美国眼科学会《糖尿病视网膜病变临床指南》解读

世界糖尿病患病人数逐年升高,中国糖尿病的患病率居于首位。糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)作为糖尿病的重要微血管并发症,已经成为当今工作年龄人群中主要的致盲眼病之一,对社会和家庭带来了极大的负担。近年来,多项基础及临床研究都在进行DR发病及治疗的探讨。美国眼科学会于2019年发布了最新版DR临床指南,该版指南对上一版本指南进行了补充及修订,对DR的定义、流行病学、分类、检查以及诊断治疗等方面进行了详细的介绍。本文将对2019版指南进行全面的解读,以期规范眼科医师对DR的认识、诊断和治疗,从而更好地减轻患者家庭和社会负担。

THP1细胞过表达腺病毒介导的PEDF抑制炎症过程中关键基因的鉴别

目的鉴别人单核细胞白血病细胞THP1过表达腺病毒介导的色素上皮衍生因子(PEDF)抑制炎症过程中的关键基因。方法对THP1细胞过表达腺病毒介导的PEDF进行蛋白质组学分析。将THP1细胞分为GFP组和PEDF组,分别用GFP腺病毒和PEDF腺病毒感染细胞;将THP1细胞分为甘露醇组、高糖组、高糖+GFP组和高糖+PEDF组,分别用D-甘露醇、D-无水葡萄糖、GFP腺病毒和PEDF腺病毒培养4、4、3和3 d;将Pedf^(-/-)小鼠采用随机数表法分为Pedf^(-/-)组和Pedf^(-/-)糖尿病组,每组12只,另取10只C57BL/6小鼠为对照组,取小鼠视网膜进行实验。采用实时荧光定量PCR验证差异表达基因(DEGs)的mRNA在视网膜组织和THP1细胞系中的表达水平。与GSE5504数据集进行DEGs交集,使用String数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,Cytoscape软件及MCODE应用程序提取PPI网络模块,与Set1数据集取交集并找到关键基因。采用Western blot在THP1细胞和Pedf^(-/-)小鼠中验证关键基因的表达水平。结果通过蛋白质组学和生物信息学分析,筛选出Set1数据集中的105个差异蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,PEDF组细胞中ARF5、TCF25和KCTD9 mRNA相对表达量明显高于GFP组,RNPS1、CSF1R、OGA、IBA57和MGST2 mRNA相对表达量明显低于GFP组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。对照组、Pedf^(-/-)组和Pedf^(-/-)糖尿病组视网膜组织中表达显著下调的TCF25、KCTD9、ARF5 mRNA和表达显著上调的CSF1R、RNPS1、IBA57 mRNA相对表达量总体比较,差异均有统计学意义(F=64.057、27.561、37.179、65.757、44.024、34.248,均P<0.001);与对照组相比,Pedf^(-/-)组TCF25、KCTD9、ARF5 mRNA相对表达量降低,CSF1R、RNPS1 mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);Pedf^(-/-)糖尿病组TCF25、KCTD9、ARF5 mRNA相对表达量降低,CSF1R、RNPS1、IBA57 mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与Pedf^(-/-)组相比,Pedf^(-/-)糖尿病组TCF25 mRNA相对表达量降低,CSF1R、RNPS1和IBA57 mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Set1数据集与GSE5504数据集交集后得到20个差异蛋白,主要富集于基因表达的正向调控、ERK1和ERK2级联的正向调节、胰岛素分泌的正向调节参与细胞对葡萄糖刺激的反应和抗原加工与递呈通路上。通过构建PPI网络和Cytoscape软件中MCODE插件筛选出关键基因CSF 1 R。Western blot结果显示,高糖组和高糖+GFP组中细胞CSF1R相对表达量分别为1.961±0.085和1.000±0.069,分别高于甘露醇组的1.000±0.072和高糖+PEDF组的0.469±0.079,差异均有统计学意义(t=14.940、8.765,均P<0.01);Pedf^(-/-)糖尿病组中视网膜CSF1R相对表达量为1.633±0.192,高于Pedf^(-/-)组的1.000±0.050,差异有统计学意义(t=5.537,P<0.01)。结论CSF 1 R可能为THP1细胞过表达腺病毒介导的PEDF抑制炎症过程中的关键基因和治疗靶点。

