附子甘草药对中总生物碱的提取工艺研究

采用响应面法优化附子甘草药对中总生物碱的回流提取工艺。以总生物碱提取率为评价指标,通过单因素试验考察了浸泡时间、甘草质量、液料比、回流时间、回流次数等因素对总生物碱提取率的影响。在单因素试验的基础上,利用响应面设计优化试验。回流提取的最优工艺条件为:回流时间为120 min;m(附子)∶m(甘草)为1∶1.15;液料比为30。验证试验表明,拟合得到的回归模型与实际符合较好。

基于组效关系的姜黄挥发油抗肿瘤活性成分辨识研究

基于GC-MS分析,建立了姜黄挥发油的化学成分与其抑制人宫颈癌Hela细胞作用的组效关系模型,寻找与药效显著相关的活性成分。采用水蒸汽蒸馏法提取得到31批姜黄挥发油,提取率在1.63%～4.52%之间;采用GC-MS联用仪建立了31批姜黄挥发油的指纹图谱,确定了20个特征峰,以特征峰的相对峰面积(各峰面积与内标正十三烷的峰面积之比)来表征其相对含量;MTT法测定姜黄挥发油抑制人宫颈癌Hela细胞活性,以抑制率为评价指标;利用Simca-p11.5软件的正交投影偏最小二乘法(Orthogonal Partial leastsquares,OPLS)和SPSS软件的双变量相关(bivariate)分析,研究特征峰与药效的相关性,根据S-载荷图、变异权重参数值(Variable importance in projection,VIP)和皮尔逊(Pearson)相关系数来辨识显著活性成分。结果表明,11,15,7,19,3,6,12,14,9号等9个特征峰与姜黄挥发油抑制Hela细胞活性显著相关,除19号峰尚未定性外,11,15,7,3,6,12,14和9号峰对应的成分分别为芳姜黄酮、β-姜黄酮、姜烯、β-榄香烯、α-姜黄烯、α-姜黄酮、吉马酮和β-倍半水芹烯。

姜黄素类化合物及其抗肿瘤机理研究进展

结合国内外文献,详细综述了姜黄素类化合物研究进展,包括种属来源、化合物种类,以及质量研究和抗肿瘤机理。姜黄素类化合物种类繁多,其中姜黄素具有明显抗肿瘤作用,有些微量姜黄素类化合物也具有显著抗肿瘤活性,本文为更加全面研究姜黄素类化合物的抗肿瘤效果,进一步挖掘抗肿瘤新药提供参考。

HPLC-ESI-MS/MS分析姜黄中姜黄素类化合物

运用HPLC-ESI-MS/MS方法分析姜黄中姜黄素类化合物。利用高效液相色谱-电喷雾多级串联质谱(HPLC-ESI-MSn)技术,以Venusil XBP C18(2.1×150 mm,5μm,Agela Technologies)作为分离色谱柱,乙腈和水为流动相,电喷雾离子源(ESI),正负离子同时扫描。根据谱峰的保留时间和质谱一、二级离子碎片信息,结合对照品及参考文献信息,同时检测出姜黄中28种姜黄素类化合物,其中有8种化合物尚未见从姜黄中报道,并解析了它们的二级质谱断裂规律。本文为更加全面研究姜黄中姜黄素类化合物提供参考。

姜黄素类化合物不同提取方法的工艺优化和比较

在单因素试验基础上,采用CCD响应面优化设计方法,以超声提取为例,研究超声提取、微波辅助提取与回流提取方法的最优工艺。结果表明,3种最优工艺的提取率分别为37.39、36.38、38.80 mg/g。经综合比较发现,超声提取具有时间短,提取率较高,操作方便等优势,可用于大规模生产。

支持向量回归和响应面法优化姜黄提取工艺

目的:探究微波辅助提取姜黄药材的最优工艺。方法:在单因素试验基础上,使用经粒子群算法改进的支持向量回归法和响应面设计优化法,以姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的总量为指标,对乙醇浓度、液料比、微波时间各影响因素进行考察。结果:经两模型筛选得到最优工艺条件为:乙醇浓度69%,液料比21∶1,微波时间55 s。在此工艺条件下,3种姜黄素类化合物的提取总量为28.97 mg/g。结论:响应面模型与支持向量回归机模型的拟合效果良好,相关性均在0.96以上,预测出的最优工艺一致,最优提取率与真实值的偏差均小于1.2%,均可用于优化提取工艺。

