易漏检的B311亚型血清学及分子生物学分析

目的总结发现的B311亚型血清学特征并进行基因序列分析。方法对4例全自动血型鉴定系统判定为正反定型相符,但是试管法B抗原混合凝集的标本进行序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)、启动子5’端和1~7外显子直接测序;结果 4例标本的微柱凝胶卡B抗原4+,全自动血型系统判定为正反定型相符B或AB型;试管法B抗原2+~3+混合凝集。PCR-SSP结果分别为B/O012例、B/O021例,AB1例;直接测序1~7外显子对比B101未发现突变,启动子5’端发现-35~-18d^(el)GGCGGAAGGCGGAGGCCG杂合突变。结论 B等位基因-35~18del碱基突变是B311的分子遗传机制,启动子活性降低导致B3血清学表现,全自动血型鉴定系统对B311亚型检出存在局限性。

在1名幼儿及其家系中发现538C>T变异新B等位基因

目的对1名ABO血型正反定型不符的患儿及其家属做ABO血型血清学鉴定和基因检测以弄清原因。方法采用常规血型血清学方法检测患儿ABO血型,以PCR-SSP方法对患儿做ABO基因及ABO血型B亚型基因分型鉴定,并对ABO等位基因直接测序;最后对患儿做家系调查。结果血清学检测:患儿ABO血型为ABx亚型;ABO基因测序并将结果与NCBI网站数据库中ABO血型基因序列比对:患儿除有1个正常的A102基因外,还存在1个未见报道新的点突变型(538C>T)B型变异基因,该位点变异使得基因产物B糖基转移酶第180位氨基酸由精氨酸转变为半胱氨酸,使抗原表达减弱,改变了血型表现型;家系调查:患儿父亲、奶奶、姑姑都拥有相同的新型B变异基因。结论首次在中国汉族儿童中发现1例新的538C>T变异B型等位基因,该B变异基因具有家族遗传性;而且当它与O基因等位共存时,血清学表现型为正常B型,当它与A基因等位共存时,血清学表现出ABx亚型。

编码MNS血型抗原的GYP基因组研究进展

MNS血型系统包括大约40多种抗原,其中最为重要的是M、N、S、s 4种抗原。M和N抗原决定簇位于红细胞膜的血型糖蛋白A(GPA)上。GPA是一种红细胞上的主要唾液酸糖蛋白。S和s抗原决定簇位于红细胞膜上血型糖蛋白B(GPB)的唾液酸糖蛋白上。编码GPA的基因GYPA和编码GPB的基因GYPB位于4号染色体的长臂,两者具有95%的同源序列,同时又与不表达产物的同源基因GYPE紧邻,构成GYPA-GYPB-GYPE结构,为杂交基因的形成创造了条件。这些杂交基因的表达产物具有不同的抗原性。本综述简要介绍GYP基因组的分子基础,特别对Miltenberger抗原系统杂交基因的多态性做了较为深入的阐述。

对1例罕见CisAB01/B血型的基因学研究

目的探讨ABO血型系统中血型血清学定型正反定不一致的情况下,采用PCR-SSP技术与ABO基因测序技术对CisAB血型进行直接鉴定。方法采用常规血型血清学技术检测ABO血型,采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法进行CisAB血型的基因鉴定,然后经核酸测序分析其ABO基因EXON6,EXON7序列及突变位点。结果血型血清学鉴定表明患者血型为A亚B,用PCR-SSP基因分型确定为CisAB01/B,其ABO位点的第6、第7外显子序列分析发现该标本EXON6测序结果2条等位基因261没出现碱基G缺失,说明不存在O基因,出现的有:297G/A。EXON7测序结果 467C>T;803G>C结果鉴定是CisAB01;526C>G;657C>T;703G>A796C>A;803G>C,930G>A结果鉴定是B101。结论基因学鉴定可对血清学试验结果进行确认。

