菲律宾蛤仔中一株枯草芽胞杆菌的分离鉴定及生物学特征研究

从健康菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)肝胰脏中分离纯化出一株细菌,命名为G6,通过形态学观察、生理生化特性、16S r DNA序列测定、系统发育分析等方法鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。然后对其生长曲线、耐高温、耐酸性、耐胆盐等生物学特征进行研究。结果表明,G6菌株生长期较长,在26~34 h进入稳定期,具有较强的耐高温、耐酸性、耐胆盐等特性。本研究为枯草芽孢杆菌G6菌株作为水产动物益生菌菌株的开发应用奠定了基础。

养殖半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和过氧化物酶的组织化学定位

目的研究半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)和过氧化物酶(POX)的分布及组织定位。方法取健康半滑舌鳎肝胰、中肾、鳃、头肾、脾和心组织进行固定,冰冻切片后进行酶组织化学染色和光密度定量统计分析。结果 ACP活性部位为棕色,主要分布于肝胰小叶间胆管和静脉,中肾肾小体中的肾小球和肾间质的肾小管,头肾和脾中的巨噬细胞以及心肌层中,在鳃中未见有分布;ALP活性部位被染为蓝紫色,主要分布于肝胰的胰腺腺泡内,中肾肾间质的肾小管,鳃的鳃丝血管和上皮细胞,脾静脉的管壁处和椭圆体,心外膜和肌膜上以及头肾的血窦腔内皮;POX活性部位被染为茶褐色,主要分布于肝胰小静脉和肝血窦内的血细胞,中肾肾间质的血细胞,鳃的鳃丝血管、鳃小片血窦和上皮细胞,头肾、脾内的血细胞以及心的心肌层和血细胞中。ACP活性由大到小依次为心、肝胰、脾、中肾、头肾;ALP活性由大到小依次为中肾、鳃、头肾、脾、心、肝胰;POX活性由大到小依次为脾、头肾、肝胰、中肾、鳃、心。结论 ACP、ALP和POX在半滑舌鳎6种组织中分布特点不同,其活性大小在不同组织中有显著差异。

毛蚶血细胞分类及吞噬功能研究

通过光镜观察毛蚶血细胞形态和结构,对其分类进行研究,分析不同类型血细胞吞噬能力,并研究温度对血细胞吞噬功能的影响。结果鉴定出毛蚶血细胞中有3种类型:(1)大透明细胞,大小为(12.97±1.22)μm,核质比为0.311±0.016,所占比例为(46.40±8.73)%;(2)颗粒细胞,大小为(9.98±1.85)μm,核质比0.390±0.058,所占比例为(41.48±8.63)%;(3)小透明细胞,大小为(7.60±1.17)μm,核质比为0.499±0.049,所占比例为(12.12±4.00)%。毛蚶血细胞在血淋巴液中的平均密度为(7.69±0.98)×106 cell/m L。体外吞噬活性试验表明,大透明细胞和颗粒细胞对酵母聚糖的吞噬率显著高于小透明细胞,吞噬率分别为(61.77±3.30)%、(61.32±3.62)%、(16.59±3.88)%。于15、20、25、30、35℃温度下进行毛蚶血细胞的吞噬试验,结果表明温度变化对血细胞吞噬能力产生明显的影响,30℃条件下,血细胞的吞噬活性最强,吞噬率达到(51.49±4.22)%。

海藻希瓦氏菌感染对半滑舌鳎肠道菌群结构及相关功能基因表达的影响

【目的】明确海藻希瓦氏菌(Shewanella algae)感染对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)肠道菌群结构及相关功能基因表达的影响,揭示肠道菌群和肠道组织相关功能基因在疾病发生及免疫应答过程中的作用机制。【方法】以致病性海藻希瓦氏菌人工感染半滑舌鳎后,采用16S rDNA高通量测序技术探究其肠道菌群组成结构的变化情况,并利用实时荧光定量PCR检测分析半滑舌鳎肠道组织中参与疾病发生和免疫应答相关功能基因的表达规律。【结果】共测序获得118657条有效序列,按97%的序列相似度聚类后得到6732个OTUs。Alpha多样性分析结果显示,Shannon指数和Chao1指数以感染前(CG)的健康半滑舌鳎最高,在感染后12 h(12hpi)最低;感染海藻希瓦氏菌前后半滑舌鳎肠道优势菌门无明显变化,但不同类群的相对丰度发生变化。在属水平上,Elizabethkingia、曼噬甲壳菌属(Chitinophaga)、Brevinema、苯基杆菌属(Phenylobacterium)、假单胞菌属(Pseudomonas)、乳杆菌属(Lactobacillus)、Marivita和雷尔氏菌属(Ralstonia)的相对丰度在CG半滑舌鳎肠道菌群组成中占比最高,希瓦氏菌属(Shewanella)、Petrimonas、Proteiniphilum和Aminobacterium的相对丰度在12hpi的占比最高,食酸菌属(Acidovorax)、芽孢杆菌属(Bacillus)和弧菌属(Vibrio)的相对丰度在感染后24 h(24hpi)的占比最高。半滑舌鳎肠道组织相关功能基因的表达变化表现为:果糖二磷酸醛缩酶A基因(ALDOA)的相对表达量在24hpi时显著高于CG(P<0.05,下同);磷脂酶B1基因(PLB1)、热休克蛋白70 kD蛋白1A基因(HSPA1A)、组氨酸三聚体核苷结合蛋白1基因(HINT1)和γ谷氨酰转移酶1基因(GGT1)的相对表达量显著高于CG和24hpi;海藻糖酶基因(TREH)的相对表达量在12hpi时显著低于CG和24hpi。【结论】半滑舌鳎感染海藻希瓦氏菌后其肠道菌群多样性降低、菌群结构发生变化,肠道组织中免疫功能相关基因(HSPA1A和HINT1)及代谢功能相关酶类基因(ALDOA、PLB1、GGT1和TREH)呈差异表达,说明海藻希瓦氏菌感染引起半滑舌鳎肠道微生态紊乱,且肠道组织中免疫功能相关基因和代谢功能相关酶类基因分别参与机体的免疫应答及疾病发生过程。