荧光定量PCR法测定重组人干扰素α2b原液中宿主DNA的残留

目的建立重组人干扰素α2b原液中宿主DNA残留量测定的方法并进行验证,用于对该产品的质量控制。方法通过wako DNA提取试剂盒提取干扰素原液中的宿主残留DNA,再利用SYBRGreen染料法对样品和标准DNA进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量分析。对建立的方法进行引物特异性以及结果准确性和精密性的验证,同时对企业提供的3批干扰素原液中的残留DNA测定。结果该方法检测假单胞菌基因组DNA的最低准确定量浓度可达12 fg/μL,DNA含量在12 fg/μL^120 ng/μL范围内线性良好,标准曲线的相关系数r=0.998;wako DNA提取试剂盒提取不同量的加标样品回收率均在50%~200%范围内;该方法检测3批干扰素原液的DNA残留量均低于标准限度,符合《中国药典》三部2010年版和2015年版中关于假单胞菌产重组人干扰素α2b原液中宿主DNA残留量的要求。结论 wako DNA提取试剂盒能解决干扰素原液中样品前处理的技术难点,与定量PCR法结合能够简便、快速、准确地对干扰素原液中残留的DNA定量测定。