右美托咪定联合丙泊酚在脑功能区神经胶质瘤治疗中的应用

右美托咪定是新型高选择性肾上腺素能受体激动剂,可在蓝斑核发挥作用,从而发挥其镇静作用。其机理在于激动蓝斑核α_2受体,抑制NE释放,促进抑制性神经递质释放从而产生拟睡眠状态的镇静、镇痛作用。脑功能区神经胶质瘤因其复杂的解剖结构在神经外科手术治疗中往往无法达到彻底切除的效果,且易并发失语、肢体瘫痪等并发症,近年来随着右美托咪定的出现,唤醒开颅手术治疗功能区神经胶质瘤技术逐渐成为临床应用热点。本文主要论述右美托咪定联合丙泊酚在脑功能区神经胶质瘤治疗中的应用。

七氟醚麻醉在颅内肿瘤患儿手术中的应用效果及对围术期血浆内皮素和一氧化氮水平的影响

目的探讨七氟醚麻醉在颅内肿瘤患儿麻醉中的应用效果及对围术期血浆内皮素及一氧化氮水平的影响。方法选取2017年9月-2018年9月在该院接受手术治疗的颅内肿瘤患儿100例为研究对象,按麻醉方式分为研究组和对照组,每组各50例。对照组给予氯胺酮进行麻醉维持,研究组给予七氟醚进行麻醉维持。比较两组围术期血浆内皮素、一氧化氮水平,治疗前后心理状态变化及生存质量变化情况。结果对照组患儿在气管插管后(T2)、切开颅脑时(T3)及手术过程中(T4)时的内皮素水平均高于研究组,差异均有统计学意义(均P<0.05);两组患儿在麻醉诱导前(T1)和手术结束(T5)时的内皮素水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。对照组患儿在T2、T3及T4时的一氧化氮水平均高于研究组,差异均有统计学意义(均P<0.05);两组患儿在T1和T5时的一氧化氮水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。治疗后,对照组患儿SAS、SDS评分均高于研究组,生存质量评分低于研究组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在对接受手术治疗的颅内肿瘤患儿进行麻醉的过程中,予以七氟醚麻醉效果显著,值得在临床上多加广泛推广与应用。

HO-1在七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病中的作用

目的:评价血红素氧合酶-1(HO-1)在七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病中的作用。方法:成年雄性C57BL/6J小鼠136只,体重20~25 g,6~8周龄,采用随机数字表法分为4组(n=34):假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)、脓毒症相关性脑病+七氟烷组(SAE+Sevo组)和脓毒症相关性脑病+七氟烷+HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ组(SAE+Sevo+ZnPPⅨ组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+Sevo组和SAE+Sevo+ZnPPⅨ组分别于造模成功后立即吸入2%七氟烷-33%氧气2 h,Sham组和SAE组吸入33%氧气2 h。SAE+Sevo+ZnPPⅨ组于造模前30 min时腹腔注射HO-1抑制剂ZnPPⅨ25 mg/kg。于造模后6、12和24 h时处死6只小鼠,采用ELISA法检测皮层组织TNF-α、IL-1β、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和HO-1水平,采用Western blot法检测皮层组织HO-1表达。于造模后24 h时处死6只小鼠,采用TUNEL染色检测皮层细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数。每组取10只小鼠,分别于造模后3、5、7和14 d时行Y迷宫实验,计算自发交替百分比。结果:与Sham组比较,SAE组、SAE+Sevo组及SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平、细胞凋亡指数、HO-1活性及其表达水平升高,自发交替百分比降低(P<0.05)。与SAE组比较,SAE+Sevo组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平和细胞凋亡指数降低,HO-1活性及其表达水平、自发交替百分比升高,SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β及HMGB1水平降低(P<0.05),其余指标差异无统计学意义(P>0.05)。与SAE+Sevo组比较,SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平和细胞凋亡指数升高,HO-1活性及其表达水平、自发交替百分比降低(P<0.05)。结论:七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病的机制与提高皮层组织HO-1活性,减轻炎症反应有关。