糖尿病氧化应激环境中α-Klotho对巨噬细胞-血管内皮细胞串扰的影响

目的:探讨糖尿病氧化应激环境中过表达α-Klotho(KL)的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增生、迁移、管腔形成以及紧密连接的影响。方法:将RAW264.7细胞分为对照组、4-羟壬二酸酯(4HNE)组、4HNE+KL组,采用免疫荧光实验检测RAW264.7细胞F4/80的表达。制备3组细胞的条件培养基用于培养HUVECs,分为M-NC组、M-4HNE组和M-4HNE+KL组。采用CCK8实验检测血管内皮细胞增生,采用划痕实验和Transwell实验检测迁移,采用管腔形成实验检测管腔形成,采用Western blot实验检测闭合蛋白5(Claudin 5)、咬合蛋白(Occludin)、带状闭合蛋白1(ZO 1)表达水平。结果:免疫荧光实验结果显示,4HNE组RAW264.7细胞F4/80荧光强度较对照组明显增强,而4HNE+KL组F4/80荧光强度较4HNE组明显减弱(均P<0.05)。CCK8实验结果显示,相比于M-NC组,M-4HNE组HUVECs增生显著增加,而M-4HNE+KL组HUVECs增生较M-4HNE组显著下降(均P<0.01)。划痕实验和Transwell实验结果显示,相比于M-NC组,M-4HNE组HUVECs迁移显著增强,而M-4HNE+KL组HUVECs迁移较M-4HNE组显著减弱(均P<0.01)。管腔形成实验结果显示,相比于M-NC组,M-4HNE组HUVECs管腔数显著增加,而M-4HNE+KL组管腔数较M-4HNE组显著下降(均P<0.01)。Western blot实验结果显示,相比于M-NC组,M-4HNE组HUVECs中Claudin 5、Occludin、ZO 1蛋白的相对表达量明显减少,而M-4HNE+KL组Claudin 5、Occludin、ZO 1蛋白的相对表达量较M-4HNE组明显增加(均P<0.01)。结论:KL通过改变糖尿病氧化应激环境中巨噬细胞激活状态抑制了HUVECs的增生、迁移、管腔形成,并增强了HUVECs的紧密连接。

外泌体在糖尿病视网膜病变中的研究进展

外泌体是由细胞分泌的小细胞外囊泡,携带许多生物分子,例如mRNA、微小RNA、蛋白质和转录因子等。外泌体在生理过程中发挥介导细胞间通讯的功能;在病理状态下,可以介导内皮细胞损伤、血管炎症和血-视网膜屏障(BRB)功能障碍等病理过程,在糖尿病视网膜病变(DR)的进展中发挥重要作用。循环外泌体来源广泛,与眼部及全身的基础代谢状态密切相关,其内容物含有大量生物学信息,可作为DR早期诊断标志物的来源;糖尿病状态下,循环外泌体参与运输炎性因子和血管生成因子,通过激活内皮细胞进而破坏BRB,可能作为DR新的治疗靶点;眼内各种细胞通过分泌外泌体的方式调节细胞增生和血管生成,视网膜色素上皮细胞来源的外泌体可在体外促进血管生成,有助于揭示DR新生血管病变机制。本文对外泌体在DR的发病、诊断和治疗等方面的研究进展进行综述,为深入理解DR的发病机制和诊治提供全新的思路。

