鸭圆环病毒无核定位信号衣壳蛋白的原核表达及其在间接ELISA中的应用

鸭圆环病毒(DuCV)是一种具有长期免疫抑制特性的病原体,其Cap蛋白是DuCV的主要结构蛋白和主要免疫保护抗原,构成病毒的核衣壳,对DuCV的血清学诊断具有重要意义。为了开发出适合DuCV的检测方法,本研究在重组Rosetta大肠杆菌细胞内对无核定位信号的DuCV Cap蛋白进行了表达,建立了基于无核定位信号Cap蛋白检测DuCV血清抗体的间接ELISA方法(Cap-ELISA)。结果:Cap-ELISA包被抗原的最佳浓度为280 ng/孔,血清稀释比为1∶1600;检测样本的阴阳临界值为0.339,灵敏度达到1∶12800,并对DuCV抗体检测具有特异性;与常规PCR方法的符合率为92.7%,用Cap-ELISA对山东部分地区的樱桃谷鸭血清进行了间接ELISA检测,总阳性率为88.9%,说明该方法适合在DuCV血清学诊断中应用。

一株血清5型副猪嗜血杆菌的分离鉴定及致病性分析

为了对一例疑似副猪嗜血杆菌感染发病猪进行确诊,试验对采集的病料组织进行细菌分离,对分离菌株采用形态学观察、培养特性、生化特性、PCR方法进行鉴定,同时对分离菌株进行琼脂扩散试验、基因分子分型鉴定、测序分析,以及仔猪致病力试验。结果表明:所分离菌株为革兰氏阴性菌,呈多形性,菌落形态为圆形、光滑、灰白色、半透明、边缘整齐;具有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依懒性;呈现典型"卫星生长"现象,不产生溶血现象;生化试验结果符合副猪嗜血杆菌相关生化特性;PCR鉴定扩增出1090 bp大小的条带,经琼脂凝胶扩散试验确定其为血清5型。分子分型鉴定分离株仅扩增出468 bp大小片段,经测序比对再次证实其为血清5型。在仔猪致病力试验中,空白对照猪未出现异常,攻毒猪表现出由副猪嗜血杆菌感染引起的发热、关节炎、胸腹腔多脏器表面纤维素性渗出为主的典型症状。说明发病猪感染了副猪嗜血杆菌,且分离得到血清5型副猪嗜血杆菌。

猪圆环病毒2型Cap蛋白、猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗的制备及安全性和有效性评价

猪圆环病毒2型(PCV2)病毒病、猪支原体肺炎以及猪格拉瑟氏病在我国猪群中广泛存在,常见三者的混合感染,给养猪业造成了重大经济损失。目前尚无用于3种疫病防控的联合疫苗,本研究以杆状病毒表达的PCV2 Cap蛋白、猪肺炎支原体(Mhp)抗原、副猪嗜血杆菌(HPS)4型和5型抗原,配合水溶性佐剂制备三联灭活疫苗,并进行安全性和有效性评价。结果显示,在安全性检验中,免疫猪精神、采食、呼吸、粪便和行为均未见异常,与对照猪无显著性差异;接种疫苗后猪体温有一过性升高,24 h后恢复正常,未见局部和全身不良反应。在血清抗体监测中,二免后14 d,免疫组PCV2 Cap蛋白ELISA抗体全部转阳,S/P值为1.291±0.091,对照组抗体为阴性(S/P值<0.4);免疫组Mhp ELISA抗体全部转阳,S/P值为1.133±0.150,对照组抗体为阴性(S/P值<0.4);免疫组HPS 4型和5型血清微量平板凝集试验(MAT)抗体效价均达到1∶16以上,对照组抗体为阴性(MAT抗体效价<1∶4)。在攻毒保护试验中,疫苗对PCV2强毒的保护率为4/5(80%);Mhp强毒攻击后免疫猪肺炎病变平均减少率为61.35%(>60%);疫苗对HPS 4型强毒的保护率为5/5(100%),对HPS 5型强毒的保护率为4/5(80%)。本研究试制的PCV2 Cap蛋白、Mhp、HPS三联灭活疫苗免疫仔猪产生了针对3种病原的特异性抗体,可提供对3种病原强毒攻毒的保护。