巨噬细胞自噬和极化在脓毒症发病机制中的研究进展

脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合征,其核心机制是免疫功能紊乱。巨噬细胞具有极化、自噬、调节炎症反应和杀灭微生物的作用,是参与机体非特异性免疫的重要组成部分。研究发现,巨噬细胞可以通过极化、自噬等生物学行为在脓毒症的免疫调节中发挥重要作用。文章就巨噬细胞极化、自噬在脓毒症发病机制领域相关研究进展进行综述。调控巨噬细胞生物学行为有望成为未来脓毒症治疗的新靶点。

低氧预处理对氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞线粒体呼吸功能的保护作用

目的通过观察低氧预处理对氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell,HBMVEC)低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和线粒体琥珀酸脱氢酶复合体亚基2(succinate dehydrogenase complex iron sulfur subunit B,SDHB)表达水平以及线粒体ATP合成的影响,评价低氧预处理对氧糖剥夺HBMVEC的保护作用.方法离体培养HBMVEC,采用随机数字表法将HBMVEC分为5组(每组6孔):正常对照组(A组)、氧糖剥夺组(B组)、氧糖剥夺+低氧预处理组(C组)、氧糖剥夺+低氧预处理+二甲基草酰甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)组(D组)和氧糖剥夺+低氧预处理+2-ME组(E组).给予低氧预处理及HIF-1α抑制剂和稳定剂后,对HBMVEC进行氧糖剥夺,使用Annexin V检测细胞凋亡和坏死;用ATP检测试剂盒测定细胞内ATP含量;采用Western blot法测定HIF-1α、SDHB蛋白表达.结果与A组比较,B组、C组、D组和E组HIF-1α表达水平明显升高,ATP含量明显减少,细胞凋亡率明显升高(P<0.05),B组、C组和E组SDHB表达水平明显降低(P<0.05);与B组比较,C组和D组HIF-1α和SDHB表达水平明显升高,ATP含量明显增加,细胞凋亡率明显降低(P<0.05).结论低氧预处理可通过调节HIF-1α表达改善氧糖剥夺所致的HBMVEC线粒体呼吸链复合体Ⅱ的损伤,发挥对氧糖剥夺HBMVEC模型的保护作用.

氢气对创伤性颅脑损伤大鼠大脑皮质NLRP3炎症小体的影响

目的评价氢气对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠大脑皮质NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的影响。方法按随机数字表法将120只成年雄性SD大鼠分为假手术组(S组)、TBI组(T组)、TBI+NLRP3抑制剂MCC950组(T+M组)、TBI+氢气组(T+H组)、TBI+氢气+MCC950组(T+H+M组)5组,每组24只。采用控制型皮质撞击法建立TBI大鼠模型;T+M组和T+H+M组大鼠于制模前14 d连续腹腔注射MCC950(10 mg/kg);T+H组和T+H+M组大鼠分别于制模后1 h和3 h吸入2%氢气1 h。制模后6 h取各组大鼠脑挫伤周围皮质组织,测定伊文思蓝(EB)含量以反映血脑屏障通透性;计算脑组织含水量;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测细胞凋亡并计算神经元凋亡指数;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测Bcl-2、Bax、NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1 p20(caspase-1 p20)表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL-1β、IL-18)水平。结果与S组相比,T组大鼠大脑皮质EB含量、脑组织含水量、凋亡指数以及Bax、NLRP3、ASC、caspase-1 p20表达明显增高,Bcl-2表达明显降低,IL-1β、IL-18水平明显升高〔EB含量(μg/g):87.57±6.89比10.54±1.15,脑组织含水量:(83.79±2.74)%比(74.50±1.19)%,凋亡指数:(62.66±5.33)%比(4.61±0.96)%,Bax/β-actin:4.20±0.44比1,NLRP3/β-actin:3.55±0.31比1,ASC/β-actin:3.10±0.26比1,caspase-1 p20/β-actin:3.28±0.24比1,Bcl-2/β-actin:0.23±0.03比1,IL-1β(ng/g):221.58±19.15比27.15±3.27,IL-18(ng/g):87.26±7.17比12.10±1.85,均P<0.05〕。与T组相比,T+M组、T+H组和T+H+M组大鼠大脑皮质EB含量、脑组织含水量、凋亡指数以及Bax、NLRP3、caspase-1 p20表达明显降低,Bcl-2表达明显增高,IL-1β、IL-18水平明显降低,而ASC表达差异无统计学意义。与T+H组相比,T+H+M组大鼠大脑皮质EB含量、脑组织含水量、凋亡指数以及Bax、NLRP3、caspase-1 p20表达进一步降低,Bcl-2表达进一步增高,IL-1β、IL-18水平进一步降低〔EB含量(μg/g):40.49±3.15比51.96±4.69,脑组织含水量:(76.58±1.04)%比(78.76±1.16)%,凋亡指数:(32.22±3.44)%比(38.54±3.89)%,Bax/β-actin:1.92±0.16比2.56±0.21,NLRP3/β-actin:1.94±0.14比2.37±0.24,caspase-1 p20/β-actin:1.97±0.17比2.31±0.19,Bcl-2/β-actin:0.82±0.07比0.52±0.04,IL-1β(ng/g):86.23±7.09比110.44±10.48,IL-18(ng/g):40.18±3.22比46.23±4.02,均P<0.05〕。而T+M组与T+H组各指标比较差异均无统计学意义。结论氢气吸入减轻大鼠TBI的机制可能与抑制大脑皮质NLRP3炎症小体有关。