慢病毒介导PEDF基因修饰人脐带间充质干细胞的定量蛋白质组学研究

目的探讨慢病毒介导色素上皮衍生因子(PEDF)基因修饰后人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的蛋白质组学变化。方法将hUCMSCs分为基因修饰组和对照组,基因修饰组采用慢病毒介导PEDF基因修饰hUCMSCs,对照组为正常hUCMSCs,提取各组细胞蛋白;采用FASP酶切法制备蛋白质样本,进行液相-质谱联用仪检测,采用SWATH模式采集数据。根据蛋白检测结果,进行差异蛋白分析及相应蛋白基因本体论(GO)分析和Reactome信号通路显著性富集分析。结果共鉴定出5361个可定量蛋白,与对照组相比,实验组慢病毒介导的PEDF基因修饰后差异表达倍数>1.5且P<0.05的蛋白共432个,其中上调蛋白219个,包括丝氨酸蛋白酶抑制剂家族F成员1(SERPINF1)(PEDF)、DEAD-box家族螺旋酶59(DDX59)、血小板反应蛋白1(THBS1)等;下调蛋白213个,包括Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、COL18A1等。GO分析结果显示,差异蛋白主要参与纤维蛋白溶解、细胞外结构构建、转运蛋白活性调节、仲醇及胆固醇生物合成、辅酶代谢、肽酶活性调节等多种生物学进程;Reactome信号通路显著性富集分析表明,差异蛋白主要涉及胰岛素样生长因子结合蛋白调节的胰岛素样生长因子的运输和摄取、蛋白质翻译后修饰磷酸化、细胞外基质构成、糖皮质激素代谢等信号通路。结论慢病毒介导PEDF基因修饰的hUCMSCs可通过调节多种蛋白的表达水平,改变细胞外基质结构,调节与细胞增生、自我更新和多能性相关的蛋白表达水平。

视网膜母细胞瘤诊断和治疗的研究进展

视网膜母细胞瘤(RB)是儿童最常见的眼内恶性肿瘤,常严重影响患儿的视功能、生活质量甚至生命安全。随着医学技术的不断发展,RB的诊断与治疗取得许多新的突破,有效地提高了RB患儿的保眼率及生存率。除了传统的影像学、眼科特检等检查外,基因诊断近些年来在临床上广泛开展。本文将重点对RB的诊断及治疗的新进展进行综述。

微视野生物反馈训练在黄斑疾病低视力康复中的研究进展

临床工作中,很多黄斑疾病如年龄相关性黄斑变性(ARMD)、Stargardt病在晚期因新生血管纤维瘢痕化或光感受器、视网膜色素上皮细胞受损形成中心暗点,从而出现视力下降、固视不稳定甚至旁中心注视,给患者的生活工作及心理带来很大困扰。长期以来,我们对该类患者的康复治疗手段有限,但近年来有不少文献指出,基于微视野计的生物反馈训练有望通过实现大脑皮层可塑性增强神经感觉适应能力,较大程度的利用残余视网膜功能来帮助那些伴中心暗点的低视力人群巩固或建立稳定的中心或旁中心注视,进而提高视力、阅读速度等视功能。为增进对该康复治疗手段的认识,本文将主要从微视野生物反馈训练(microperimetric biofeedback training,MBFT)机制及方案、优选视网膜位点的选择、在黄斑疾病中的临床应用及前景展开概述。

视觉健康管理背景下眼视光教育的探索与实践

世界卫生组织及我国“健康中国”战略都将视觉健康管理提升到前所未有的高度,多方位、全周期保障民众视觉健康,增强人们视觉保健的意识是我国实现健康中国的战略重点。而人才培养是行业发展的命脉与基石,因此眼视光人才教育的探索与建设又是重中之重。本文以天津医科大学眼视光专业为例,就当今社会视觉健康管理的背景下,如何切实有效地开展眼视光教育、培养与时俱进的眼视光专业人才进行探讨。

眼睑皮脂腺癌发病机制研究进展

眼睑皮脂腺癌是起源于眼睑部位皮脂腺体的恶性上皮性肿瘤,易复发、转移,主要治疗方式仍以手术切除为主,但患者整体预后并不理想,早期正确诊断和靶向治疗是改善患者预后和改进治疗的关键。眼睑皮脂腺癌临床表现复杂,早期容易误诊或漏诊进而延误治疗,病理检查是其诊断的金标准。此外,目前关于眼睑皮脂腺癌发病机制未完全阐明,癌发生发展的分子生物学过程尚未明确。因此,多方面了解眼睑皮脂腺癌发病机制为靶向治疗提供理论基础是十分必要的。本文主要从眼睑皮脂腺癌发病机制包括遗传因素、表观遗传、外源病毒感染、免疫逃逸、端粒酶学说等方面对眼睑皮脂腺癌作一综述。

