脑蛋白水解液对大鼠神经胶质细胞间缝隙连接通讯的研究

目的探讨脑蛋白水解液对大鼠神经胶质细胞间缝隙连接通讯功能的影响。方法由大鼠神经干细胞诱导培养神经胶质细胞至致密单层,分为脑蛋白水解液组、对照组及佛波酯阴性对照组继续培养,利用划痕标记染料示踪技术,以荧光黄染料在细胞间的扩散距离作为评价缝隙连接通讯的指标,测定脑蛋白水解液对大鼠胶质细胞间缝隙连接通讯的影响;采用逆转录-聚合酶链反应法检测脑蛋白水解液组和对照组细胞Cx43 mRNA表达的变化。结果脑蛋白水解液组荧光黄染料5 min扩散距离为(189．80±6．56)μm,对照组扩散距离为(154．70±6．02)μm,组间差异有统计学意义(P<0．01);逆转录-聚合酶链反应检测显示脑蛋白水解液组细胞中Cx43 mRNA相对表达量为0．89±0．13,高于对照组细胞的0．67±0．10,两组比较差异有统计学意义(P<0．01)。结论脑蛋白水解液可通过上调胶质细胞Cx43基因的表达水平,增强大鼠胶质细胞间缝隙连接通讯,这可能是其在机体损伤修复过程中对胶质细胞起保护作用的重要机制。

冷诱导RNA结合蛋白在亚低温下的神经保护作用研究

目的研究亚低温下冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对受损海马神经元的保护作用机制。方法将原代培养的海马神经元分为3组:对照组、损伤组和治疗组。氧糖剥夺55min制作海马神经元损伤模型,损伤组和治疗组在氧糖剥夺55min后分别置于37℃和32℃培养24h。收集各组细胞,MTT检测各组细胞的存活率,荧光定量PCR和Western blot检测CIRP的mRNA和蛋白的表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,损伤组细胞生存率明显下降[(43.3±8.1)%vs(100.0±12.7)%,P<0.05],治疗组细胞生存率明显升高[(71.8±13.6)%vs(43.3±8.1)%,P<0.05],与损伤组比较,治疗组细胞凋亡率下降[(19.5±0.6)%vs(30.7±2.5)%],CIRP的mRNA蛋白表达明显升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论亚低温下CIRP表达水平升高,通过抑制细胞凋亡发挥神经元保护作用,是亚低温脑保护作用途径之一。

蛛网膜下腔出血并迟发性脑血管痉挛大鼠脑能量代谢与脑血流量变化的实验研究

目的探讨实验性蛛网膜下腔出血导致的迟发性脑血管痉挛时脑能量代谢的变化规律,及其与皮质脑血流量(CBF)变化的相关性。方法50只雄性SD大鼠随机分为对照组和蛛网膜下腔出血第1、3、5、7天组,应用非抗凝自体动脉血枕大池两次注血法制备蛛网膜下腔出血大鼠模型;另5只大鼠用于颅内血液大体分布的观察。应用微透析仪监测各组大鼠脑组织间液中葡萄糖(Glu)、乳酸(Lac)及丙酮酸(Pyr)含量,并计算乳酸/丙酮酸比值;激光多普勒血流仪监测各组大鼠皮质脑血流量;于光学显微镜及透射电子显微镜下观察基底动脉血管壁的病理学改变。结果(1)5只用于观察颅内血液大体分布的大鼠中4只蛛网膜下腔出血模型鼠血液主要分布于基底池、脚间池及额叶底面,亚甲蓝与血液混合物主要沉积于颅底,同时在脑室及纵裂池亦可见血液分布;余1只注入人工脑脊液后未发生颅内出血及血液沉积。表明蛛网膜下腔出血动物模型制备成功。(2)与对照组相比,蛛网膜下腔出血组大鼠葡萄糖及丙酮酸含量明显降低(P<0.01);乳酸/丙酮酸比值明显升高(P<0.01),以第5、7天组升高最为明显(P<0.01);第5天组乳酸含量亦明显升高(P<0.01)。(3)激光多普勒监测显示,蛛网膜下腔出血组大鼠脑血流量减少率高于对照组(P<0.05),其中第5天组减少最为显著,与其他各亚组比较差异有统计学意义(P<0.05);脑血流量变化与乳酸/丙酮酸比值、乳酸水平的改变呈正相关(r=0.721,0.477;均P<0.01),与葡萄糖、丙酮酸水平的改变呈负相关(r=0.447,0.579;均P<0.01)。结论微透析指标与脑血流量变化具有一致性,可作为蛛网膜下腔出血脑组织间液生化指标的动态监测,用于预测迟发性脑血管痉挛的发生。