右美托咪定对创伤性颅脑损伤小鼠肠道屏障功能的影响及Nrf2/HO-1信号通路在其中的作用

目的评价右美托咪定对创伤性颅脑损伤(TBI)小鼠肠道屏障功能的影响及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在其中的作用。方法ICR级雄性野生型(WT)小鼠和Nrf2基因敲除型(Nrf2-KO)小鼠各30只,6~8周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法各分为3组(n=10):对照组(C组)、TBI组(T组)和TBI+右美托咪定组(T+D组)。采用自由落体加速撞击法建立小鼠TBI模型,T+D组于造模前30 min时腹腔注射右美托咪定30μg/kg,C组和TBI组腹腔注射等容量生理盐水。造模后18 h时排空小鼠膀胱,并经胃管给予含乳果糖13.3 mg和甘露醇10.1 mg的测试液200μl。造模后24 h时收集尿液,测定乳果糖与甘露醇的浓度比值,反映肠屏障通透性。经心脏采血,测定血浆LPS浓度,然后处死小鼠,取回肠组织,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β、IL-6和8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)的含量,采用羟胺法测定肠组织SOD活性,采用钼酸铵比色法测定肠组织过氧化物酶(CAT)活性,采用硫代巴比妥酸法测定肠组织MDA含量,采用Western blot法测定Nrf2和HO-1的表达水平。结果与C组WT小鼠比较,T组和T+D组WT小鼠肠屏障通透性、血浆LPS浓度、肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、8-iso-PGF2α含量升高,肠组织CAT和SOD活性降低,Nrf2和HO-1表达上调(P<0.05);与T组WT小鼠比较,T+D组WT小鼠肠屏障通透性、血浆LPS浓度、肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、8-iso-PGF2α含量降低,肠组织CAT和SOD活性升高,Nrf2和HO-1表达上调(P<0.05)。与C组Nrf2-KO小鼠比较,T组和T+D组Nrf2-KO小鼠肠屏障通透性、血浆LPS浓度、肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、8-iso-PGF2α含量升高(P<0.05),肠组织CAT和SOD活性差异无统计学意义(P>0.05);与T组Nrf2-KO小鼠比较,T+D组Nrf2-KO小鼠上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。3组Nrf2-KO小鼠肠组织HO-1表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论右美托咪定可改善TBI小鼠肠道屏障功能障碍,其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