呼吸道病毒眼部趋向性研究进展

目前已知引起人类呼吸道感染的病毒约有200种,一些病毒既能通过呼吸道途径进入人体引起感染,也可以先经眼表的接触感染,随后导致呼吸组织感染,还有部分病毒在呼吸道感染之后出现眼部并发症。本文介绍呼吸道病毒对眼部组织的趋向性及其可能机制,关注呼吸道病毒引起的全身感染与眼部感染的关系,并对临床上常见的引起眼部感染或全身感染并发眼部并发症的呼吸道病毒进行总结。

高度近视蛋白质组学研究及展望

高度近视是全世界低视力和致盲眼病的主要原因之一,并且有着日渐严峻的形势,已造成严重的经济和社会负担,然而其发病机制复杂,目前尚未完全阐明。近年来,随着生物学技术的不断进步,利用蛋白质组学技术寻找高度近视动物模型和患者组织中差异表达的功能蛋白质,以期获得与高度近视相关的特异性生物学标志物,为探索高度近视发病机制、诊断方法和治疗措施提供新的思路。本文就高度近视的临床特点、蛋白质组学研究内容及策略、高度近视蛋白质组学在模型动物眼组织和患者血液、晶状体、房水中的研究进展进行综述,分析蛋白质组学技术在高度近视研究中的突出优势和已有成果,从功能蛋白视角探索高度近视的病理机制,为开发具有治疗价值的特异性分子药物提供理论依据。

肥胖和翼状胬肉发病率关系的研究

目的:研究天津地区肥胖和翼状胬肉发病率的关系。方法:统计门诊就诊的翼状胬肉患者所占的比例。根据翼状胬肉的存在情况,比较体重指数(BMI)和腰围(WC)两项指标对其的影响。根据年龄、吸烟状况、饮酒情况、体育活动、文化程度、户外职业、居住面积、日照时间等因素进行多因素Logistic回归分析,分析每个肥胖参数与翼状胬肉的关系。结果:随着体重指数(BMI)的增加,翼状胬肉的患病率呈上升趋势,且腰围较高的男性和女性翼状胬肉的发生率均较高。在多因素分析中,超重女性的OR(95%CI)为1.32(0.90~1.73),肥胖女性的OR(95%CI)为1.54(1.33~1.74)。在男性中,肥胖与翼状胬肉之间没有明显的相关性。结论:女性肥胖与翼状胬肉存在相关的流行病学关系,翼状胬肉发病机制中的性别差异有待进一步研究。

多元协同视角下医学院校课程思政教学改革策略研究

随着新课改的不断深入推进,学生的综合素质教育备受社会各界关注,各种新型教学模式不断涌现,对传统教学模式产生了一定的冲击。其中“课程思政”理念的构建与实施将各类课程教育与思政教育有效融合,打开了现代化教育教学的新局面,从而保障思政教育的有效渗透,充分发挥思政教育的真正作用及影响力。文章基于多元协同视角,进一步探讨了医学院校课程思政教学改革的具体有效实施策略,希望可以为相关教育工作者提供些许借鉴。

云平台建设在不同层级医院中的应用效果研究

目的了解眼科专科医联体内,云平台建设在不同层级医疗机构中的应用效果。方法采用随机抽样的方法,选取眼科专科医联体内的156名医务人员使用云平台的情况进行问卷调查。结果在使用云平台进行转诊及远程会诊方面三级医院的使用意愿均高于一级医院高于二级医院,且差异均有统计学意义;在培训内容满意度方面:易于学习满意度最高,内容更新满意度最低,其中不同级别的医院在易于学习及内容更新方面差异有统计学意义(P<0.05)。结论眼科云平台建设在基层医疗机构中对眼科医务人员培训取得较好效果,为进一步提升基层卫生人员医疗服务水平提供参考和依据。