人外周血内皮祖细胞分离和诱导分化的实验研究

目的探讨人外周血内皮祖细胞和单个核细胞分离培养、诱导向内皮祖细胞分化的方法与鉴定。方法采取人外周血抗凝,用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离外周血中的内皮祖细胞和单个核细胞,于体外以细胞因子诱导单个核细胞向内皮祖细胞分化,用免疫荧光法和流式细胞仪分离鉴定单个核细胞向内皮祖细胞分化的细胞特异性标志。结果外周血内皮祖细胞和单个核细胞共同培养3d大部分贴壁密集生长,培养6d梭形细胞增多,培养12d收获细胞进行鉴定。Dil标记乙酰化低密度脂蛋白摄取率为(70.00±11.21)%,AC133,CD31,CD34,血管内皮生长因子受体鄄2和血管性假血友病因子免疫荧光染色阳性。流式细胞仪分类计数,AC133、CD31、CD34和血管内皮生长因子受体鄄2阳性细胞分别为95.80%、87.60%、1.27%和96.40%。结论外周血循环中的内皮祖细胞和单个核细胞共同培养,诱导后者分化的内皮祖细胞具有祖细胞特性且诱导分化率高。

颅脑创伤基础与临床研究十年回顾

针对颅脑创伤（TBI）救治的基础与临床研究，始终是近年来学术界关注的重点。虽然，在21世纪的最初10年该领域未能出现里程碑式的突破性进展，但在与其相关的诸多领域内，医学工作者仍然取得了可喜的进步。本文将对此进行简要回顾、总结、展望。

微血管减压术与非手术治疗老年原发性三叉神经痛的对比分析

目的对比微血管减压术与非手术治疗老年原发性三叉神经痛的有效性和安全性。方法共133例> 75岁的老年原发性三叉神经痛患者分别行微血管减压术(MVD组,80例)和非手术治疗(非手术治疗组,53例,包括脉冲射频术38例、立体定向伽马刀放射治疗10例、针灸治疗5例),McGill疼痛问卷(MPQ)评价疼痛缓解程度,世界卫生组织生活质量量表(WHOQoL-100)评价生活质量,并记录术后并发症,包括面部感觉迟钝、头痛、恶心呕吐、肺炎、颅内感染、脑脊液漏、深静脉血栓形成、不完全性面瘫、听力缺失、运动障碍等。结果 MVD组患者79例(98.75%)疼痛完全缓解、1例(1.25%)疼痛部分缓解,非手术治疗组8例(15.09%)疼痛完全缓解、33例(62.26%)疼痛部分缓解、12例(22.64%)疼痛无缓解,组间差异有统计学意义(χ~2=84.241,P=0.000)。随访55.80(35.74,63.48)个月,MVD组复发率低于非手术治疗组[8.75%(7/80)对35.85%(19/53);χ~2=16.558,P=0.000],生活质量优于非手术治疗组[WHOQoL-100评分(27.82±2.10)分对(22.19±7.22)分;t=1.202,P=0.039]。两组患者术后面部感觉迟钝、头痛、恶心呕吐等并发症发生率均较高,肺炎、颅内感染、脑脊液漏、深静脉血栓形成、不完全性面瘫、听力缺失、运动障碍等并发症少见,无一例死亡,其中,MVD组术后面部感觉迟钝发生率低于非手术治疗组[8.75%(7/80)对86.79%(46/53);χ~2=81.005,P=0.000]。结论微血管减压术治疗老年原发性三叉神经痛安全、有效,因此建议除非无法耐受全身麻醉,原发性三叉神经痛患者均应首选微血管减压术。