α2受体在右美托咪定改善创伤性颅脑损伤大鼠肠道屏障功能障碍中的作用

目的评价α2受体在右美托咪定改善创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠肠道屏障功能障碍中的作用。方法清洁级健康雄性Wistar大鼠40只,12周龄,体重200~250 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、TBI组(T组)、右美托咪定组(D组)和右美托咪定+阿替美唑组(D+A组)。采用自由落体撞击法建立大鼠TBI模型,于模型制备前30 min饲入4.0 kD异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐(FITC-Dex)60 mg/100 g;D组和D+A组于模型制备前30 min腹腔注射右美托咪定50μg/kg,D+A组于注射右美托咪定前10 min腹腔注射阿替美唑500μg/kg。于模型制备后6 h时采集颈总动脉血样,采用ELISA法检测血浆肾上腺素(E)和去甲肾上腺素(NE)的浓度,采用荧光分光光度计法测定血清FITC-Dex浓度,采用比色法测定血清二胺氧化酶(DAO)活性;取小肠组织,采用比色法测定肠组织DAO活性,检测肠道上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的表达。结果与C组比较,T组、D组和D+A组血浆E和NE浓度、血清FITC-Dex浓度和DAO活性升高,肠组织DAO活性降低,ZO-1表达下调(P<0.05);与T组比较,D组血浆E及NE浓度、血清FITC-Dex浓度和DAO活性降低,肠组织DAO活性升高,ZO-1表达上调(P<0.05);与D组比较,D+A组血浆E及NE浓度、血清FITC-Dex浓度和DAO活性均升高,肠组织DAO活性降低,ZO-1表达下调(P<0.05)。结论α2受体参与了右美托咪定改善TBI大鼠肠道屏障功能障碍的过程。

血红素氧合酶-1在七氟醚减轻哮喘小鼠气道损伤中的作用

目的评价血红素氧合酶-1（HO-1）在七氟醚减轻哮喘小鼠气道损伤中的作用。方法SPF级雌性C57BL/6小鼠40只，6～8周龄，体重20～25 g，采用随机数字表法分为4组（n＝10）：对照组（C组）、哮喘组（A组）、哮喘＋七氟醚组（A＋S组）和哮喘＋七氟醚＋锌原卟啉（ZnPP）组（A＋S＋Z组）。采用鸡卵清蛋白致敏和激发法制备哮喘小鼠模型，A＋S组小鼠于每次激发后吸入3%七氟醚1 h，A＋S＋Z组小鼠于每次激发后、吸入七氟醚前腹腔注射ZnPP 10 mg/kg 。于末次激发后24 h时测定气道反应性，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），进行细胞分类和计数，采用ELISA法测定BALF IL-13、IL-33的浓度。取右肺组织，测定SOD活性、MDA和谷胱甘肽（GSH）含量；肺组织经HE染色行浸润评分；采用Western blot法测定肺组织HO-1的表达水平。结果与C组比较，A组气道反应性、BALF中炎性细胞计数、IL-13和IL-33浓度、肺组织MDA含量及浸润评分升高，SOD活性和GSH含量降低，HO-1表达上调（P〈0.05）；与A组比较，A＋S组气道反应性、BALF中炎性细胞计数、IL-13和IL-33浓度、肺组织MDA含量及浸润评分降低，SOD活性和GSH含量升高，HO-1表达上调，A＋S＋Z组肺组织HO-1表达下调（P〈0.05），其余上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）；与A＋S组比较，A＋S＋Z组气道反应性、BALF中炎性细胞计数、IL-13和IL-33浓度、肺组织MDA含量及浸润评分升高，SOD活性和GSH含量降低，HO-1表达下调（P〈0.05）。结论HO-1参与了七氟醚减轻哮喘小鼠气道损伤的病理生理机制。

