脂多糖诱导血小板凋亡及 Toll 样受体4的介导作用

目的：探讨脂多糖（ lipopolysaccharide ， LPS）对血小板凋亡的诱导作用及血小板Toll样受体4（Toll－like receptor 4， TLR4）在LPS诱导的血小板凋亡中的作用。方法取健康志愿者的新鲜静脉血，分离富含血小板血浆，制备洗涤血小板，随机分为对照组（ C组）、LPS组（ L组）、TLR4单克隆抗体（ TLR4 monoclonal antibody ， TLR4mAb）预处理组（ P组）及凝血酶组（ T组）4组。各组均加入FcγRⅡ单克隆抗体封闭20 min；P组预先加入TLR4mAb，其余各组加入等量MTB缓冲液，室温孵育30 min；随后，L组及P组均加入LPS，T组加入凝血酶，C组加入等量的MTB，各组于室温下孵育30 min；裂解液裂解血小板，提取血小板蛋白，凋亡因子抗体芯片法检测各组凋亡相关蛋白的表达水平。采用芯片分析软件进行数据分析。结果人血小板可以表达多种凋亡相关蛋白。与C组比较，L组显示36种血小板凋亡相关蛋白的表达升高（ fold change ＞1畅50），包括促凋亡蛋白16种，抗凋亡蛋白8种，双向调控蛋白12种；与C组比较，T组可以诱导29种凋亡相关蛋白表达增高（fold change＞1．50），其中促凋亡蛋白15种，抗凋亡蛋白6种及双向调控蛋白8种；与L组比较，P组凋亡相关蛋白中有29种表达下调（fold change＜0．67），但与C组比较，仍有17种凋亡相关蛋白的表达增高（fold change＞1．50）。结论体外条件下，LPS可以通过内源性及外源性凋亡通路诱导人血小板发生凋亡，拮抗LPS－TLR4通路可能减少LPS诱导的血小板凋亡。