CIK细胞体外诱导培养及对不同肿瘤细胞株的细胞毒作用

目的体外诱导培养细胞因子诱导的杀伤性细胞(CIK),研究其增殖、免疫表型变化及对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。方法从外周血中分离单个核细胞,多种细胞因子进行诱导,扩增培养CIK细胞,细胞计数检测其增殖能力,流式细胞仪检测细胞免疫表型,MTT法检测CIK细胞对人红白血病细胞系K562、人B淋巴瘤细胞系BJAB、人肺癌细胞系A549、人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞系HepG2的细胞毒性作用。结果 CIK细胞在第5天开始进入快速增殖阶段,20d后增殖为原种植细胞数的182倍,免疫表型为CD3+(97.83±1.03)%、CD3+CD8+(77.12±1.60)%、CD3+CD56+(27.58±2.02)%。CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+的比例随着培养时间的延长增殖迅速(P<0.01);培养第13天,细胞杀伤效靶比为40∶1的情况下对细胞系进行杀伤,K562为(88.89±7.22)%、BJAB为(75.42±9.52)%、A549为(63.19±5.67)%、MCF-7为(43.53±6.31)%、HepG2为(42.63±7.69)%,CIK细胞对以上细胞系均有明显的杀伤活性。结论通过细胞因子的诱导培养,可以在体外大量增殖CIK细胞,CIK细胞对不同肿瘤细胞株有很强的杀伤作用,具有很高的临床应用价值。

不同种培养基对体外诱导免疫细胞的生物活性及细胞毒作用

目的:探讨3种培养基对细胞因子诱导免疫细胞在增殖、免疫表型、杀伤、因子分泌等多方面生物学活性的影响。方法:正常人外周血单个核细胞分别用MD-CM-STM-N、AIM-V与RPMI 1640培养基经过CD3McAb、IL-2、IFN-γ诱导并培养。用台盼蓝活细胞计数计算细胞增殖情况,MTT法测定多种癌细胞杀伤,ELISA双抗夹心法测分泌IFN-γ的表达水平,流式细胞仪检测免疫表型。结果:与RPMI 1640组相比,MD-CM-STM-N和AIM-V组细胞快速增殖期延长至第13天。其中MD-CM-STM-N组最终扩增量最高,杀伤活性亦有明显提高(P<0.05),CD8+、CD3+、CD56+的表达率也明显增加(P<0.05);细胞因子IFN-γ的分泌时间延长。结论:无血清培养基MD-CM-STM-N、AIM-V诱导免疫细胞的增殖能力、免疫表型表达率、细胞毒性、分泌细胞因子水平均高于RPMI1640培养基,在增殖能力方面MD-CM-STM-N更具优势,为细胞因子诱导免疫细胞治疗提供了实验和理论依据。