重型颅脑创伤大鼠后期脑水肿研究及牛磺酸转运体的作用

目的研究牛磺酸转运体(Tau T)在牛磺酸调节重型颅脑创伤大鼠后期脑水肿中的作用。方法将40只大鼠按随机数字表法分为4组:假手术组(Sham组)、脑外伤组(TBI组)、牛磺酸预防组(Pre-Tau组)和牛磺酸治疗组(Tau组)。液压冲击法制作重型颅脑创伤大鼠模型。Pre-Tau组和Tau组分别在造模前或后给予120 g/L的牛磺酸溶液,其他两组给予等量的等渗生理盐水。7 d后用干湿重法检测脑组织中脑水含量,实时荧光定量PCR和West-ern Blot方法检测Tau T和水通道蛋白(AQP4)的m RNA表达及蛋白含量。结果与Sham组相比,TBI组脑水含量、AQP4的m RNA和蛋白表达水平均显著升高,Tau T的m RNA和蛋白表达水平显著降低。与TBI组比较,Pre-Tau组和Tau组脑水含量、AQP4的m RNA和蛋白表达水平显著降低、Tau T的m RNA表达明显升高;Tau组Tau T的蛋白表达明显升高;Pre-Tau组Tau T的蛋白表达有所升高,但差异无统计学意义。AQP4的m RNA和蛋白表达水平与脑水含量呈正相关(r分别为0.621和0.457),AQP4的m RNA与蛋白表达亦呈正相关(r=0.459)。结论牛磺酸通过提高重型颅脑创伤大鼠后期Tau T的表达水平,降低脑水含量和AQP4的表达,发挥神经元保护作用。

周细胞与阿尔兹海默病的相关研究进展

阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)是以认知、学习和记忆能力的下降或丧失为主要临床特征的疾病,严重威胁我国中老年人的健康。近年来血管因素在AD的发生、发展中越来越受到关注。周细胞(pericytes)作为血管壁细胞的成分之一,和内皮细胞、星形胶质细胞共同构成血脑屏障(blood-brain barrier,BBB),参与多种调节功能,维持着脑组织内环境的稳定,对AD等神经退行性疾病起重要作用。为此本文综述了周细胞的特性和生理功能,并就周细胞与阿尔兹海默的相关研究进展做一综述。

微小RNA在缺血再灌注损伤中的作用研究

在缺血性疾病的发生发展过程中,对组织造成损伤的主要因素,不是缺血本身,而是恢复血液供应后,过量的自由基攻击,重新获得血液供应的组织内的细胞,引起组织细胞的二次损伤,这种损伤叫做＂缺血再灌注损伤＂。

TAUT转基因大鼠的行为学及血项指标的研究

目的:研究脑特异性表达牛磺酸转运体(TAUT)转基因大鼠模型(TauT-tg大鼠)的认知能力和血项指标的变化。方法:选择TauT-tg大鼠和阴性大鼠(NON-transgenic,NTG大鼠),利用水迷宫实验检测其学习认知能力,并取心脏血,检测其总蛋白、白蛋白、碱性磷酸酶的变化,以及血项白细胞、红细胞计数、血红蛋白、血小板等30项血常规指标的变化,并取大脑组织对皮层和海马进行电镜观察。结果:与NTG大鼠比较,TauT-tg大鼠总体定位航行潜伏期、空间探索等没有显著差异,而TauT-tg-雄性大鼠第5天在平台象限里的距离时间占比率显著缩短;血项检查:TauT-tg雌性大鼠的总蛋白、白蛋白均低于NTG雌性大鼠,碱性磷酸酶没有区别;而雄性大鼠各项指标无显著区别;TauT-tg和NTG大鼠的各项血常规指标没有显著性差异,但相同组内比较,雄性大鼠的白细胞计数、红细胞计数等均要显著高于雌性大鼠,血红蛋白、血小板等指标无显著性差别。电镜分析TauT-tg和NTG大鼠的神经元及细胞器等超微结构无显著差异。结论:TAUT的转入,可能提高雄性大鼠的认知能力,对一般血项指标没有影响,但可能造成雌性大鼠的营养不良。

中枢神经系统TauT基因敲除大鼠的构建及对线粒体DNA氧化损伤影响

目的利用CRISPR/Cas9和Cre-loxP技术相结合构建牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)在中枢神经系统中条件性敲除大鼠,并对其脑组织线粒体mtDNA及线粒体呼吸链酶活性进行初步研究。方法利用CRISPR/Cas9和Cre-loxP技术获得TauT基因第5外显子两端含有loxP位点的杂合子大鼠(TauT^(loxP/WT))。将获得的TauT^(loxP/WT)大鼠与Nestin-Cre大鼠交配,经繁殖和鉴定最终获得神经特异性TauT基因敲除大鼠(TauT^(loxP/loxP/Cre+))。通过Real-time PCR、Westen blot、免疫组化对TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠进行基因和蛋白表达检测,用HE染色观测其脑组织形态,并对脑组织mtDNA拷贝数和线粒体呼吸链酶(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ/Ⅴ)活性进行检测。结果与野生型大鼠相比,TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠脑组织中TauT基因和蛋白表达显著降低,TauT基因在中枢神经系统被成功敲除,模型构建成功;HE染色显示TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠脑细胞数量和密度有所降低,而老年TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠脑中细胞病变更加明显。此外,与野生型大鼠相比,TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠脑组织线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ酶活性显著降低,但mtDNA拷贝数却明显上升。结论利用CRISPR/Cas9和Cre-loxP技术成功了构建中枢神经系统TauT基因敲除大鼠模型,并初步验证了此模型对脑组织及其线粒体呼吸链酶和mtDNA的影响,为研究牛磺酸及TauT对脑组织的分子机制提供了新的模型平台。

