胎儿骨髓源性亚全能干细胞分离培养及诱导肝细胞分化研究

目的研究分离胎儿骨髓源性亚全能干细胞及体内、外向肝细胞分化的潜能。方法利用密度梯度离心结合免疫磁珠方法分离胎儿骨髓源性亚全能干细胞,体外培养鉴定,诱导分化。制备肝功能衰竭重度联合免疫缺陷小鼠(severecombinedimmunodeficiency,SCID)模型。肝原位输注106左右CD105+细胞,对照组分别输注106左右的CD105-细胞或同等体积的培养液。移植细胞后2d、7d、1个月、3个月时分别取3只鼠的血清及组织标本行肝功能和病理学、免疫组织化学检测。结果免疫磁珠筛选后的免疫细胞化学检测CD105呈弱阳性表达;细胞在对数生长期的倍增时间为30h左右;约传10代后进入衰退期;SCID鼠移植细胞3个月后用鼠抗人白蛋白抗体检测小鼠肝脏中的人白蛋白,可见有点状或小灶状表达。结论来源于胎儿骨髓的亚全能干细胞可以在体外及肝脏微环境下转化为肝细胞样细胞。因此进一步深入研究组织微环境在细胞转化中的机制有十分重要的意义,将为开发诱导胎儿骨髓亚全能干细胞的多向分化潜能提供理论依据。

人脐带间充质干细胞体外长期培养及向肝样细胞的分化(英文)

目的:观察人脐带间充质干细胞体外长期培养的生物学特性,探讨其向肝样细胞分化的可能性。方法:脐带来源于天津市第三中心医院住院的健康足月产妇,采用酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,待细胞生长至80%～90%融合时传代。取传至第9代细胞接种于12孔板内,调整细胞浓度为5×1010L-1,加入含肝细胞生长因子、成纤维生长因子4、抑瘤素的DMEM培养基,诱导28d。MTT法测定细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学及流式细胞仪鉴定细胞表型;免疫细胞化学染色鉴定诱导后肝细胞特异表面标志物的表达,以及糖原染色结果。结果:从人脐带中分离得到的间充质干细胞贴壁生长,形态类似于成纤维细胞,80%以上处于G0/G1期,具有良好的生长活性,可在体外稳定传代20次以上;CD29,CD90,CD105,Vimentin呈阳性表达,基本不表达造血细胞标志CD34和内皮细胞标志CD31。随诱导时间的延长,圆形细胞逐渐增多,形态似肝细胞;诱导1周时细胞开始表达肝细胞表面标志物甲胎蛋白、细胞胶蛋白18、细胞胶蛋白19;诱导3周时开始表达成熟肝细胞标志白蛋白;诱导4周时白蛋白表达增强,且诱导细胞糖原染色呈阳性。结论:从人脐带中可成功分离出间充质干细胞,实现体外长期培养,并可诱导分化为肝样细胞。

胎儿骨髓源性胚胎后亚全能干细胞分离培养及向肝细胞的诱导分化(英文)

背景:目前研究认为在胚胎发育后的多种组织中存在一类干细胞群体,可分化为不同胚层的组织细胞;但又不同于胚胎干细胞,随着妊娠期间胚胎的发育胚胎干细胞会逐渐失去部分分化潜能,会出现一些特殊表型或分子标记,如 CD105,称其为胚胎后亚全能干细胞。目的:根据胚胎后亚全能干细胞表达 CD105的特性分离胎儿骨髓源性胚胎后亚全能干细胞,经体内外诱导使其分化为肝细胞样细胞并检测其功能。设计、时间及地点:动物随机分组,细胞分子生物学实验,于 2003-03/2005-03 在天津市第三中心医院卫生部人工细胞工程技术研究中心完成。材料:取 22 周龄左右胎儿股骨和胫骨骨髓分离出胚胎后亚全能干细胞。以雌性成年SCID 鼠作为干细胞移植的受体。CD105 免疫磁珠为德国 Miltenyi Biotec 产品。鼠抗人白蛋白抗体为美国 Sigma 产品。碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子为英国PEPROTECH 产品。方法:利用密度梯度离心结合免疫磁珠方法分离胎儿骨髓 CD105(+)胚胎后亚全能干细胞,体外培养,用含 30 μg/L 肝细胞生长因 20 μg/L 碱性成纤维细胞生长因子的诱导培养基将其向肝细胞样细胞诱导分化。将24 只 SCID 鼠随机分为干细胞治疗组和对照组,每组 12 只,均按 800 mg/kg 的剂量向腹腔内注射 D-氨基半乳糖制备肝损伤模型。造模次日,干细胞移植组鼠在肝原位输注106 左右 CD105(+)细胞,对照组分别输注106左右的CD105(-)细胞或同等体积的培养液。主要观察指标:于干细胞移植后 2,7 d,1,3 个月对肝脏组织行免疫组化检测人源白蛋白表达。结果:免疫磁珠筛选后的细胞免疫细胞化学检测 CD105 呈弱阳性表达;细胞在对数生长期的倍增时间为 30 h 左右;约传 10 代后进入衰退期。SCID 鼠移植胚胎后亚全能干细胞 3 个月后在小鼠肝脏中可见有点状或小灶状的人白蛋白表达,对照组未见表达。结论:来源于胎儿骨髓的胚胎后亚全能干细胞可以在肝脏微环境下转化为肝细胞样细胞。

ICU患者鼻胃管和鼻空腔管饲营养方式效果的比较

目的探究重症加强护理病房(ICU)患者鼻胃管和鼻空肠管不同管饲营养方式的效果。方法选取医院2016年1月至2017年5月收治的ICU重症患者76例为研究对象,随机分为两组,各38例。对照组给予鼻胃管饲营养支持,试验组给予鼻空肠管饲营养支持。比较两组营养耐受、营养指标及并发症情况。结果对照组营养耐受总发生率比试验组高,差异有统计学意义(P<0.05);置管后对照组血清蛋白、人血白蛋白、血清总蛋白水平均比试验组低,差异有统计学意义(P<0.05);两组并发症发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论鼻空肠管饲与鼻胃管饲营养方式相比,在给予ICU重症患者营养支持的耐受性及安全性更高,并能够有效改善患者机体内营养指标,利于患者康复。