应用生物发光技术研究甲基硒酸对L9981-Luc肺癌细胞株移植瘤模型生长转移的影响

背景与目的甲基硒酸是一种新型的人工合成的硒化合物。研究发现甲基硒酸对肿瘤细胞的生长转移有抑制作用。本研究的目的是探讨甲基硒酸对L9981-Luc裸鼠异体移植瘤生长和转移能力的抑制作用及机制。方法建立L9981-Luc肺癌细胞株移植瘤模型,用精诺真活体动物可见光成像系统观察肺癌移植瘤肿瘤生长转移情况。实验将6周龄裸鼠15只,随机分为3组,每组5只,对照组每日腹腔注射生理盐水0.2mL;甲基硒酸组每日腹腔注射甲基硒酸溶液50μg(0.2mL);顺铂组每周腹腔注射顺铂4mg/kg。结果接种第21天,不同组间原发瘤发光值比较差异有统计学意义(P=0.002);顺铂组发光值明显低于对照组(P=0.001),甲基硒酸组发光值明显低于对照组(P=0.031)。不同药物处理组胸部转移信号发光值差异无统计学意义(P>0.05)。结论甲基硒酸能明显抑制L9981-Luc裸鼠异体移植瘤生长,并有抑制L9981-Luc原发瘤肺转移的趋势。

MiR-192靶向负调控Bim表达诱导肺癌顺铂耐药

背景与目的顺铂是非小细胞肺癌化疗的一线药物,但获得性耐药限制了其疗效的发挥。本研究的目的是筛选鉴定与肺癌顺铂耐药相关的microRNAs,探讨其与肺癌顺铂耐药的影响及分子机制。方法应用miRNA芯片及RT-PCR筛选鉴定A549与A549/DDP肺癌细胞间的差异表达miRNAs,将差异表达miR-192转染A549和A549/DDP细胞株,CCK-8检测miR-192对半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,生物软件预测及双荧光素酶报告基因法寻找miR-192的靶基因,RT-PCR及Western blot检测靶基因表达水平在转染前后的变化。结果 MiR-192在A549/DDP中显著高表达,表达量是A549细胞表达量的37.59±0.35倍。在低表达miR-192的A549细胞中过表达miR-192,细胞对顺铂的IC50显著增高,顺铂引起的细胞凋亡率显著降低;反之,在高表达miR-192的A549/DDP中抑制miR-192的表达,顺铂的IC50显著降低,顺铂引起的细胞凋亡率显著增加。miR-192可靶向作用促凋亡基因Bim的3’-UTR,并在转录后水平负向调控Bim的表达。结论 MiR-192通过靶向负调控促凋亡基因Bim表达,诱导肺腺癌细胞株A549产生顺铂耐药,并减少顺铂引起的细胞凋亡。

IKBKB在人肺腺癌细胞株A549及其耐药细胞株A549/DDP中的表达和意义

背景与目的肺癌顺铂耐药在临床治疗中广泛存在,严重影响了肺癌患者的治疗效果,因此研究肺癌耐药机制对新药的研发和解决临床肿瘤耐药有十分重要的意义。IKBKB是组成IKK复合物重要的催化亚基之一,其对核转录因子NF-κB的激活起到重要调控作用。本研究旨在探讨IKBKB基因在肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)与其亲本肺腺癌A549细胞株中的表差异及其调控肺腺癌顺铂耐药的机制。方法应用MTT法检测A549和A549/DDP细胞株顺铂敏感性及IKBKB基因对A549细胞株顺铂耐药性的影响。Real-time PCR检测肿瘤细胞中IKBKB基因mRNA变化,流式细胞学检测肿瘤细胞凋亡率,双荧光素酶报告基因实验检测NF-κB的活性。结果 A549细胞与A549/DDP细胞在IC50和凋亡率方面均有统计学差异,IKBKB基因在A549/DDP细胞株中mRNA表达水平明显高于A549。与对照组比较,pcDNA3.1/IKBKB转染A549细胞后,IKBKB基因在mRNA水平明显升高,A549细胞顺铂耐药性明显增加,IC50增加2.85倍,凋亡率减少59%,NF-κB的活性明显升高。结论 IKBKB基因通过激活NF-κB信号通路抑制细胞凋亡,从而导致细胞耐药性增加,这一研究结果对新抗肿瘤药物的研发和解决肿瘤耐药难题有重要意义。