穿山龙乙醇动态提取工艺优化研究

优化穿山龙乙醇动态连续提取工艺。通过单因素试验对乙醇浓度、液料比、回流速度、回流时间等进行了筛选,利用Central Composite Design响应面设计优化试验,以干浸膏得率和薯蓣皂苷含量作为评价指标,利用响应面对干浸膏得率进行了分析,支持向量回归(SVR)对薯蓣皂苷含量进行了分析。根据单因素试验结果确定了各因素对提取效果的影响,并确定了相应工艺范围。

HPLC-DAD法同时测定真元颗粒干浸膏中5个活性成分

目的建立HPLC法同时测定真元颗粒干浸膏（刺五加、青蒿、葛根、防风、甘草等）中绿原酸、葛根素、升麻素苷、甘草苷和甘草酸5种有效成分的含有量。方法真元颗粒干浸膏以40%甲醇提取,采用Agilent SB C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.2 m L/min;柱温30℃;检测波长250 nm（0~43.5 min,66.5~104 min）、300 nm（43.5~66.5 min）。结果绿原酸在10.3~82.4μg/m L、葛根素在5.9~46.8μg/m L、升麻素苷在2.5~19.9μg/m L、甘草苷在33.3~266.0μg/m L以及甘草酸铵在72.0~385.5μg/m L范围内线性关系良好（r≥0.999 3）,平均加样回收率（n=9）为99.7%~100.6%,RSD≤1.4%。结论本法简便易行,重复性好,准确度高,能有效控制真元颗粒干浸膏的质量。

基于QbD理念优化苦参甘草中有效成分的提取工艺

遵循"质量源于设计(quality by design,QbD)"理念,建立苦参甘草中有效成分的回流醇提工艺的设计空间并验证。以苦参总碱(total alkaloids of Sophora flavescens,TASF)、苦参碱(matrine,MT)及氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)的提取率为关键质量属性(critical quality attributes,CQAs),通过单因素实验确定Plackeet-Burmann设计(Plackeet-Burmann design,PBD)中各因素的高低水平,后采用PBD实验确定乙醇体积分数、甘草用量和提取温度为关键工艺参数(critical process parameters,CPPs),再通过中心点复合实验设计优化CPPs,基于二次多项式建立CPPs和CQAs间的数学模型,计算获得设计空间。验证结果表明,在设计空间内操作能够保证苦参有效成分提取工艺品质稳定。最终获得的操作空间为:甘草用量10.00~10.50g,乙醇体积分数65%~68%,提取温度94.5~95.0℃。

苦参配方的醇提工艺优化及抑菌活性研究

利用响应面法设计实验优化苦参抑菌配方的回流提取工艺,以配方对金黄色葡萄球菌抑菌率作为响应值,通过考察提取工艺的单因素:浸泡时间、回流时间、水浴温度、液料比、乙醇体积分数等,选取具有显著影响的参数作为响应面实验设计变量。经过数学模型预测与验证实验确定最优提取工艺为:乙醇体积分数80. 5%、回流时间1. 6h、水浴温度95℃。在0. 003 g/m L生药给药条件下,最优工艺的醇提物的抑菌率达到94. 29%。验证结果稳定且与预测值偏差低于2%,该工艺合理可行。优化后的工艺下,所提浸膏对枯草芽孢杆菌有良好的抑制作用,对大肠杆菌抑制作用较弱。

β-羰基酰胺类化合物的配位及晶体结构

为确认β-羰基酰胺类化合物与铜离子的配位位点,合成了6种β-羰基酰胺类配体L1～L6,分别与Cu(Ⅱ)进行配位反应.对生成的配合物进行单晶培养,并采用X射线衍射仪测定了单晶结构.结果表明,只有配体L6(2-苯甲酰乙酰苯胺)的铜配合物能够得到单晶.在其单晶中,Cu(Ⅱ)离子与来自2个配体的4个氧原子配位形成长方形的构型;配合物中存在分子内氢键、分子间氢键和π-π相互作用.

