β-葡萄糖苷酶高产菌株的筛选及其基因的克隆与表达

利用栀子苷培养基从滨海新区盐碱地土样中筛选得到一株高产β-葡萄糖苷酶菌株,酶活力达到14.82U·mL-1,经16SrDNA鉴定,命名为短小芽孢杆菌B-4。克隆获得B-4β-葡萄糖苷酶基因,测序结果表明,其大小为1437bp,与GenBank中短小芽孢杆菌SAFR-032β-葡萄糖苷酶基因YP_001488769.1序列比对,核苷酸序列同源性达97%,氨基酸序列同源性达99%。进一步利用表达载体pET-22b(+),实现β-葡萄糖苷酶基因bglB在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达,酶活力达46.85U·mL-1。

枯草芽孢杆菌代谢组样品前处理方法的比较研究

本研究比较了不同淬灭剂（甲醇、60%甲醇、60%甲醇-0.9%Na Cl、60%甲醇-0.9%（NH4）2CO3和60%甲醇-0.9%Na Ac）条件下胞内物质核酸、蛋白质和代谢物的渗漏情况,发现60%甲醇-0.9%（NH4）2CO3和60%甲醇-0.9%Na Ac渗漏最少;比较了珠磨法、液氮研磨法、超声破碎3种细胞破碎方法条件下代谢物的提取效果,发现珠磨法提取效果最佳;比较了不同衍生时间（0.5~2.5 h）下代谢物相对丰度的变化,发现衍生时间达到2.0 h后,代谢物丰度不再有显著变化。最终确定了枯草芽孢杆菌代谢组样品最适前处理方法：预冷的60%甲醇-0.9%（NH4）2CO3淬灭,珠磨法破碎细胞,细胞破碎物用O-Bis[三甲基硅烷]三氟乙酸盐（MSTFA）衍生2 h。采用本方法从枯草芽孢杆菌中共鉴定到223种代谢物,包括大量氨基酸、有机酸和糖类物质。本研究为枯草芽孢杆菌的代谢组学研究提供了基础。

促溶剂对雷斯青霉发酵液流变特性的影响

目的:促溶剂通常用于甾体生物催化过程以提高底物溶解度,但在发酵液中添加促溶剂对菌体形态及发酵液特性的影响还少有报道。方法:利用旋转流变仪和顺磁分析仪分别对发酵液的流变特性及体积氧传递系数KLa进行监测。结果:无论是否添加促溶剂,发酵液都表现出非牛顿流体力学特性,但添加3%1,2丙二醇后同一时期发酵液稠度系数减小大约17%,而流动指数平均增加8%。结论:添加促溶剂使得发酵液表观黏度减小,体积氧传递系数增大,从而有利于甾体化合物的生物转化。