A型和AB型红细胞表面A抗原类型调查

目的调查ABO血型正反定型相符的A和AB型患者红细胞表面A抗原类型,探讨用分子生物学方法检测A2抗原的必要性。方法2020年1月至8月天津市第一中心医院正反定型相符A型和AB型的患者3024例,用血清学试管法与抗A_(1)试剂反应,用序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)、1~7外显子直接测序法确定与抗A1试剂反应阴性标本的血型基因型。结果ABO血型正反定型相符的3024例A和AB型中,血清学检出A_(2)和A_(2)B 48例(1.59%);基因型检出A_(2)和A_(2)B 16例(0.53%),PCRSSP与基因测序结果相符,A_(2)B发生率高于A_(2)(P<0.01)。11例A_(2)和A_(2)B输血患者作为观察组,输血当日同病种输血患者23例作为对照组,输血不良反应发生率差异有统计学意义(P<0.01)。结论正反定型相符A和AB型患者红细胞表面A抗原具有多态性,运用分子生物学方法检测A_(2)和A_(2)B血型有利于提高输血安全。

幼儿罕见Ax14亚型血清学及基因检测结果分析

目的对ABO正反定型不符的幼儿标本进行血清学鉴定和基因检测分析。方法常规血清学检测,PCR-SSP进行ABO基因初步分型,再使用ABO血型-A亚型基因分型试剂盒进行A亚型分型鉴定。结果血清学结果显示标本正定型为A型(抗A:1+~W),反定为O型(Ac2+,Bc4+);PCR-SSP A亚型分型鉴定结果显示标本基因型为Ax14/O2型。结论疑难血型鉴定有时需要结合血清学和分子生物学方法才能准确定型,此例血清学正反定型不符标本表型为Ax,其基因型为Ax14/O2。

抗-G联合抗-D致新生儿溶血病并D抗原遮蔽1例

目的研究1例RhD阴性产妇所育新生儿因D抗原遮蔽现象造成血清学假阴性的特点,及分析新生儿发生溶血病多次配血不合的原因,探讨提高抗体检出率的方法,及时解决新生儿HDFN的输血救治问题。方法采用盐水法和微柱凝集法结合吸收放散实验鉴定产妇及新生儿的抗体,RhCE exon1-10外显子测序鉴定新生儿血型,找到相匹配的血液给新生儿换血治疗。结果新生儿血型初次鉴定为AB、ccdEe,患儿母亲血型为AB、ccdee;患儿红细胞经ZZAP处理及基因鉴定后Rh分型为ccDEe;母亲、新生儿游离血清及新生儿红细胞放散液中检测出抗-D+抗-G。测得产妇血清中抗-D效价为1024、抗-G效价为8;患儿抗-D与抗-G效价分别为128、4。从血库中筛选出与新生儿血清交叉配血相匹配的0型洗涤红细胞。结论产妇抗-D可导致新生儿D抗原完全遮蔽,在临床检测过程中需采用多种血清学方法结合基因方法鉴定;对RhD阴性的孕妇要进行产前抗体筛查和鉴定,新生儿注射免疫球蛋白后交叉配血要格外关注,及时为新生儿发生HDFN的换血输血提供了相匹配血液具有十分重要的意义。

B(A)02基因型B抗原多态性2例报告

男,27岁,尿毒症拟行肾移植。患者母亲,49岁,拟供肾者。本研究通过天津市第一中心医院伦理委员会审查(BL202302),受试者均签署临床研究知情同意书于2022年4月21日纳入本研究。患者为B(A)型血型,其父、母亲血型分别为O型与AB亚型伴抗B抗体,经典试管法血型鉴定结果见表1。患者及其母亲不规则抗体筛查呈阴性。基于聚合酶链式反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)人类红细胞ABO-cisAB与B(A)基因检测结果显示:患者为B(A)02/O型,患者母亲为A/B(A)02型。患者及其母亲ABO基因PCR-SSP结果,见表2。患者及其母亲ABO基因第1~7外显子Sanger测序结果显示:患者为ABO*BA.02/ABO*O.01.02[B(A)02/O02]杂合子,其母亲为ABO*A1.02/ABO*BA.02[A102/B(A)02]杂合子,第7外显子均发生700C>G变异(图1),导致第234位脯氨酸替换为丙氨酸(Pro234Ala),符合B(A)02分子生物学特征。