真元颗粒干浸膏HPLC-DAD指纹图谱和HPLC-MS/MS定性研究

目的：应用HPLC-DAD建立真元颗粒干浸膏的指纹图谱分析方法,并进行药材归属研究;利用HPLCMS/MS法对色谱峰进行定性研究。方法：采用Agilent SB C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速1.2 m L/min（0~70 min）,0.8 m L/min（70~150 min）;柱温30℃;检测波长254 nm。结果：以甘草苷为参照峰,确定了40个共有峰,10批次真元颗粒干浸膏指纹图谱相似度良好（≥0.989）,且对27个色谱峰进行了成分定性分析。结论：该方法简便可靠,为全面有效控制真元颗粒质量提供了依据。

附子甘草的HPLC检测方法学研究

利用高效液相色谱(HPLC)建立了附子甘草水提物的检测方法,并进行方法学考察。利用Waters高效液相色谱仪对色谱柱、流动相组成、洗脱程序、检测波长、柱温、流速等因素进行考察,最终确定选用Waters Symmetry C18色谱柱,以5 mmol/L醋酸铵水溶液(含0.1%冰醋酸)-乙腈为流动相进行梯度洗脱,检测波长为254 nm,流速为0.4 m L/min,柱温为30℃;以氢溴酸高乌甲素为内标物,各色谱峰相对保留时间及相对峰面积为指标进行方法学考察,结果表明,该方法重复性、重现性、稳定性良好,RSD均在5%以内。

龙加通络胶囊多成分的定性及定量研究

采用高效液相色谱-串联质谱技术（HPLC-MS/MS）对龙加通络胶囊多种成分进行定性分析,并建立了其中6种主要药效成分的高效液相色谱-二极管阵列检测/蒸发光散射检测联用（HPLC-DAD/ELSD）定量分析方法。定性分析方法采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱进行分离,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱。定性分析结果根据质谱信息对其中18种化合物进行了成分归属,其中7种为文献未报道的化合物。定量分析方法采用相同的色谱柱和流动相在不同的梯度程序下进行梯度洗脱。DAD采用双波长同时检测：紫丁香苷（254 nm）、异嗪皮啶（350 nm）和绿原酸（350 nm）;ELSD检测薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷3种甾体皂苷成分,检测条件为漂移管温度：100℃,气体流速：1.8 L/min,雾化器温度：40℃。定量分析结果显示,6种成分在各自的检测范围内线性关系良好,相关系数（r）为0.999 6-0.999 9;6种成分的平均加标回收率为99.9%-100.6%,相对标准偏差（RSD）为0.90%-1.4%。精密度、重复性以及24 h稳定性考察中,6种成分的RSD均小于2%。该方法准确可靠、重复性好,可用于龙加通络胶囊多成分的质量控制。

鬼臼甘草配伍有效成分提取工艺的研究

利用响应面法优选鬼臼和甘草共提的最优提取工艺。采用回流法提取鬼臼毒素,考察了液料比、乙醇体积分数、回流时间、回流温度、鬼臼与甘草质量比等因素对鬼臼毒素提取率的影响,在单因素实验的基础上通过响应面法对提取工艺进行优化。回流提取的最优工艺条件为:液料比为10∶1,乙醇体积分数为70%,甘草与鬼臼质量比为11.5∶1,100℃水浴提取3 h。验证试验表明,拟合得到的模型与实际符合较好。

丹参素的抗癌活性研究

目的:建立体外抗癌天然药物筛选模型,评价丹参素的抗癌活性。方法:以遗传物质DNA为靶标,溴化乙锭(EB)为致癌物质,丹参素为试药,利用荧光光谱检测丹参素对EB-DNA体系的荧光猝灭效应;利用圆二色谱技术检测丹参素对EB-DNA体系的干扰作用。结果:丹参素能明显抑制EB-DNA体系的荧光强度,且具有浓度依赖性;丹参素能够有效阻断EB嵌入DNA的碱基对中,维持DNA分子的正常构象。结论:丹参素抑制致癌剂对DNA链的嵌合,从而起抗癌活性。该模型可应用于抗癌功效的天然药物的筛选中。

组合突变提高重组人干扰素α2b的抗病毒活性

本文合理设计新型重组人干扰素α2b(rh-INFα2b)基因序列,采用组合突变策略,对第52-53-55、103-107和121-125位氨基酸残基定向突变。将突变基因连接于原核表达载体pET28a上进行诱导表达,所获得的新型rh-IFNα2b的抗病毒活性效价达9.3×107IU/mg,比对照样品(1×106IU/mg)高93倍。结果表明:所采用邻近多点突变方法,有效组合了位点效应,大幅度提高了干扰素的生物活性,获得高抗病毒活性的rh-IFNα2b。