冷诱导RNA结合蛋白在亚低温下的神经保护作用研究

目的研究亚低温下冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对受损海马神经元的保护作用机制。方法将原代培养的海马神经元分为3组:对照组、损伤组和治疗组。氧糖剥夺55min制作海马神经元损伤模型,损伤组和治疗组在氧糖剥夺55min后分别置于37℃和32℃培养24h。收集各组细胞,MTT检测各组细胞的存活率,荧光定量PCR和Western blot检测CIRP的mRNA和蛋白的表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,损伤组细胞生存率明显下降[(43.3±8.1)%vs(100.0±12.7)%,P<0.05],治疗组细胞生存率明显升高[(71.8±13.6)%vs(43.3±8.1)%,P<0.05],与损伤组比较,治疗组细胞凋亡率下降[(19.5±0.6)%vs(30.7±2.5)%],CIRP的mRNA蛋白表达明显升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论亚低温下CIRP表达水平升高,通过抑制细胞凋亡发挥神经元保护作用,是亚低温脑保护作用途径之一。

中枢神经系统TauT基因敲除大鼠的构建及对线粒体DNA氧化损伤影响

目的利用CRISPR/Cas9和Cre-loxP技术相结合构建牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)在中枢神经系统中条件性敲除大鼠,并对其脑组织线粒体mtDNA及线粒体呼吸链酶活性进行初步研究。方法利用CRISPR/Cas9和Cre-loxP技术获得TauT基因第5外显子两端含有loxP位点的杂合子大鼠(TauT^(loxP/WT))。将获得的TauT^(loxP/WT)大鼠与Nestin-Cre大鼠交配,经繁殖和鉴定最终获得神经特异性TauT基因敲除大鼠(TauT^(loxP/loxP/Cre+))。通过Real-time PCR、Westen blot、免疫组化对TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠进行基因和蛋白表达检测,用HE染色观测其脑组织形态,并对脑组织mtDNA拷贝数和线粒体呼吸链酶(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ/Ⅴ)活性进行检测。结果与野生型大鼠相比,TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠脑组织中TauT基因和蛋白表达显著降低,TauT基因在中枢神经系统被成功敲除,模型构建成功;HE染色显示TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠脑细胞数量和密度有所降低,而老年TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠脑中细胞病变更加明显。此外,与野生型大鼠相比,TauT^(loxP/loxP/Cre+)大鼠脑组织线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ酶活性显著降低,但mtDNA拷贝数却明显上升。结论利用CRISPR/Cas9和Cre-loxP技术成功了构建中枢神经系统TauT基因敲除大鼠模型,并初步验证了此模型对脑组织及其线粒体呼吸链酶和mtDNA的影响,为研究牛磺酸及TauT对脑组织的分子机制提供了新的模型平台。

微小RNA在缺血再灌注损伤中的作用研究

在缺血性疾病的发生发展过程中,对组织造成损伤的主要因素,不是缺血本身,而是恢复血液供应后,过量的自由基攻击,重新获得血液供应的组织内的细胞,引起组织细胞的二次损伤,这种损伤叫做＂缺血再灌注损伤＂。

机器学习在脑卒中诊断与治疗中的应用进展

随着人工智能技术的迅速发展,机器学习算法广泛应用于脑卒中诊断、治疗、预后各阶段,并表现出巨大的应用潜力。本文从机器学习算法研究,机器学习算法在脑卒中诊断与分类诊断、结局预测、风险因素识别等方面总结机器学习算法在脑卒中诊断与治疗中的应用现状并展望未来发展方向。

颅脑创伤后期大鼠代谢型谷氨酸受体5表达变化及牛磺酸治疗作用

目的探讨颅脑创伤后期(第7天)大鼠脑组织代谢型谷氨酸受体5(m Glu R5)表达变化,以及牛磺酸治疗作用。方法液压脑损伤打击仪制备液压打击颅脑创伤大鼠模型,采用随机数字表法将30只无特定病原体级Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、颅脑创伤组和牛磺酸治疗组(各10只),干湿重法检测大鼠脑组织含水量,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting法检测水通道蛋白4(AQP4)和m Glu R5 m RNA和蛋白表达变化。结果与对照组相比,颅脑创伤组大鼠脑组织含水量(t=4.893,P=0.002)、AQP4 m RNA(t=6.523,P=0.000)和蛋白(t=4.366,P=0.008)表达水平升高,m Glu R5m RNA(t=5.776,P=0.001)和蛋白(t=3.945,P=0.014)表达水平降低;经牛磺酸治疗后,大鼠脑组织含水量(t=2.151,P=0.140)、AQP4 m RNA(t=1.144,P=0.432)和蛋白(t=0.367,P=0.804)降至正常水平,m Glu R5 m RNA(t=1.824,P=0.216)和蛋白(t=1.185,P=0.414)升至正常水平。相关分析显示,脑组织含水量与m Glu R5 m RNA(r=-0.617,P=0.014)和蛋白(r=-0.665,P=0.007)呈负相关,与AQP4蛋白呈正相关(r=0.658,P=0.008)。结论牛磺酸可以升高颅脑创伤后期(第7天)大鼠脑组织m Glu R5表达水平,降低脑水肿和脑组织含水量,具有抑制性神经递质作用。

