shRNA沉默HBx下调HepG2.2.15细胞基质金属蛋白酶2的表达

目的探讨HBx小发夹RNA(shRNA)对HepG2.2.15细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响。方法采用psiHBV/X质粒转染HepG2.2.15细胞,反转录PCR评估沉默效率;MTT法检测转染后HepG2.2.15细胞增殖情况;实时定量PCR(qRT-PCR)检测MMP-2 mRNA表达;Western blot法检测MMP-2蛋白表达的变化。结果反转录PCR检测HBx基因的沉默效率为53.6%;MTT检测结果显示转染24、48、72 h后HepG2.2.15细胞的增殖受抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);psiHBV/X质粒转染HepG2.2.15细胞后,qRT-PCR和Western blot检测结果显示,HepG2.2.15细胞中MMP-2基因的mRNA水平和蛋白水平表达分别有不同程度的下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNA干扰技术抑制HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达,可抑制细胞增殖,下调HepG2.2.15细胞中MMP-2的表达。

SiRNA沉默HBx对HepG2.2.15细胞人端粒酶逆转录酶基因表达的影响

目的探讨应用RNA干扰技术沉默HBx对HepG2.2.15细胞中hTERT基因表达的影响。方法 (1)将pSIHBV/X质粒转染HepG2.2.15细胞,RT-PCR法评估沉默效率。(2)MTT法检测转染24h、48h、72h后细胞增殖情况。(3)Real-time PCR和Western blot检测hTERT表达情况。结果测序结果显示pSIHBV/X质粒构建正确;RT-PCR检测HBV x基因的沉默效率为53.6%;MTT检测结果显示转染24h、48h、72h后HepG2.2.15细胞的增殖受抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR和Western blot检测结果均显示,转染pSIHBV/X质粒后HepG2.2.15细胞中hTERT基因的mRNA水平和蛋白水平表达分别有不同程度的下调,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 siRNA沉默HBx基因可抑制HepG2.2.15细胞中癌症标志基因hTERT的表达。