临床用间充质干细胞的质量控制研究

科学界取得的突破性进展正在使干细胞治疗疾病成为可能，美、英、法、韩、印、中等国均开展了多项间充质干细胞制品的临床研究。但由于研究机构间缺乏统一规范，各机构对于干细胞制品无统一的衡量标准，造成研究结果无法相互认可和形成公认的结论，阻碍了研究进程；任何一项科学研究都是循序渐进的，干细胞作为新型治疗手段，在其分离、扩增、制备、贮存、传送、回输等过程中，制品的一致性、稳定性如缺乏有效的控制方法，将导致干细胞治疗的安全性、有效性评价很难实现；随着对干细胞的认识不断加深，广大科研工作者结合自身的研究，提出自己的经验和体会，不断与国际标准接轨，对提高我国干细胞研究的水平具有重要意义。欢迎全国各有关单位和专业人员踊跃参与讨论，为临床用间充质干细胞的质量研究建言献策，使这项技术健康有序的发展，造福广大患者。

人脐带间充质干细胞注射液的长期稳定性研究

近年来随着干细胞研究的快速发展，干细胞逐渐在医学领域得到广泛应用。为适应临床使用的需要，各种干细胞制品制剂诸如新鲜制剂、冻存制剂、凝胶剂、组织工程细胞装置相继被开发。美国、加拿大、韩国的一些干细胞药物相继完成临床前研究进入临床试验阶段，这些都标志着干细胞从实验室技术向着药物的方向发展。干细胞向药物转化过程中的药学研究是药物安全性和有效性的基础，参照药物研发技术规范进行干细胞药物制剂稳定性的研究是非常重要的一部分。

负载人脐带间充质干细胞的水凝胶对糖尿病小鼠皮肤创面愈合的疗效

背景:目前,缺乏有效的治疗方法促进糖尿病患者的皮肤创面愈合。人脐带间充质干细胞已被证明对皮肤再生具有多种治疗作用,可注射水凝胶具有良好的生物相容性和可调节性,可以提高干细胞治疗的效果。目的:以负载人脐带间充质干细胞的水凝胶为切入点,观察其对小鼠糖尿病皮肤创面的疗效,并探索可能的作用机制。方法:①链脲佐菌素溶液连续腹腔注射5 d构建C57BL/6J小鼠糖尿病模型,经尾静脉采血测血糖值评估模型是否建立成功。②造模成功后,利用打孔器建立小鼠背部皮肤损伤模型,水凝胶组给予纯水凝胶敷胶治疗,复合水凝胶组给予负载有人脐带间充质干细胞的水凝胶治疗,对照组给予等量生理盐水治疗,治疗第7,14天观察创面愈合情况。结果与结论:①敷胶后的14 d内,水凝胶组、复合水凝胶组小鼠皮肤创面面积明显低于对照组(P<0.05),复合水凝胶组的皮肤创面面积明显低于水凝胶组(P<0.05);②苏木精-伊红染色结果显示:复合水凝胶组创面肉芽组织新生率明显高于水凝胶组和对照组(P<0.05);③Masson染色结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织胶原沉积率明显增加(P<0.05);④免疫组化CD31染色结果显示:复合水凝胶组创面组织中新生微血管数量明显高于水凝胶组和对照组(P<0.05);⑤免疫组化CD45染色结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织中炎症面积明显减少(P<0.05);⑥免疫荧光染色和qRT-PCR结果显示:与对照组和水凝胶组相比,复合水凝胶组创面组织中M2巨噬细胞及其标志性因子白细胞介素10表达显著升高,且M1巨噬细胞及其标志性因子白细胞介素6表达明显降低(P<0.05);⑦上述结果提示:负载人脐带间充质干细胞的氯化壳聚糖-β-甘油磷酸钠复合水凝胶通过促进糖尿病创面肉芽组织和微血管形成,减轻炎症反应,从而促进创面愈合。