中青年高血压脑出血临床诊断与治疗分析

研究背景我国高血压脑出血疾病负担较重,近年发病年龄呈现年轻化趋势。回顾总结中青年高血压脑出血的临床特点、对比分析各种治疗方案之有效性和安全性,可为制定治疗方案提供参考。方法纳入天津市环湖医院2020年1月1日至2021年12月31日诊断与治疗的120例中青年(18~59岁)高血压脑出血患者,根据病情严重程度分为非手术组(22例)、钻孔引流组(47例)和内镜手术组(51例),记录术后血肿清除率、引流管留置时间、住院时间、出院时Glasgow昏迷量表(GCS)评分,以及术后并发症发生率,出院后3和6个月采用改良Rankin量表(mRS)评价神经功能预后。结果不同治疗组患者住院时间(H=3.445,P=0.000)、出院时GCS评分(H=15.767,P=0.000)、术后支气管肺炎(χ^(2)=19.336,P=0.000)和低蛋白血症(χ^(2)=17.650,P=0.000)发生率,以及出院后3个月(H=9.651,P=0.008)和6个月(H=8.962,P=0.011)时mRS评分差异均具有统计学意义;与非手术组相比,内镜手术组和钻孔引流组住院时间缩短(Z=3.816,P=0.000;Z=3.254,P=0.000)、出院时GCS评分降低(Z=3.795,P=0.000;Z=3.104,P=0.002)、术后支气管肺炎(χ^(2)=17.223,P=0.000;χ^(2)=10.251,P=0.001)和低蛋白血症(χ^(2)=13.310,P=0.000)发生率升高,且出院3个月时mRS评分增加(Z=2.783,P=0.009;Z=2.270,P=0.035),但至出院6个月时mRS评分接近非手术组(均P>0.05)。两种手术方式相比,内镜手术组血肿清除率高于(Z=⁃6.424,P=0.000)、引流管留置时间短于(Z=⁃3.856,P=0.000)钻孔引流组;而住院时间、出院时GCS评分,术后颅内再出血、癫痫发作、颅内感染、上消化道应激性溃疡伴出血、水电解质代谢紊乱、低蛋白血症、下肢深静脉血栓形成等并发症发生率,以及出院后3和6个月时mRS评分差异无统计学意义(均P>0.05)。结论中青年脑出血患者普遍存在控制不良的高血压和不良生活习惯,微创手术(血肿钻孔引流术和内镜下血肿清除术)安全可靠。

CRISPR/Cas9系统介导Slc6a6基因敲除大鼠的繁殖与鉴定

目的利用CRISPR/Cas9技术构建牛磺酸转运体基因(solute carrier family 6 member 6,Slc6a6)敲除大鼠,繁殖并鉴定,为研究牛磺酸缺失对神经系统疾病的影响提供稳定的大鼠模型。方法针对Slc6a6基因第5外显子,设计向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导Cas9核酸酶与靶点DNA特异性结合,并切割基因组DNA,被切割后的DNA进行重组修复,从而实现基因的敲除。通过基因型鉴定和测序分析检测新生大鼠基因型。利用Real-time PCR、Western blot技术和免疫组化等方法,分析大鼠脑组织的牛磺酸转运体(taurine transporter,TauT)的mRNA表达和蛋白表达,建立Slc6a6基因敲除大鼠模型。结果 F3代出现21只Slc6a6基因敲除纯合子(TauT^(-/-)),54只杂合子(TauT^(+/-)),27只阴性(TauT^(+/+)),F3代纯合率约为20.59%,基本符合孟德尔遗传定律。Slc6a6基因敲除纯合子大鼠脑组织mRNA水平基本不表达,TauT蛋白表达水平显著低于同窝阴性大鼠。结论本研究利用CRISPR/Cas9系统定向敲除Slc6a6基因,成功构建Slc6a6基因敲除大鼠模型。