督脉电针和高压氧对脊髓损伤大鼠脊髓神经元的作用机制探讨

目的:探讨督脉电针和高压氧对脊髓损伤大鼠脊髓神经元的作用机制。方法:选择Wistar大鼠共60只,按随机数字表法分为5组,即正常对照组、模型组、督脉电针组、高压氧组、高压氧联合督脉电针组,每组12只。正常对照组只行椎板切除,不造成脊髓损伤;其余组用脊髓横断的方法损伤大鼠胸髓背侧部位,以构建实验模型。高压氧组于造模清醒4 h后,置于高压氧舱内氧疗,持续75 min/次,治疗4次/d。督脉电针组分别于造模清醒4 h后给予干预,频率2 Hz;干预时长为20 min,频率为1次/d。高压氧联合督脉电针组使用上述两种方法相结合,对大鼠进行干预。正常对照组和模型组不予治疗。造模后的第1、3、7天分别对各组进行Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评估,记录各组大鼠行为学改变。造模后第7天处死各组大鼠,取大鼠脊髓组织,应用TUNEL法检测凋亡细胞并计算凋亡指数;免疫荧光检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路变化;同时采用经典的RT-PCR和Western印迹测定大鼠脊髓损伤区轴突生长抑制因子A(Nogo-A)、Nogo-66受体(NgR)mRNA和蛋白的含量。结果:造模后第1、3和7天,督脉电针组、高压氧组和高压氧联合督脉电针组BBB评分均高于模型组(均P<0.05),且高压氧联合督脉电针组评分高于督脉电针组与高压氧组(P<0.05)。TUNEL染色下模型组脊髓灰质区神经元染色明显阳性,提示细胞凋亡较多,高压氧联合督脉电针组损伤部位细胞凋亡显著减少(P<0.05);督脉电针组、高压氧组和联合治疗组RhoA、ROCK蛋白含量、Nogo-A mRNA和蛋白表达量、NgR mRNA和蛋白表达量均低于模型组(F=34.597、39.230、14.783、12.370、21.435、50.435,均P<0.05),且联合组的Nogo-A mRNA和蛋白表达量、NgR mRNA和蛋白表达量均低于督脉电针组和高压氧组(F=13.58、11.253、24.843、41.221,均P<0.05)。结论:督脉电针和高压氧对脊髓损伤大鼠脊髓神经元具有保护作用,其机制可能与RhoA/ROCK通路有关。

亚低温条件下脊髓损伤模型大鼠神经再生微环境及运动功能的变化

背景:临床研究证明全身亚低温能显著降低重型颅脑损伤患者的致残率和死亡率。近年来,有关亚低温治疗脊髓损伤的研究也相继开展。目的:观察脊髓损伤后亚低温对神经再生微环境的影响,探索其对脊髓损伤后神经再生和功能恢复的可能作用机制。方法:67只大鼠中随机取20只作为假手术组,其余大鼠采用改良Allen打击法于T9节段建立脊髓损伤模型,剔除剔除模型失败3只及模型制作后死亡4只大鼠后,随机等分为脊髓损伤组和亚低温组,各20只。假手术组和脊髓损伤组大鼠置于常温操作台上,使其肛温保持在(37.0±0.5)℃,维持72 h。亚低温组大鼠置于冰毯机上,使其肛温保持在(34.0±0.5)℃,维持72 h,室温下自然复温。结果与结论:与脊髓损伤组相比,亚低温组大鼠损伤脊髓组织中凋亡指数降低,水通道蛋白4/9 m RNA和蛋白表达水平下降,体感诱发电位潜伏期和波幅恢复,运动功能评分在增加。说明亚低温治疗通过减少神经细胞凋亡和降低水通道蛋白4/9 mR NA和蛋白的表达水平,对脊髓损伤起到保护作用。

