基于分子印迹的表面等离子共振传感器在食品安全检测中的应用

分子印迹聚合物与表面等离子共振传感器相结合,可用于分子间相互作用和结合特性的研究。该文综述基于分子印迹的表面等离子共振传感器的原理和技术优势,总结食品中农兽药残留、生物毒素以及其他污染物检测的最新研究进展,展望其在食品安全检测中的发展前景,为其开发和应用提供研究思路和理论参考。

表面等离子共振传感器在食品真菌毒素检测中的应用

作为天然污染物之一,真菌毒素是全球食品安全的重要威胁。但是,真菌在食品生产中的污染是不可避免的,真菌毒素含量的快速检测及其污染程度的确定可以为真菌毒素的风险防控提供有效的手段。作为一种快速、简单、低成本的分析方法,表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)传感器已广泛用于多种污染物的实时定性和定量检测,而基于不同分析方法的SPR传感器极大地扩大了其检测目标物的范围,提高了其灵敏度。综述了基于竞争性抑制免疫分析法、分子印迹法、核酸适配体法的SPR传感器在食品真菌毒素检测中的最新研究进展,并对其未来发展前景进行了展望,旨在为其进一步的开发和应用提供研究思路和理论参考。

微生物阿魏酸酯酶及其在食品中的应用研究进展

阿魏酸酯酶(feruloyl esterases,FAEs)是羧酸酯酶的一个亚类,可特异性催化羟基肉桂酸和植物细胞壁多糖之间的酯键水解释放羟基肉桂酸,在食品行业中被广泛应用。该文对来源于微生物的FAEs的结构、分类、催化机理及分子改造等研究进展进行梳理,并对其在面团发酵、酒类酿造、膳食纤维补充剂、茶叶、食品添加剂中的应用及前景进行讨论和展望,以期为阿魏酸酯酶的应用提供参考。

海关食品安全快速检测标准研究进展

近年来,食品安全成为社会极度关注的热门话题。食品安全关系到人们最基本的生存需求,是社会安定、平稳发展的基础,其中进口食品的安全性尤为重要,因此需要对进入海关的食品进行精密仔细的安全性检测,以确保进口食品的安全性。海关食品的安全检测方法是保障进口食品安全性的重要手段,也是进口食品进入我国的第一道安全防线。本文分析了食品快速检测技术在国内外和海关系统的应用,以及海关对快检方法的技术要求,并提出了建立海关食品快检方法标准的建议,以期为海关食品安全监管中的快检技术发展打下坚实的基础。

超高效液相色谱⁃串联质谱检测枸杞中苦参碱和氧化苦参碱残留量的方法

使用超高效液相色谱⁃串联质谱仪,采用同位素内标法定量,建立枸杞中苦参碱和氧化苦参碱的测定方法。样品经1.0%磷酸水溶液超声提取,强阳离子固相萃取柱净化,10 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱,采用0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,通过T3色谱柱分离,电喷雾离子源正离子扫描模式、多反应监测模式检测。通过考察不同种类提取溶剂、超声时间、固相萃取条件下目标化合物峰面积,确定最优前处理方式。结果表明:苦参碱和氧化苦参碱在0.5~50.0μg/kg范围内呈现良好线性关系,相关系数(R2)均大于0.999。方法检出限0.05μg/kg,定量限0.2μg/kg。低、中、高3个浓度加标回收试验,苦参碱回收率范围在76.3%~90.7%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)在2.2%~7.4%,氧化苦参碱回收率范围在79.2%~89.0%,RSD在3.1%~6.6%。该方法适用于枸杞中苦参碱和氧化苦参碱检测。

组学技术在食品安全检测中的应用

食品安全是全球关注的热点,食品安全检测是保障食品安全的重要环节。随着消费者对食品安全要求的提高,传统检测技术已经无法满足食品安全检测多样性的需求。近年来以基因组学、蛋白组学、代谢组学为代表的组学技术迅速发展,为食品安全检测带来了新突破。本文对近年来蛋白组学、代谢组学和基因组学技术在食品安全检测方面的应用进行了综述,并对未来组学技术应用于食品安全检测的发展趋势进行了展望。