机器学习在脑卒中诊断与治疗中的应用进展

随着人工智能技术的迅速发展,机器学习算法广泛应用于脑卒中诊断、治疗、预后各阶段,并表现出巨大的应用潜力。本文从机器学习算法研究,机器学习算法在脑卒中诊断与分类诊断、结局预测、风险因素识别等方面总结机器学习算法在脑卒中诊断与治疗中的应用现状并展望未来发展方向。

亚低温对颅脑创伤大鼠脑线粒体活性氧和ATP酶合成能力的影响

目的:研究亚低温治疗对颅脑创伤(TBI)大鼠线粒体活性氧(ROS)生成和ATP酶合成能力的影响。方法:72只动物随机分为假手术组、常温TBI组(肛温36℃～37℃)、亚低温TBI组(肛温31℃～33℃,亚低温持续2h),后2组利用液压打击(FPI)制作中度TBI模型。各组于脑外伤后2h,24h,3d和7d断头取伤侧大脑组织,差速离心法提取伤侧脑线粒体,酶荧光法检测线粒体ATP合成能力,荧光法测定线粒体ROS的生成。结果:常温TBI组脑创伤后线粒体ATP合成能力显著下降,24h降至最低,至7d时仍显著低于假手术组,ROS在各时间点均显著升高,3d时为最高。亚低温TBI组线粒体ATP合成能力在各时间点均高于常温TBI组,除2h外,其他时间点ROS低于常温TBI组。结论:颅脑创伤后线粒体ATP合成能力显著下降,ROS显著升高,亚低温可以改善线粒体ATP酶合成能力,抑制活性氧大量生成,从而保护脑组织。

下调microRNA-1对H_2O_2诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的研究下调microRNA(miRNA,miR)-1在H2O2诱导的心肌细胞损伤中的保护作用及其机制。方法将大鼠H9c2心肌细胞株分为4组,Blank组、NC组、H2O2组和H2O2+AS-miR-1组。Blank组不做任何处理,NC组细胞转染随机合成的miRNA阴性对照片段;H2O2组和H2O2+AS-miR-1组分别为不转染和转染miR-1 inhibitor(AS-miR-1)的H2O2细胞损伤组。采用定量PCR方法检测各组miR-1表达水平,MTT和流式细胞术检测细胞生存率和凋亡情况,利用生物信息学预测miR-1的靶基因,荧光定量PCR和Western Blot的方法检测靶基因Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况。结果 Blank组和NC组相比较,各个指标差异均无统计学意义。H2O2组细胞的miR-1 mRNA表达水平显著升高,生存率降低,凋亡增加,Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低。转染AS-miR-1,可以降低H2O2诱导的心肌细胞损伤,提高细胞生存率,降低细胞凋亡率,上调Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。结论下调miR-1表达可以通过升高凋亡抑制因子Bcl-2的表达水平降低H2O2诱导的心肌细胞凋亡,发挥心肌细胞保护作用。

红细胞参数和血浆蛋白对脑梗死早期进展及预后的影响

目的探讨脑梗死患者红细胞分布宽度及血浆白蛋白水平对脑梗死进展、预后及再发的影响。方法分析105例脑梗死患者临床资料,将病情在早期呈逐渐进展或阶梯式加重的患者归为进展型卒中组,其余归为完全型卒中组;根据脑梗死发生3个月、18个月后m RS评分情况分为短期和远期预后良好组及预后不良组;以18个月内是否再发脑梗死分再发组和未再发组。比较不同分组情况下患者的红细胞参数和血浆蛋白水平。结果进展型卒中组较完全型卒中组平均红细胞体积(f L:85.92±4.50 vs 83.79±4.64,t=2.164,P<0.05)、红细胞分布宽度(f L:13.50±2.45 vs 11.90±2.90,t=2.694,P<0.01)和球蛋白(g/L:27.46±4.33 vs 24.79±4.03,t=3.029,P<0.01)高,白蛋白低(g/L:39.00±3.86 vs 42.89±4.45,t=4.242,P<0.01),差异均有统计学意义;高红细胞分布宽度、低白蛋白水平是进展型卒中的危险因素;短期预后不良组红细胞分布宽度高于预后良好组(f L:13.90±2.45 vs 12.00±2.12,t=2.905,P<0.01);红细胞分布宽度与脑梗死3个月、18个月后m RS评分正相关(P<0.01)。结论高红细胞分布宽度和低白蛋白的脑梗死患者进展型卒中发生率增加,红细胞分布宽度对预测脑梗死预后具有一定的参考价值。