天津市6~18岁青少年近视患病率调查及其影响因素Logistic回归分析

目的:调查分析天津市6~18岁青少年近视患病率及其影响因素。方法:采用整群抽样方法抽取天津市6~18岁在校学生2230例作为研究对象。对所有研究对象均进行视力以及屈光度等指标的检测,同时通过调查问卷采集其基本资料。将所有研究对象按照是否近视分成近视组以及非近视组,以多因素Logistic回归分析明确天津市6~18岁青少年近视的影响因素。此外,比较两组青少年的血清微量元素水平。结果:2230例青少年近视患病率为41.12%,且6~9岁、10~12岁、13~15岁、16~18岁青少年的近视患病率呈逐渐升高趋势,组间对比差异有统计学意义(均P<0.05)。近视组年龄、近距离用眼时间、使用电子设备时间以及父母一方或双方近视人数占比均高于非近视组,而户外活动时间短于非近视组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析可得:天津市6~18岁青少年近视的危险因素包括年龄、父母一方或双方近视、近距离用眼时间、使用电子设备时间,保护因素为户外活动时间(均P<0.05)。近视组血清Zn2+、Fe2+水平低于非近视组,而Cu2+水平高于非近视组(均P<0.05)。结论:天津市6~18岁青少年近视患病率较高,其影响因素包括年龄、父母一方或双方近视、近距离用眼时间、使用电子设备时间以及户外活动时间,且近视青少年存在微量元素缺乏的情况,值得临床重点关注。

从能量代谢角度看糖尿病相关眼病的诊疗

能量代谢是维持细胞正常功能活动的基础,生命体的能量来源主要包括糖代谢和脂类代谢。细胞代谢状态决定细胞命运,与细胞的增生、迁移凋亡和分泌等生物学行为密切相关。病理状态下能量代谢调节异常可严重影响细胞、组织和器官的功能。糖尿病是一种以糖脂代谢异常为主要病理特征的代谢异常综合征。糖尿病个体眼组织细胞能量代谢失调是造成糖尿病相关眼部并发症的基础。糖尿病相关眼病主要包括糖尿病视网膜病变(DR)、糖尿病性白内障、糖尿病眼表疾病、视疲劳等,有研究显示高糖血症和胰岛素抵抗会造成眼部组织细胞糖代谢障碍,而脂代谢紊乱会造成线粒体功能障碍,进而引起细胞功能异常,成为糖尿病相关眼部疾病发病机制的始动环节。此外,糖尿病相关眼病的治疗也要从能量代谢角度着眼,致力于改善预后。因此眼科医师应重视能量代谢在糖尿病相关眼病的发生、发展和治疗中发挥的重要作用,从宏观角度审视糖尿病相关眼病的诊疗和预防过程,为糖尿病相关眼病的临床研究和治疗带来新思路。

树鼩细菌性角膜炎感染模型的建立及IL-17在模型中的表达

目的:建立树鼩铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌性角膜炎感染模型,并观察IL-17在模型中的表达,初步探讨IL-17在树鼩细菌性角膜炎中的作用。方法:采用接触镜辅助的角膜划痕法建立树鼩细菌性角膜炎模型。在进行接种后第1、4、7、14d使用前段照相、活体共聚焦显微镜对模型感染症状进行评估,制作病理切片观察角膜组织病理学改变。在相应时间点进行取材,实时荧光定量PCR检测树鼩角膜组织中IL-17 mRNA的表达,ELISA检测IL-17蛋白表达水平。结果:树鼩铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌性角膜炎模型造模成功率为96%、100%,树鼩细菌性角膜炎临床表现、炎症细胞浸润情况和组织病理改变规律相吻合。IL-17基因和蛋白的表达情况在树鼩角膜中与角膜炎症的严重情况一致。结论:采用接触镜辅助的角膜划痕法可成功建立更接近人细菌性角膜炎自然感染病程的树鼩铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌性角膜炎动物模型。IL-17参与树鼩细菌性角膜炎发生发展的过程。