赤羽病病毒单克隆抗体的制备及c-ELISA抗体检测方法建立

为建立一种用于快速检测赤羽病病毒抗体的竞争ELISA法。用AKV病毒免疫Balb/C小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行免疫融合,以获得抗AKV的单克隆抗体;利用Bac-to-Bac杆状病毒表达的SBV N蛋白作为诊断特异性抗原,山羊抗鼠HRP-IgG为二抗,建立并优化AKV抗体检测的竞争ELISA方法。得到一株持续稳定繁殖的能够分泌单抗AKV核蛋白抗体的杂交瘤细胞株,单抗亚型鉴定为:重链IgG1,轻链kappa,仅能与AKV病毒呈阳性反应,与BTV、FAMD、EHDV病毒等病毒抗原不发生特异性反应;建立的检测AKV抗体ELISA检测方法,诊断抗原最佳包被浓度为0.5μg/mL,1∶1000抗体稀释比,1∶50血清稀释比,1∶2000二抗稀释比,封闭条件为5%BSA,37℃封闭2 h,确定了血清抑制率大于等于44%时为阳性,小于44%为阴性;所建立的ELISA方法敏感性和特异性鉴定结果与ID Screen AKV Competition检测试剂盒一致。本试验成功制备出一株分泌针对AKV N蛋白的杂交瘤细胞系,建立的ELISA检测方法能够用于检测动物AKV抗体,为进一步开展AKV抗体诊断试剂工艺研究、产业化奠定了基础。

我国进口食品安全风险及其影响因素

随着我国经济的快速发展,人们的生活水平不断提升,消费观念和消费水平也得到改善和提升,进口食品逐渐成为人们的日常选择。但食品安全已成为世界性问题,进口食品安全问题也频频发生,尤其是在跨境电商快速发展的背景下,进口食品安全风险集中在商品质量保障不高、商品来源不明、售后服务困难等方面,食品安全风险的影响因素主要有监管体系不健全、风险管理不到位、社会力量参与不足等。本文探讨了我国进口食品安全风险及影响因素,并提出了针对性的解决对策,以推动进口食品行业健康持续发展。

微流控芯片技术检测虾四种病原微生物方法的建立

针对虾的白斑综合征病毒、桃拉综合征病毒、黄头病毒和十足目虹彩病毒1的基因保守序列设计LAMP引物,将引物包被于芯片反应槽中,将微流控芯片技术与LAMP等温扩增技术相结合,建立针对这四种病毒的高效准确检测方法。用不同浓度的病毒阳性模板检测了建立的检测方法对4种虾病毒与另1种常见虾病毒的特异性,并对20份阳性和30份阴性虾组织样本的特异性、敏感性和重复性进行了临床对比验证实验。结果表明:本研究方法灵敏度高,特异性强,重复性好,各病毒间无交叉反应,为同时快速检测虾的四种病毒提供了技术手段。

冷冻食品微生物的危害及预防

将食品进行冷冻储藏,可以使食品的营养与风味得到充分的保存,并实现微生物繁殖的低成本充分抑制。然而,冷冻保存食品并不具有杀菌的功效,食品在冷冻状态下仍然会受到各种微生物以及致病菌的影响,当温度出现波动时,食品中残留细菌的繁殖就极为迅速,由此而引发的冷冻食品致病案例也屡见不鲜。所以,有必要深入研究冷冻食品中的微生物,并采取有针对性的预防措施。

2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的酶法合成及其应用研究进展

2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(2-O-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid,AA-2G)不仅稳定性强且保留了L-抗坏血酸(L-ascorbic acid,L-AA)的大部分生理活性,是L-AA最好的替代品。体外酶法合成AA-2G具有经济、快速、绿色和安全等显著优势,是规模化生产AA-2G的可行方法。该文综述体外酶法合成AA-2G的研究进展,重点梳理环糊精糖基转移酶和蔗糖磷酸化酶合成AA-2G的研究现状,并对AA-2G的功能及应用前景进行讨论和展望。

长双歧杆菌蔗糖磷酸化酶的异源表达及其酶学性质

为挖掘来源于长双歧杆菌的蔗糖磷酸化酶(Bifidobacterium longum sucrose phosphorylase,BloSPase)合成2⁃O⁃α⁃D⁃吡喃葡糖基⁃L⁃抗坏血酸(2⁃O⁃α⁃D⁃glucopyranosyl⁃L⁃ascorbic acid,AA⁃2G)的潜力,该研究将BloSPase基因在大肠杆菌中异源表达,以BloSPase的水解酶活力为指标,通过单因素试验和响应面法对其表达条件进行优化;并通过镍柱纯化后对其转糖基化活力进行研究。结果表明,BloSPase的最佳表达条件为诱导时间10 h、异丙基⁃β⁃D⁃硫代半乳糖苷(isopropylthio⁃β⁃D⁃galactoside,IPTG)浓度0.47 mmol/L、诱导温度23℃。在该条件下,水解酶活力可达到(730.35±0.58)U/mL,比酶活达到(95.22±2.45)U/mg。酶学性质研究显示,BloSPase转糖基化活力的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.2,在40、50℃时表现出较强的热稳定性。其动力学参数Km值为(266.80±23.76)mmol/L,Vmax值为(0.2350±0.0099)mmol/(L·min)。