亚低温干预并神经干细胞蛛网膜下腔移植修复大鼠脊髓损伤

背景:研究表明,亚低温治疗能发挥调控神经干细胞凋亡、增殖、分化的作用。目的:探讨亚低温干预联合大鼠神经干细胞蛛网膜下腔移植对脊髓损伤大鼠损伤神经功能恢复的影响。方法:成年SD大鼠110只,随机取20只为假手术组,余90只大鼠采用改良Allen打击法于T9节段建立脊髓损伤模型,成功造模80只,随机分为脊髓损伤组、亚低温组、神经干细胞组、联合组,每组20只。亚低温组将大鼠放在冰毯上,维持亚低温(34.0±0.5)℃3 d;神经干细胞移植组,将大鼠体温维持37℃,6 h后蛛网膜下腔植入1×10~4 L^(-1)神经干细胞悬液1 mL,1次/d,连续3 d;联合组采用亚低温和神经干细胞联合治疗。分别于造模后1,3 d和1,2,3,4周通过BBB评分和斜板实验测定大鼠双下肢运动功能。造模后4周,取材行病理切片苏木精-伊红染色,采用RT-PCR检测脊髓损伤区周围Caspase-3、BCL-2、Syn基因的表达,通过检测体感诱发电位和运动诱发电位观察大鼠神经电生理恢复情况。结果与结论:①联合组大鼠下肢运动功能优于神经干细胞组及亚低温组,神经干细胞组及亚低温组优于脊髓损伤组;②造模后4周,与脊髓损伤组相比,联合组Caspase-3基因表达显著降低(P<0.05);Bcl-2及Syn基因表达显著升高(P<0.05);③造模后4周,脊髓损伤组可见脊髓空洞形成。神经干细胞组及亚低温组损伤区脊髓空洞较小,联合组脊髓空洞几乎消失;④造模后4周,体感诱发电位和运动诱发电位的潜伏期:联合组<神经干细胞组和亚低温组<脊髓损伤组,组间差异有显著性意义(P<0.05);体感诱发电位和运动诱发电位的波幅:联合组>神经干细胞组和亚低温组>脊髓损伤组,组间差异有显著性意义(P<0.05);⑤结果表明,亚低温干预联合大鼠神经干细胞蛛网膜下腔移植可促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生,降低脊髓损伤区周围Caspase-3基因表达,促进Bcl-2及Syn基因表达,改善大鼠的肢体运动功能和电生理功能。

法舒地尔和RhoA沉默对神经干细胞增殖的影响

背景:Rho及其相关分子在神经轴突生长、分化、延伸及突触形成中起重要作用,阻断和抑制RhoA/ROCK通路可促进神经干细胞的增殖与生长。目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默对大鼠神经干细胞增殖的影响。方法:体外培养Wistar胎鼠神经干细胞,分6组干预:空白对照组,5,10,15,20μmol/L法舒地尔组,siRNA沉默RhoA基因组。干预后第3天,采用RT-PCR,Westernblot检测各组神经干细胞RhoA基因及蛋白的表达。应用MTT比色法观察神经干细胞增殖情况;采用流式细胞术测定神经干细胞周期分布的变化。结果与结论:15,20μmol/L法舒地尔组、siRNA沉默RhoA基因组神经干细胞RhoA基因及蛋白表达量较5,10μmol/L法舒地尔组、空白对照组明显降低(P<0.05),细胞的生长速度较5,10μmol/L法舒地尔组、空白对照组明显增快(P<0.05),细胞周期G0/G1期减少(P<0.05),S期细胞数增多(P<0.05)。当法舒地尔浓度增加到20μmol/L时对细胞的作用并非随浓度的增加而增强,与15μmol/L组的差异无显著性意义(P>0.05)。15,20μmol/L法舒地尔组与siRNA沉默RhoA基因组相比差异无显著性意义(P>0.05)。说明Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默在体外均能促进神经干细胞增殖,法舒地尔最佳作用浓度为15μmol/L。

