四氯化碳制备不同实验动物肝纤维化模型的研究

由于各种理化因素或炎症长期反复作用于肝脏,引起肝细胞变性、坏死、增生和肝纤维结缔组织的增生和沉积[1],称为肝纤维化。如未及时对其进行控制和治疗,严重者可发展为肝硬化、肝癌,严重威胁人类的健康与生活质量[2]。建立标准和理想的肝纤维化动物模型,模拟人类肝纤维化状态,

巴马小型猪肝移植无肝期动物模型的建立

目的构建重复性和稳定性好的巴马小型猪肝移植无肝期动物模型。方法选用5只巴马小型猪,构建肝移植无肝期模型,为避免出现无肝期肠道淤血、循环衰竭,采用静脉-静脉转流模型,维持无肝期血压稳定以及加强术中麻醉与体液管理。观察并记录手术时间、出血量、补液量、转流流量及实验动物在血管阻断前、血管阻断时、静脉-静脉转流(venovenous bypass,VVB)开始后30 min、60 min、90 min和血管开放后30 min共6个时间点的血流动力学、肠损伤指标、肾损伤指标及内环境指标的变化情况。结果构建的小型猪肝移植无肝期静脉-静脉转流动物模型,静脉引流均较充分,主要表现为5只巴马小型猪均存活,且术中肠管颜色红润、蠕动正常,尿量正常。手术时间为(160±8)min,出血量约(158±32)ml,补液量为(1760±251)ml。与血管阻断前相比,血管阻断时动物心率明显加快,平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)明显降低至(44±15)mmHg,血液pH值下降、乳酸升高。转流开始后巴马小型猪MAP上升,心率变慢,而血液pH值、乳酸变化不明显。整个实验期间,实验动物电解质变化不明显,而肌酐、肠脂肪酸结合蛋白缓慢升高。结论构建的巴马小型猪肝移植无肝期动物模型稳定且安全,能为进一步的静脉-静脉转流装置的验证等前临床实验提供有效的动物模型。

重组人血小板生成素对D-氨基半乳糖诱导急性肝衰竭大鼠血小板的影响

目的通过观察急性肝衰竭(ALF)过程中血小板计数(PLT)、血小板生成素(TPO)、肝功能的动态变化,评估重组人血小板生成素(rhTPO)对ALF大鼠PLT及肝功能的影响。方法将24只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为模型组、TPO组及白细胞介素-11(IL-11)组,每组8只。所有大鼠经腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN,1?500 mg/kg,72 h内分次给药)诱导构建ALF模型。制模后,TPO组皮下注射rhTPO 15 μg/kg,连续5 d;IL-11组皮下注射IL-11 0.45 mg/kg,连续5 d。于制模前及制模后1、3、5、7、12 d静脉采血进行全血细胞检测,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TPO水平;于制模前及制模后1、3、5 d检测肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、白蛋白(ALB);并于制模后12 d处死大鼠,用苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变。结果 3组大鼠均于制模后24~48 h各死亡2只。HE染色显示,3组ALF大鼠于制模后12 d均可见到肝细胞大片状坏死、肝小叶结构紊乱,网状支架塌陷,肝窦充血、出血,及炎症细胞片状浸润。各组大鼠制模后1 d血清ALT、AST及TBil水平均明显升高,随后下降;ALB水平于制模后1 d明显下降后回升,但3组间肝功能指标变化趋势差异无统计学意义。3组大鼠制模后1 d PLT快速下降,之后随着肝功能改善逐渐恢复;其中制模后7 d TPO组PLT升至峰值并显著高于模型组〔PLT(×10^(9)/L):1?673.3±347.5比855.3±447.0,P<0.05〕,而IL-11组PLT与模型组差异无统计学意义〔PLT(×10^(9)/L):1?350.3±386.6比855.3±447.0,P>0.05〕。3组大鼠制模后1 d血清TPO水平均明显升高,随后下降,5 d时降至谷值,但3组间血清TPO水平变化趋势差异无统计学意义。结论 ALF大鼠PLT早期快速下降,并随着肝功能改善而逐渐恢复,血清TPO水平出现先升高后下降的变化。注射rhTPO可显著提升ALF大鼠PLT,但对肝功能及动物生存期无明显影响。