富氢液对创伤性颅脑损伤大鼠急性肺损伤的影响及Nrf2/HO-1信号通路在其中的作用

目的评价富氢液对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠急性肺损伤的影响及核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路在其中的作用。方法成年雄性SD大鼠48只,体重220~250 g,采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(S组)、TBI组(T组)、TBI+富氢液组(T+H组)和TBI+富氢液+鸦胆子苦醇组(T+H+B组)。采用控制型皮质撞击损伤法制备TBI模型。T+H+B组于造模前10 d开始隔天腹腔注射Nrf2抑制剂鸦胆子苦醇0.4 mg/kg;T+H组和T+H+B组于造模后1和6 h时腹腔注射富氢液10 ml/kg。造模后24 h时,收集支气管肺泡灌洗液(BLAF)测定蛋白浓度,取右颈总动脉血和肺组织,采用ELISA法测定血清和肺组织TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的水平,测定肺组织湿重/干重(W/D)比值,HE染色后观察肺组织病理学结果并进行评分,采用Western blot法检测肺组织核Nrf2、总Nrf2和HO-1表达,RT-PCR法检测肺组织HO-1 mRNA表达。结果与S组相比,T组和T+H组BALF蛋白浓度、肺组织W/D比值和肺组织病理评分升高,血清和肺组织TNF-α、HMGB1和IL-10水平升高,肺组织核Nrf2、总Nrf2、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05);与T组相比,T+H组BALF蛋白浓度、肺组织W/D比值和肺组织病理评分降低,血清和肺组织TNF-α和HMGB1水平降低,IL-10水平升高,肺组织核Nrf2、总Nrf2、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05),T+H+B组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与T+H组相比,T+H+B组BALF蛋白浓度、肺组织W/D比值和肺组织病理评分升高,血清和肺组织TNF-α和HMGB1水平升高,IL-10水平降低,肺组织核Nrf2、总Nrf2、HO-1及其mRNA表达下调(P<0.05)。结论富氢液可减轻TBI大鼠急性肺损伤,其机制与激活肺组织Nrf2/HO-1信号通路,抑制炎症反应有关。

氢改善脓毒症小鼠肠屏障功能的机制:RhoA-mDia1信号通路

目的探讨氢改善脓毒症小鼠肠屏障功能的机制与RhoA-mDia1信号通路的关系。方法雄性C57BL/6小鼠60只,体重20~25 g,6~8周龄,采用随机数字表法分为3组(n=20):对照组(C组)、脓毒症组(S组)和脓毒症+氢气组(SH组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型,SH组小鼠于CLP术后1和6 h时分别吸入含2%氢气的空气1 h。于CLP术后24 h时心脏穿刺取血标本,测定血清二胺氧化酶(DAO)活性、血液细菌培养计数菌落形成单位(CFU);取小肠组织标本,透射电镜下观察小肠上皮细胞超微结构;免疫荧光染色法测定肠上皮细胞连接蛋白ZO-1的表达与分布;Western blot法测定肠上皮细胞RhoA、肌球蛋白磷酸酯酶目标亚基1(MYPT1)及其磷酸化水平、mDia1的表达,计算p-MYPT1/MYPT1比值。结果与C组比较,S组、SH组血清DAO活性、全血CFU计数及RhoA表达水平均升高,ZO-1表达下调,S组p-MYPT1/MYPT1比值升高,mDia1表达下调,SH组p-MYPT1/MYPT1比值下降,mDia1表达上调(P<0.05);与S组比较,SH组血清DAO活性及CFU计数、肠上皮细胞RhoA表达水平及p-MYPT1/MYPT1比值降低,ZO-1和mDia1表达上调(P<0.05),肠组织超微结构改变改善。结论氢改善脓毒症小鼠肠屏障功能的机制与抑制肠上皮细胞RhoA活性,升高mDia1活性有关。

氢气对脓毒症多器官保护作用机制的研究进展

脓毒症是机体对感染所引起的反应失衡,最终导致危及生命的器官功能障碍的疾病。氢气作为一种气体信号分子,目前发现其对肿瘤、哮喘、慢性阻塞性肺疾病和脓毒症等多种炎性疾病具有治疗作用。文章主要阐述脓毒症造成脑、肺、心脏等器官损伤涉及的多种机制,以及氢气如何通过抗炎、选择性抗氧化、抗细胞凋亡、调节信号通路等发挥辅助治疗作用。总结氢气对脓毒症器官损害的保护机制,将为氢气治疗脓毒症的临床转化提供支持。