重组CRM_(197)-4GnRH去势疫苗抗原分子的原核表达及免疫效果评价

通过大肠杆菌表达系统对CRM_(197)-4GnRH重组去势疫苗抗原进行表达,采用不同种类佐剂制备疫苗,研究其对大鼠的免疫去势作用,为获得1种免疫效果好、有效期长、生产成本低的促性腺激素释放激素(GnRH)免疫去势基因工程疫苗提供借鉴。采用白喉毒素无毒突变体(CRM_(197))与4拷贝GnRH串联,将CRM_(197)-4GnRH基因与表达载体连接,并通过优化试验确定大肠杆菌的最优表达条件,用SDS-PAGE和Western blot鉴定目标蛋白的表达情况。将融合蛋白与不同佐剂乳化,制备成9种测试疫苗后分别免疫大鼠,测定血清中GnRH抗体滴度和睾酮浓度。结果显示,重组大肠杆菌的最优表达条件为诱导时间表达5 h,培养基为LB液体培养基,IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L;通过SDS-PAGE和Western blot试验,表明目标融合蛋白已成功表达;动物试验结果表明,重组疫苗水包油包水佐剂组、重组疫苗油包水佐剂组、GnRH+Th抗原(辅助型T细胞抗原)表位(G1抗原)油包水佐剂组测试疫苗免疫大鼠较其他组GnRH抗体滴度显著升高、睾酮浓度显著下降(P<0.05),表明这3种疫苗具有良好的免疫去势作用。研究结果为GnRH免疫去势疫苗的研制奠定了基础。

超高效液相色谱质谱法测定饼干中3种大麻酚

使用超高效液相色谱-串联质谱法,建立饼干中大麻酚、大麻二酚和四氢大麻酚的测定方法。样品经乙腈醋酸(99+1)提取,加入醋酸体系盐包超声离心后,再加入吸附剂离心。采用0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,通过C18色谱柱分离,大气压化学电子源(atmospheric pressure chemical ionization,APCI)正离子多反应模式监测。通过考察不同种类提取溶剂、超声时间、萃取盐包组成、吸附剂组成的目标化合物回收率,确定最优前处理方式。结果表明:大麻酚、大麻二酚、四氢大麻酚在2~100 ng/mL时呈现良好线性关系,相关系数(R2)均大于0.999,方法检出限0.01 mg/kg,定量限0.02 mg/kg。低、中、高3个浓度加标回收试验,大麻酚回收率为80.3%~91.1%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.4%~6.5%,大麻二酚回收率为78.4%~88.5%,RSD为2.9%~7.5%,四氢大麻酚回收率为81.5%~91.3%,RSD为2.6%~6.8%。该方法适用于饼干中大麻酚、大麻二酚和四氢大麻酚的检测。

猪圆环病毒2型数字微滴PCR检测技术的建立及应用

为建立猪圆环病毒2型(PCV2)的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法,本研究针对PCV2ORF1基因设计引物和探针,经各反应条件的优化,确定反应体系中引物和探针终浓度分别为0.7μmol/L和0.25μmol/L,且退火温度为59℃时,ddPCR方法具有最佳的扩增效率(96%)。特异性试验结果显示,该ddPCR方法除了对PCV2检测结果为阳性外,对PCV1、PCV3和其它常见猪病病原的检测均未见阳性微滴,特异性较强。以10倍倍比稀释的重组质粒标准品pUC57-NA-ORF1为模板,利用建立的PCV2 ddPCR检测技术进行敏感性试验,结果显示,ddPCR的最低检测限达2.93拷贝/μL,比荧光定量PCR(qPCR)高10倍以上,敏感性较高。批内和批间重复性试验结果显示,其变异系数均小于10%,重复性较好。利用建立的PCV2 ddPCR对24份猪组织样品和70份宠物饲料样品进行检测,结果显示,该ddPCR方法对猪淋巴结、脾、肺和肾脏等组织样品的检测结果与qPCR的检测结果一致,均检出10份阳性样品。但ddPCR对饲料样品的检测更为灵敏,共检出PCV2阳性样品14份,其中有5份样品的qPCR检测结果为阴性,表明本研究建立的ddPCR方法敏感性、抗干扰性和可靠性更高。本研究首次建立了PCV2 ddPCR检测方法,为饲料等复杂基质样品中PCV2的检测提供了有力技术手段。