儿童肝移植术后常见并发症的临床病理特点分析

目的分析儿童肝移植术后肝穿活检常见并发症的临床及病理特点。方法回顾性分析2015年1月至2018年5月间168例儿童肝移植术后240例次肝穿刺活检的临床和病理资料,总结分析各种并发症的发生率及病理特点,分析各类急性排斥反应(AR)的病理特点以及C4d染色结果和Banff评分之间的相关性。结果86.67%(208/240)可作出明确病理诊断,各种并发症的检出率依次为T淋巴细胞介导性急性排斥反应(TCMR)60.57%(126/208)、药物性肝损伤(DILI)17.31%(36/208)、胆道并发症8.17%(17/208)、血管并发症3.37%(7/208)、缺血再灌注损伤(IRI)2.88%(6/208)、抗体介导的急性排斥反应(AMR)1.92%(4/208)、乙型肝炎病毒(HBV)感染1.92%(4/208)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)1.44%(3/208)、慢性排斥反应(CR)0.96%(2/208)和丙型肝炎病毒(HCV)感染0.48%(1/208)。AR中,TCMR和AMR分别占96.92%(126/130)和3.08%(4/160)。TCMR中门管区(PB)型占96.03%(121/126),术后30d内检出率为26.45%(32/121),"BanffACRRAI"评分3~5分、6~7分和8~9分别为65.87%(83/126)、25.40%(32/126)和4.76%(6/126),RAI评分与术后时间呈现负相关(r=-0.127,P=0.084)。BP型TCMR的中央静脉周围炎(CP)和门管区嗜酸性粒细胞浸润(PEI)的发生率分别为63.63%(77/121)和43.80%(53/121),PEI程度与RAI评分成正相关性(P<0.05)。CP型TCMR和AMR分别见于术后30~365d和8~180d,2例CR见于术后1095d和1335d,排斥反应类型和术后发生时间具有相关性(Z=9.231,P=0.026)。C4d阳性检出率为10%(24/240),与Banff评分和术后时间具有相关性,C4d阳性及强度与排斥反应类型和RAI评分具有相关性。DILI多见于术后90d内和180d后,胆道并发症术后180d内检出率82.35%(14/17),IRI在术后30d内,肝动脉并发症占血管并发症57.14%(4/7),发生时间均在术后90d内,肝炎病毒感染>365d,CMV感染<90d,NAFLD见于术后365d内。结论儿童肝移植术后各种并发症的临床和病理表现具有相对的特异性,肝穿刺活检对排斥反应的分型及分级的诊断具有决定性作用,在非排斥反应并发症的鉴别诊断中具有重要价值。

基于磁悬浮驱动原理的肝移植静脉-静脉转流装置的临床前评价

目的探讨基于磁悬浮驱动原理自制的肝移植静脉-静脉转流(VVB)装置的性能。方法实验研究,研究时间为2020年8月至2022年1月。实验动物为8头巴马小型猪,在阻断其肝门静脉和肝下下腔静脉后,行肝门静脉-股静脉-颈内静脉的转流,根据应用的转流装置不同将动物分为两组,A组(n=5)使用自制静脉转流装置,B组(n=3)使用进口静脉转流装置。比较两组动物在血管阻断前、血管阻断时、VVB开始后30 min、60 min、90 min和血管开放后30 min共6个时间点的血流动力学变化;比较两组动物的血液相容性指标、肠损伤指标、肾损伤指标及内环境指标在各时点的变化情况。两组间非重复测量的定量资料的比较采用独立样本t检验,两组间重复测量的定量资料的比较采用重复测量方差分析。结果两种装置在转流期间,静脉引流均较充分,主要表现为巴马小型猪的肠管颜色红润、蠕动正常,尿量正常。两组间各时点的血流动力学、血液损伤指标、肠损伤指标、肾损伤指标、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白及内环境指标的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。其中A组和B组转流结束肝血管开放后30 min各项指标如下:平均动脉压为(71.0±7.7)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和(74.0±8.7)mmHg,中心静脉压为(7.0±1.4)cmH_(2)O(1 cmH_(2)O=0.098 kPa)和(7.7±0.6)cmH_(2)O,心率为(131±10)次/min和(132±8)次/min;红细胞计数为(6.43±0.89)×10^(12)/L和(6.32±0.58)×10^(12)/L,血红蛋白为(108.4±5.9)g/L和(110.0±3.5)g/L,游离血红蛋白为(78.28±3.96)mg/L和(78.08±4.54)mg/L;肠脂肪酸结合蛋白为(2.27±0.49)μg/L和(2.40±0.78)μg/L;肌酐为(68.30±9.77)μmol/L和(79.90±26.91)μmol/L,尿素氮为(3.94±1.39)mmol/L和(3.45±0.65)mmol/L;中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白为(4.02±0.53)μg/L和(3.86±0.23)μg/L;pH值为7.27±0.04和7.23±0.03,乳酸为(6.18±2.62)mmol/L和(4.30±0.50)mmol/L,Na^(+)为(136.3±3.0)mmol/L和(137.6±1.6)mmol/L,K^(+)为(3.89±0.42)mmol/L和(3.98±0.17)mmol/L,Ca^(2+)为(1.40±0.03)mmol/L和(1.40±0.04)mmol/L;各指标的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论自制便携式静脉转流装置能安全有效地应用于巴马小型猪的VVB,且可达到与进口装置相似的性能。