糖尿病视网膜病变生物标志物的表达与测定

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见的血管并发症,也是不可逆盲的主要原因之一,其特征是视网膜血管渗漏、新生血管形成和纤维增生。尽管目前DR的治疗方式多样,但大多针对疾病中晚期且疗效欠佳。因此,DR的早期诊断和精准治疗十分重要。近年来,DR相关生物标志物的研究发展迅速,在疾病的风险评估、早期干预及治疗中发挥重要作用。经典的DR生物标志物如糖化血红蛋白,已在临床实践中广泛应用。随着对DR发病机制的进一步了解,炎症类生物标志物、血管生成类生物标志物已被证实与疾病的发生和进展密切相关。同时,随着科技的不断进步,先进设备与技术为DR相关生物标志物的探索构建了广阔平台,组学类生物标志物、影像类生物标志物和人工智能的应用已成为研究热点,为实现DR早期准确诊疗做出了重要贡献。本文就DR发生与发展中相关生物标志物表达与测定的最新研究进展进行综述,以期为DR的高效防控与有效治疗提供新思路。

高度近视患者房水非标记定量蛋白质组学分析

目的采用定量蛋白质组学技术分析高度近视患者房水中的蛋白质组谱。方法纳入2019年1—8月在天津医科大学眼科医院于白内障手术中用1 ml注射器采集伴或不伴高度近视的年龄相关性白内障患者房水标本各34例34眼(每例100μl),分别作为高度近视白内障组和单纯白内障组。各组分别选取16例16眼房水标本,采用BCA法进行蛋白定量并比较,采用非标记液相色谱串联质谱分析得到2个组的差异表达蛋白。进一步将生物大数据用基因本体功能富集和京都基因与基因组百科全书通路富集分析差异表达蛋白的功能和信号转导通路。各组分别选取18例18眼房水标本采用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行质谱检测结果的扩大样本量验证。结果高度近视白内障组房水标本平均蛋白质量浓度为(1134.91±104.78)ng/L,明显高于单纯白内障组的(706.71±85.43)ng/L,差异有统计学意义(t=11.977,P<0.01)。2个组患者房水标本中共鉴定出463个可定量蛋白质,其中86个差异表达蛋白质,包括49个表达上调蛋白和37个表达下调蛋白。这些差异表达蛋白的分类主要包括蛋白结合活性调节因子、细胞外基质蛋白、载体蛋白、细胞间信号分子、蛋白质修饰酶等,分别占32.70%、14.50%、9.10%、9.10%和7.30%。生物信息学分析表明,86个差异表达蛋白主要富集在补体激活及其调节、急性炎症反应、细胞外基质组织重塑等生物学过程。其中21个差异表达蛋白富集于补体和凝血级联通路,15个差异表达蛋白富集于细胞外基质-受体相互作用通路,8个差异表达蛋白富集于PI3K-Akt信号通路。ELISA结果表明,随机选取的3个差异表达蛋白在2个组之间表达变化趋势均与非标记定量蛋白质组学分析结果一致。结论高度近视白内障与单纯白内障之间房水蛋白质表达谱有显著变化,高度近视与炎症和免疫相互作用以及细胞外基质的重塑密切相关。

如何正确运用t检验——t检验的基本概念与前提条件

本文旨在全面介绍t检验的基本概念与前提条件(涉及实验设计和t分布两个方面)。t分布和t检验的适用场合包括:①估计符合某些条件时定量指标的参考值范围;②直线回归分析中个体因变量Y值的容许区间计算;③估计定量指标总体均数的置信区间;④线性相关与回归分析(包括多重线性回归分析)中某些参数的假设检验;⑤定量资料均值的假设检验,此时,严格地说,t检验仅适用于以下三种实验设计类型,即单组设计、配对设计和成组设计。在实际运用中,应正确辨析定量资料所取自的实验设计类型并检查资料的参数检验条件;若属于其他情形(参见前述提及的多种场合),一般都应有相应的统计学理论为依据(即可以证明问题中涉及的统计量服从t分布),否则,就可能属于滥用或误用。