维生素K_(2)对七氟烷致老龄小鼠认知功能降低的影响

目的评价维生素K_(2)对七氟烷致老龄小鼠认知功能降低的影响。方法SPF级健康雌性C57BL/6J小鼠72只,12月龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为4组(n=18):对照+玉米油组(Con+Oil组)、七氟烷+玉米油组(Sevo+Oil组)、对照+维生素K_(2)组(Con+K_(2)组)和七氟烷+维生素K_(2)组(Sevo+K_(2)组)。Sevo+Oil组和Sevo+K_(2)组小鼠给予2.5%七氟烷+33%氧气麻醉2 h。Con+Oil组和Con+K_(2)组小鼠只给予33%氧气处理。Con+Oil组和Sevo+Oil组小鼠在吸入氧气或七氟烷前30 min,腹腔注射玉米油100μl;Con+K_(2)组和Sevo+K_(2)组腹腔注射维生素K_(2)(溶于玉米油浓度为1 mg/ml)100 mg/kg。吸入七氟烷后24 h时每组随机取8只小鼠处死取海马组织,采用ELISA法测定ATP酶活性、IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,采用Western blot法检测AT8和PHF1的表达;每组余10只小鼠进行标准化饲养,吸入七氟烷后1、3、5、7和14 d时采用Y迷宫实验检测认知功能。结果与Con+Oil组比较,Sevo+Oil组海马IL-1β、IL-6、TNF-α含量、AT8和PHF1表达水平升高,ATP酶活性降低,吸入七氟烷后1、3、5、7和14 d时自发交替百分比下降(P<0.05);与Sevo+Oil组比较,Sevo+K_(2)组海马IL-1β、IL-6、TNF-α含量、AT8和PHF1表达水平降低,ATP酶活性升高,麻醉结束后1、3、5、7和14 d时自发交替百分比升高(P<0.05);Con+K_(2)组与Sevo+K_(2)组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论维生素K_(2)可改善七氟烷致老龄小鼠认知功能降低,其机制与升高海马ATP酶活性,抑制AT8和PHF1表达上调有关。

Nrf2/HO-1信号通路在右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用

目的评价核因子-E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用。方法BV-2小胶质细胞加入含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,以1.5×104个/ml的密度接种于96孔培养板(200μl/孔)或以2×105个/ml密度接种于6孔培养板(每孔2 ml),置于37℃、含5%CO_(2)-21%O_(2)-74%N_(2)的正常培养箱中培养。采用随机数字表法分为5组(n=30):正常对照组(C组)、右美托咪定组(D组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、氧糖剥夺/复氧复糖+右美托咪定组(OGD/R+D组)和氧糖剥夺/复氧复糖+右美托咪定+ML385组(OGD/R+D+ML组)。C组在正常培养箱中继续培养26 h;D组加入终浓度为10μmol/L的右美托咪定孵育2 h,随后在正常培养箱中培养26 h;OGD/R组、OGD/R+D组、OGD/R+D+ML组更换为无糖DMEM培养基,置于37℃、含5%CO_(2)-1%O_(2)-94%N_(2)的培养箱中培养2 h,然后换为含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,在正常培养箱中培养24 h;OGD/R+D组和OGD/R+D+ML组于氧糖剥夺前2 h时加入终浓度为10μmol/L的右美托咪定,OGD/R+D+ML组于加入右美托咪定前30 min时,加入终浓度为4μmol/L的Nrf2抑制剂ML385。采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA检测上清液TNF-α、IL-6和IL-10的浓度,Western blot法检测细胞核Nrf-2、细胞Nrf-2和HO-1表达,RT-PCR法检测细胞HO-1 mRNA表达。结果与C组比较,OGD/R组和OGD/R+D组细胞活力降低,细胞凋亡率和上清液TNF-α、IL-6、IL-10浓度升高,细胞核Nrf2、细胞Nrf-2、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05),D组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与OGD/R组比较,OGD/R+D组细胞活力和上清液IL-10浓度升高,细胞凋亡率和上清液TNF-α、IL-6浓度降低,细胞核Nrf2、细胞Nrf2、HO-1及其mRNA表达上调(P<0.05),OGD/R+D+ML组上述差异无统计学意义(P>0.05);与OGD/R+D组比较,OGD/R+D+ML组细胞活力和上清液IL-10浓度降低,细胞凋亡率和上清液TNF-α、IL-6浓度升高,细胞核Nrf-2、细胞Nrf2、HO-1及其mRNA表达下调(P<0.05)。结论右美托咪定减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤的机制与促进Nrf2/HO-1信号通路激活,抑制炎症反应有关。