围产期孕妇检出罕见CisAB血型及其备血策略探讨

目的:通过免疫血清学及分子生物学方法鉴定1例孕妇罕见CisAB血型,并对其家系进行ABO血型调查,探讨疑难血型鉴定方法及罕见血型孕妇供血策略。方法:采用免疫血清学方法及家系调查初步鉴定先证者家系ABO表型,运用聚合酶链式反应序列特异性引物(PCR-SSP)法进行ABO血型基因分型,并采用Sanger测序ABO基因1~7外显子进行验证。结果:血型血清学检测发现6例家系成员中,正反定型不相符3例,先证者及其母亲、胞弟血清学试验表现为AB亚型,父亲为A型,丈夫、长子表现为O型;分子生物学:先证者ABO基因型表现为BO2,其母亲为BB,父亲为AO,胞弟为AB,丈夫、长子均为OO;CisAB基因型分型结果分别为先证者Cis-AB01/O02,母亲为Cis-AB01/B,胞弟为Cis-AB01/A。结论:对经免疫血清学ABO血型定型困难、疑难样本,可通过鉴定其家系来初步推断其血型,同时可通过分子生物学验证其ABO血型,最终寻找提供最佳的供血方案。

两例类孟买型血型的FUT1基因突变分析

目的鉴定罕见的类孟买型Bm^h和Am^h，确定其临床输血对策。方法通过血清学方法检测ABO血型，应用聚合酶链反应-序列特异性引物（polymerasechainreaction—sequencespecificprimer，PCR—SSP）方法进行ABO基因分型的验证，结合测序技术分析a-1，2-岩藻糖基转移酶基因（a-1，2-fucosyltransferasegene，FUT1）突变的分子遗传机制。结果发现2例血清学分型罕见的类孟买Bm^h和Am^h型，1例基因定型为BO1型，带有FUT1基因547—548位AG两碱基缺失（hlhl），另1例基因定型为A205O2型，带有FUT1基因547—548位AG两碱基缺失和FUT1基因658C〉T错义突变（hlh3）。结论FUT1基因547—548位AG两碱基缺失和658C〉T错义突变是产生类孟买血型的分子基础之一。由于类孟买型Bm^h和Am^h血清中含有抗-HI，在临床输血中应引起高度重视，以避免发生不良输血反应。

成人选择性免疫球蛋白A缺乏症的临床及实验室指标分析

目的探讨成人选择性免疫球蛋白A缺乏(selective immunoglobulin A deficiency,SIgAD)患者临床表现及相关实验室指标的特点,以增进对中国西部地区SIgAD的认识。方法选取2015年1月至2019年12月于空军军医大学第一附属医院确诊的SIgAD成人患者45例。回顾性分析其临床表现、自身抗体、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G与IgM、补体(complement,C)3与C4、白细胞(white blood cell,WBC)绝对计数、淋巴细胞亚群绝对计数等指标的变化情况。结果在45例SIgAD患者中,20例(20/45,44%)出现了反复感染,其中13例(13/45,29%)为呼吸道感染。34例(34/45,76%)SIgAD患者合并自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID),其中20例(20/45,44%)为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)。34例(34/45,76%)患者IgG水平升高,34例(34/45,76%)患者IgM水平正常,22例(22/45,49%)患者补体C3降低、24例(24/45,53%)患者补体C4降低。合并AID与非合并AID的SIgAD患者比较,IgG、IgM、C3、C4在差异均无统计学意义[(20.94±7.70)g/L比(19.84±7.63)g/L,(1.25±0.97)g/L比(1.15±0.77)g/L,(0.77±0.31)g/L比(0.84±0.18)g/L,(0.15±0.08)比(0.19±0.08)g/L,t/z值分别为-0.449、-0.295、0.670、1.155,P值均>0.05]。多数患者[77%(34/44)]WBC正常,15例(15/44,34%)患者淋巴细胞计数降低。合并AID的SIgAD患者(26/31,84%)出现抗核抗体阳性。在45例SIgAD患者中男性12例,女性33例,男女比为1∶2.75,男女患者IgG、IgM,补体C3、C4、ANA之间差异均无统计学意义(t/χ^(2)值分别为-1.102、-1.240、-1.023、0.991、1.822,P值均>0.05)。结论成人SIgAD患者常伴有AID,以SLE最为多见,患者常出现反复的感染。合并AID的SIgAD患者多数患者出现ANA阳性,免疫球蛋白IgG的升高,补体C3、C4降低。