人脐带间充质干细胞移植治疗心肌肥厚模型小鼠

背景:左心室肥厚作为高血压病常见的靶器官损害,是心脑血管疾病高发病率和死亡率的独立危险因素。间充质干细胞可以促进组织修复,调节免疫反应,可作为治疗心肌肥厚的种子细胞。目的:观察人脐带间充质干细胞静脉注射治疗小鼠心肌肥厚的疗效。方法:①将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、人脐带间充质干细胞组、PBS组,其中人脐带间充质干细胞组和PBS组采用主动脉弓缩窄术构建C57BL/6J小鼠心肌肥厚模型,人脐带间充质干细胞组小鼠术后第5周开始,尾静脉注射细胞混悬液,每周1次,连续4周,PBS组小鼠尾静脉注射等量PBS,术后6-11周采用超声心动图观察各组小鼠心功能,术后9,10,11周采用苏木精-伊红染色、Western blot检测心肌细胞肥大程度;②体外实验中,通过异丙肾上腺素诱导H9c2细胞肥大,然后将人脐带间充质干细胞与肥大的H9c2细胞共培养于Transwell^(TM)小室中,共培养48 h后F-actin染色分析H9c2细胞横截面积,qRT-PCR检测H9c2细胞内心房钠尿肽、脑钠尿肽和β-肌球蛋白重链mRNA表达量。结果与结论:①超声心动图结果证实:人脐带间充质干细胞组小鼠左心室射血分数、左室短轴缩短率明显高于同期PBS组(P<0.05);②苏木精-伊红染色结果发现,相比于PBS组,人脐带间充质干细胞组心肌纤维排列整齐,心肌细胞横截面积明显减小(P<0.05);③Western blot实验结果证明,人脐带间充质干细胞组小鼠心肌组织中心房钠尿肽、脑钠尿肽和β-肌球蛋白重链蛋白水平明显低于同期PBS组(P<0.01);④与异丙肾上腺素组相比,共培养后的H9c2细胞面积明显减小(P<0.01),同时,H9c2细胞中心房钠尿肽、脑钠尿肽和β-肌球蛋白重链mRNA水平明显减少(P<0.05);⑤结果表明,人脐带间充质干细胞可通过抑制细胞内肥大相关基因的表达,在一定程度上缓解压力负荷型心肌肥厚的发生,改善小鼠心功能。

脐带间充质干细胞移植对肠辐射损伤模型鼠治疗作用的实验研究

目的探讨脐带间充质干细胞移植对小鼠肠道损伤的治疗作用,为人急性肠型放射病的治疗寻找可靠的供体来源。方法体外诱导观察间充质干细胞的体外多向分化能力。对肠道放射损伤模型鼠移植CM-D iI荧光标记后的人间充质干细胞,组化染色观察肠道粘膜的病理变化,激光共聚焦显微镜观察供体细胞在模型鼠肠道粘膜的定位。结果移植MSC5周后模型鼠的一般状况和肠道病理学表现明显改善,荧光示踪发现移植细胞分布于肠粘膜淋巴组织内和腺上皮细胞间,提示MSC可能参与了肠道粘膜的修复过程。结论脐带间充质干细胞移植可以明显改善模型鼠的肠道病变,有望用于人急性肠型放射病的治疗。

内镜冷光辐射对美蓝染色胃癌细胞SGC7901 DNA损伤的研究

目的 探讨胃镜冷光源照射对美蓝（MB）染色后的胃癌细胞DNA的损伤情况,并探索损伤的发生机制和作用规律.方法 应用单细胞凝胶电泳技术,检测DNA损伤情况;Annexin VFITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡;采用荧光探针DCFH-DA,进行细胞内活性氧（ROS）检测.结果 冷光照射MB染色的SGC7901细胞后,其DNA损伤程度较未照射组增加（F=8.39,P＜0.05）,损伤严重程度与光照时间呈正相关,光照停止则有损伤修复,照射后细胞较未照射细胞出现明显凋亡（x2=7.71,P＜0.05）;同时,经照射后的细胞内ROS高于未照射组（F=34.11,P＜0.01）.结论 美蓝色素内镜的冷光辐射可造成SGC7901细胞的DNA损伤,并诱发细胞凋亡,其作用机制与光化学反应激发产生的过量ROS有关.

基于CiteSpace可视化分析间充质干细胞治疗糖尿病足的研究现状及趋势

目的探索间充质干细胞(MSCs)治疗糖尿病足的研究现状,研究热点和研究趋势。方法本文利用分析软件CiteSpace和文献管理软件EndNote,运用可视化分析方法对近10年内Web of science数据库中收录的MSCs用于治疗糖尿病足的研究文献数据进行处理,从研究作者、研究机构、科学分类和关键词等方面绘制知识图谱。结果共纳入231篇文献。(1)研究热点主要包括创面修复、血管新生、生长因子和诱导分化等;(2)旁分泌作用和诱导分化机制在糖尿病足的皮肤再生和伤口愈合中发挥有益作用;(3)突变词(2020年至2022年)主要包括"脂肪源间充质干细胞"与"临床试验";(4)在领域交流合作方面我国的研究机构和学者占主导地位,且在研究学科上呈多学科研究趋势。结论通过可视化分析初步展示近10年糖尿病足的研究现状、热点与趋势,且描绘MSCs治疗糖尿病足的临床应用与价值,为今后糖尿病足的研究工作提供有益参考和借鉴。