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题名IgG1型单克隆抗体对照品的一级结构解析
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作者
崔新玲
胡志上
孟晓光
钱小红
朱涛
应万涛
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机构
天津科技大学生物工程学院
北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室
中国计量科学研究院
北京正旦国际科技有限责任公司
天津康希诺生物股份有限公司
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出处
《分析测试学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期939-945,共7页
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基金
国家重点研发计划(2017YFF0205400,2016YFA0501300)
国家自然基金重点项目(81530021)
创新基金课题(BWS14J052,16CXZ027)
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文摘
对单克隆抗体药物对照品(IgG1型)进行了全面的结构表征。采用ExactiveplusEMR质谱测定了去N糖前后抗体的精确分子量,并通过计算N糖含量得出其完整分子量为148285.0~149020.8,完整去糖后分子量为145810.4,N糖含量为1.67%~2.15%。优化了全柱成像实时等电聚焦毛细管电泳(WCID-cIEF)检测方法,结果显示该抗体等电点分布在8.21~8.74之间,其中主成分等电点为8.61,相对含量为61.43%。继而使用离子交换色谱检测了电荷异质性,发现碱性峰含量为4.1%,酸性峰含量为23.9%,主峰含量为72.0%,与WCID-cIEF结果吻合,并证明了方法间良好的重现性。通过切糖前后的肽图分析,获得糖肽分布信息,识别出糖修饰位点及重轻链的互补决定区(CDR),甲硫氨酸(M)的氧化位点及氧化率,并通过抗体还原前后的肽图解析出二硫键连接。研究结果同时提示该抗体对照品无C末端糖化修饰现象。
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关键词
抗体对照品
分子量
等电点
电荷异质性
肽图
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Keywords
reference antibody
molecular weight
isoelectric point (pI )
charge heterogeneity
peptide mapping
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分类号
O657
[理学—分析化学]
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