富氢液对人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤时Akt/Nrf2信号通路的影响

目的评价富氢液对人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤时丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子-E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法体外培养的人肾小管上皮细胞系,以1.5×10^(4)个/ml的密度接种于96孔培养板(200μl/孔)或以2×10^(5)个/ml密度接种于6孔培养板(2 ml/孔),采用随机数字表法分为5组(n=30):对照组(C组)置于常氧恒温培养箱(37℃、5%CO2-21%O2-74%N2)中培养28 h;富氢液组(H组)加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基,置于常氧恒温培养箱中孵育28 h;缺氧复氧组(H/R组)置于厌氧恒温培养箱(37℃、5%CO2-1%O2-94%N2)中缺氧24 h,取出后置于常氧恒温培养箱复氧4 h;缺氧复氧+富氢液组(H/R+H组)置于厌氧恒温培养箱中缺氧24 h,取出后加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基,置于常氧恒温培养箱中复氧4 h;缺氧复氧+富氢液+Akt抑制剂Uprosertib组(H/R+H+U组)加入终浓度为10μmol/L的Uprosertib孵育1 h,其余处理同H/R+H组。各组细胞处理结束后,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,Western blot法检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、总Nrf2、核Nrf2和活化的caspase-3表达,RT-PCR法检测Nrf2 mRNA表达。结果与C组比较,H/R组和H/R+H组细胞活力和SOD活性下降,细胞凋亡率和MDA含量升高,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2、活化的caspase-3和Nrf2 mRNA表达上调(P<0.05);与H/R组比较,H/R+H组细胞活力和SOD活性升高,细胞凋亡率和MDA含量降低,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达上调,活化的caspase-3表达下调(P<0.05);与H/R+H组比较,H/R+H+U组细胞活力和SOD活性下降,细胞凋亡率和MDA含量升高,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达下调,活化的caspase-3表达上调(P<0.05)。结论富氢液减轻人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤的机制与促进Akt/Nrf2信号通路激活,降低氧化应激水平,抑制细胞凋亡有关。

小檗碱对脑缺氧-复氧大鼠内质网应激通路的作用机制研究

目的探讨小檗碱对脑缺氧-复氧大鼠内质网应激通路的作用机制。方法选择30只成年Sprague Dawley大鼠(200~250 g)按照随机数字表法平均分为对照组、缺氧-复氧组和小檗碱处理组,每组10只。缺氧-复氧组及小檗碱处理组于含有5%氧气的缺氧箱中缺氧处理30 min后立即转入含有100%氧气的复氧箱中复氧处理6 h后取出,建造脑缺氧-复氧模型。对照组在同等大小箱子内同等时间通入空气处理。小檗碱处理组大鼠取出2 h后,灌胃给予浓度为200 mg/(kg·day)小檗碱,对照组和缺氧-复氧组大鼠灌胃给予同等剂量生理氯化钠溶液,连续灌胃7 d,麻醉后断头取全脑进行实验。采用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法对各组大鼠的脑梗死体积进行测算,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色检测细胞凋亡。通过ELISA检测白细胞介素(IL-6)和IL-10水平检测脑组织炎症反应。蛋白印迹检测细胞介素受体拮抗剂(IL-1Ra)和IL-1β的蛋白水平。结果缺氧-复氧组脑梗面积大于对照组(P<0.01)。小檗碱处理组脑梗面积小于缺氧-复氧组(P<0.01)。小檗碱处理组脑组织细胞凋亡低于缺氧-复氧组(P<0.01)。与对照组比较,缺氧-复氧组脑组织IL-6水平上升,IL-10水平降低(P<0.01)。与对照组比较,缺氧-复氧组脑组织IL-6水平和IL-1Ra/IL-1β比值上升,IL-10水平降低(P<0.01)。与缺氧-复氧组比较,小檗碱处理组脑组织IL-6水平和IL-1Ra/IL-1β比值下降,IL-10水平升高(P<0.01)。结论小檗碱可缓解脑缺氧-复氧大脑脑梗面积,神经元凋亡及免疫炎症反应,其可以抑制脑缺氧-复氧引起的内质网应激通路。