食醋中挥发性风味物质及其检测方法研究进展

挥发性风味物质的种类和含量已成为食醋品质评价的重要指标,对消费导向有重要影响。该文综述食醋中挥发性风味物质的形成、种类及风味贡献,分析食醋样品前处理方法的原理和优缺点及其与挥发性风味物质分析方法二者相结合的优势及应用进展,并对挥发性风味物质检测方法的发展前景进行展望。

快速水蒸气蒸馏-流动注射分析仪联用测定食品中氰化物

建立快速水蒸气蒸馏仪提取食品样品中的氰化物,流动注射分析仪测定馏出液中氰化物含量的方法。结果表明:在0~0.500μg/mL质量浓度范围内,方法标准曲线线性良好,相关系数为0.999 6,当取样量为20 g,定容体积为250 mL时,方法检出限为0.014 mg/kg。利用该方法和国标方法同时对实际样品进行检测,所得结果相对偏差均小于10%。该方法重复性好,回收率稳定,能够满足实际检测的要求。

松材线虫和拟松材线虫双重RPA检测研究

旨在建立一种以重组酶聚合酶扩增技术(RPA)为基础的快速检测方法,用于松材线虫和拟松材线虫的同步检测鉴定。根据松材线虫和拟松材线虫ITS区差异序列,分别设计松材线虫和拟松材线虫特异性上游引物Bx-rpa-F、Bm-rpa-F和两者通用下游引物Bxm-rpa-R。优化3条引物在反应体系中的最佳配比,建立双重RPA检测体系,并对其特异性和灵敏度进行分析。研究结果显示,双重RPA在37℃恒温条件反应30 min,即可完成对松材线虫和拟松材线虫核酸的同步扩增。Bx-rpa-F/Bm-rpa-F/Bxm-rpa-R对松材线虫的扩增片段为346 bp,对拟松材线虫的扩增产物为189 bp,且三者配比为5∶3∶8时,双重RPA扩增效果最好。双重RPA对松材线虫和拟松材线虫具有较高的检测特异性,对松材线虫的检测极限为10 pg/μL,相当于1/100条线虫,对拟松材线虫的检测极限为100 pg/μL,相当于1/10条线虫,其灵敏度低于常规PCR技术,但其满足对单条线虫检测的需求。双重RPA从松木样品中同步检测到松材线虫和拟松材线虫,操作简便、检测效率高、特异性强、灵敏度高、对仪器设备要求低,为松材线虫的检疫鉴定提供新方法。

液相色谱-四极杆-静电轨道阱高分辨质谱法测定保健食品中11种磷酸二酯酶抑制剂

保健食品样品用50%(体积分数)甲醇溶液超声提取15 min,提取液用水定容至50.0mL,离心,取上清液,经0.22μm微孔滤膜过滤,采用液相色谱-四极杆-静电轨道阱高分辨质谱法测定滤液中11种磷酸二酯酶抑制剂的含量。以Waters HSS T3色谱柱为固定相,以不同体积比的0.1%(体积分数)甲酸溶液和乙腈的混合液为流动相进行梯度洗脱,质谱分析中采用电喷雾离子源正离子模式和全扫描模式。11种磷酸二酯酶抑制剂的质量浓度均在2~100μg·L^-1内与其对应的峰面积呈线性关系,测定下限(10S/N)为0.02~0.5μg·L^-1。以空白样品为基体进行加标回收试验,所得回收率为75.7%~98.9%,测定值的相对标准偏差(n=6)为5.9%~14%。

猪德尔塔冠状病毒纳米PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)毒株M基因设计特异性引物,建立了PDCoV纳米PCR检测方法并进行了临床样品检测。结果显示:该方法对标准品检测的最低浓度可达102copies/μL,与其他几种常见猪病病毒无交叉反应;用该方法检测国内猪场62份腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,该纳米PCR方法的检出率更高,而两种方法对268份进境活猪粪拭子样品检测均为阴性。结果表明,本研究所建立的纳米PCR检测方法适用于国内猪场的PDCoV检测和进境活猪的监控检测,可作为PDCoV实验室检测的有力技术手段。