmi-1的mRNA和蛋白质表达水平明显降低,P<0.05。与阴性对照组和未转染组相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞增殖明显受到抑制,P<0.05。转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率分别为19.95%和27.27%,与未转染组7.23%和阴性对照组6.78%相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率明显增加,P<0.05。结论:减少膀胱癌5637细胞Bmi-1基因的表达可抑制5637细胞增殖并促进细胞凋亡。

Bmi-1 shRNA对膀胱癌5637细胞的侵袭和转移抑制及其机制

目的:探讨特异性抑制Bmi-1基因表达对膀胱癌5637细胞侵袭和转移的影响。方法:将Bmi-1短发夹RNA(shRNA)真核表达载体、脂质体转染膀胱癌5637细胞。Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观察Bmi-1 shRNA对膀胱癌5637细胞侵袭和转移的影响。RT-PCR方法检测Bmi-1 shRNA对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA表达的影响。蛋白质印迹法检测Bmi-1 shRNA对E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)表达的影响。结果:Transwell侵袭实验结果显示,实验组细胞的穿膜细胞数为78.0±5.8,空质粒组为158.0±6.7,未转染组为153.0±4.6。细胞划痕实验结果显示,实验组细胞迁移能力明显降低,P<0.05。RT-PCR结果显示,与不加转化生长因子-β(TGF-β1)组相比,TGF-β1作用后,未转染组和空质粒组中MMP-2表达明显升高,P<0.05。蛋白质印迹结果显示,与不加TGF-β1组相比,TGF-β1作用后,未转染组和空质粒组中E-cadherin表达明显降低,α-SMA表达明显升高,P<0.05。结论:Bmi-1 shRNA可以抑制膀胱癌5637细胞侵袭和转移,其机制是通过阻断TGF-β1促进肿瘤细胞侵袭和转移作用完成的。

差异表达新基因BQ135232 ORF的分子克隆与真核表达

目的研究差异表达新基因BQ135232的结构功能以及真核表达。方法应用生物信息学方法分析BQ135232 mRNA基因序列,初步了解其基本性状,构建表达载体,转染真核细胞(CHO/dhfr^-)。结果BQ135232具备作为免疫原的基本条件,构建表达载体pcDNA3-BQ-ORF-GPI,成功转染CHO/dhfr^-。结论完成差异表达新基因BQ135232的真核表达.为后续的蛋白功能研究奠定基础。