颅脑创伤后期大鼠代谢型谷氨酸受体5表达变化及牛磺酸治疗作用

目的探讨颅脑创伤后期(第7天)大鼠脑组织代谢型谷氨酸受体5(m Glu R5)表达变化,以及牛磺酸治疗作用。方法液压脑损伤打击仪制备液压打击颅脑创伤大鼠模型,采用随机数字表法将30只无特定病原体级Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、颅脑创伤组和牛磺酸治疗组(各10只),干湿重法检测大鼠脑组织含水量,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting法检测水通道蛋白4(AQP4)和m Glu R5 m RNA和蛋白表达变化。结果与对照组相比,颅脑创伤组大鼠脑组织含水量(t=4.893,P=0.002)、AQP4 m RNA(t=6.523,P=0.000)和蛋白(t=4.366,P=0.008)表达水平升高,m Glu R5m RNA(t=5.776,P=0.001)和蛋白(t=3.945,P=0.014)表达水平降低;经牛磺酸治疗后,大鼠脑组织含水量(t=2.151,P=0.140)、AQP4 m RNA(t=1.144,P=0.432)和蛋白(t=0.367,P=0.804)降至正常水平,m Glu R5 m RNA(t=1.824,P=0.216)和蛋白(t=1.185,P=0.414)升至正常水平。相关分析显示,脑组织含水量与m Glu R5 m RNA(r=-0.617,P=0.014)和蛋白(r=-0.665,P=0.007)呈负相关,与AQP4蛋白呈正相关(r=0.658,P=0.008)。结论牛磺酸可以升高颅脑创伤后期(第7天)大鼠脑组织m Glu R5表达水平,降低脑水肿和脑组织含水量,具有抑制性神经递质作用。

脑蛋白水解物中多肽组分的高效毛细管电泳分析

目的 利用高效毛细管电泳法比较2种水解方法提纯的脑蛋白水解物中的多肽组分,同时监测进口脑蛋白水解物注射液的多肽组分分布.方法 采用固相萃取法提取脑组织中的多肽成分,以PACE/A5500型高效毛细管电泳仪对进口脑蛋白水解物注射液和本实验室提取的脑组织匀浆物进行比较.结果 进口脑蛋白水解物注射液中多肽成分大部分集中在＞14400区域,本实验室提纯的脑蛋白水解物成分中多肽多集中在相对分子质量6000 ～ 14 400区域,且纯度及含量均较高.结论 高效毛细管电泳法可有效地对脑蛋白水解物注射液中多肽组分进行分析和比较,2种提纯方法对脑蛋白的裂解能力相差不大.

Oct4通过类泛素修饰途径维持胶质瘤干细胞增殖潜能

目的研究类泛素蛋白(SUMO)与肿瘤干细胞"干性"诱导基因Oct4共同维持胶质瘤干细胞于持续增殖状态的分子机制。方法采用极低密度细胞接种法培养C6胶质瘤肿瘤干细胞克隆球,血清还原+免疫荧光方法验证肿瘤干细胞分化能力。实验设对照组、无义组和SUMO1组。持续测量克隆球直径,免疫荧光方法检测Ki67、CD133、巢蛋白和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况,Western blot法检测Oct4和SUMO1的表达水平。结果肿瘤细胞克隆球被血清诱导分化后高表达胶质细胞标记蛋白GFAP。与对照组和无义组比较,SUMO1组细胞克隆球直径增长速度、Ki67、CD133、巢蛋白阳性率明显降低(P<0.05),GFAP阳性率明显升高[(57.35±7.87)%vs(1.09±0.27)%,(0.87±0.21)%,P<0.05],SUMO1组游离及共价结合状态的SUMO1及Oct4明显降低(P<0.05)。结论 Oct4通过与SUMO1共价结合共同维持胶质瘤干细胞持续增殖潜能。