神经干细胞移植治疗颞叶癫痫的近期效果研究

目的探讨神经干细胞移植治疗颞叶癫痫的疗效。方法首先建立大鼠的海人酸颞叶癫痫模型。然后从胚胎大鼠的海马中分离培养出神经干细胞,将预诱导的、向氨基丁酸能神经元方向分化的胚胎神经干细胞移植入颞叶癫痫模型的海马内,在移植后1 w、2 w、3 w和4 w分别进行移植癫痫大鼠的癫痫最低阈值的测定、海马中氨基丁酸的测定和移植的神经干细胞在体内分化情况的鉴定。结果移植后的癫痫最低阈值和海马中的氨基丁酸逐渐增加,接近但未达到正常值,预诱导的神经干细胞全部分化为氨基丁酸能神经元。结论神经干细胞移植治疗颞叶癫痫具有一定效果。

神经干细胞向γ-氨基丁酸能神经元的诱导分化

目的探索海马神经干细胞在特定条件下分化成γ-氨基丁酸能神经元的情况,为颞叶癫痫的细胞替代学治疗奠定基础。方法新生大鼠海马组织中的神经干细胞在体外增殖后,加入特定的细胞因子进行诱导,使其向γ-氨基丁酸能神经元分化,对分化的细胞进行神经元烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白(MAP-2)、γ-氨基丁酸(GABA)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂酶(GalC)免疫荧光染色鉴定,判断其分化成γ-氨基丁酸能神经元的情况。结果海马神经干细胞诱导贴壁后即发生分化,其中几乎全部分化成神经元(γ-氨基丁酸能神经元),只有极少的胶质细胞和少突胶质细胞形成。结论从海马神经干细胞中几乎可以完全诱导形成γ-氨基丁酸能神经元,这为颞叶癫痫的细胞替代学治疗奠定了基础。

神经内镜治疗脑积水患者的研究进展

随着医学技术的发展,神经内镜治疗取得了阶段性的成功。目前,神经内镜在脑积水患者的治疗中起到了十分重要的作用。临床上常用的神经内镜技术为神经内镜下第三脑室底造瘘术、中脑导水管成形术及囊肿造瘘术。该研究就应用神经内镜治疗脑积水患者的研究进展展开了论述,旨在为该领域的研究提供参考。

高压氧联合心理干预、康复训练治疗脑出血患者疗效观察

目的观察初期康健练习结合高压氧疗法对脑出血患者肢体功能修复的效果。方法选取2012年6月—2015年6月我院收治的脑出血患者86例,随机分为康复训练组和和对照组,每组43例。康复训练组采用常规治疗辅以初期复健结合高压氧疗法实行心理辅助;对照组仅使用常规疗法。评定治疗处理之前和之后每组的SAS得分、日常生活能力(ADL)及机体行动机能。结果治疗4周后,康复训练组SAS得分较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05),Barthel指数及Fugl-Meyer测评,康复训练组比常规组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑出血患者,初期复健结合高压氧和心理疗法可以减低其不良情绪,完善其日常机体行动机能。

远志皂苷元干预对大鼠视神经损伤的影响及机制研究

目的:探讨大鼠视神经损伤后远志皂苷元干预对损伤视神经及视网膜神经节的影响及机制。方法:SPF级雌性SD大鼠65只,随机取20只大鼠为正常组,不予任何处理。余45只行视神经钳夹法造模(右眼),5只大鼠造模失败,予以剔除,余40只纳入实验。将其随机分为:视神经损伤组和远志皂苷元组,各20只/组。视神经损伤组大鼠无治疗,常规饲养,远志皂苷元组大鼠予以远志皂苷元治疗。造模后4 d,各实验组大鼠视网膜和视神经细胞以TUNEL法检测细胞凋亡,造模后7 d,RT-PCR、Western blot行大鼠视网膜和视神经节细胞组织Bax、Bcl-2基因和蛋白表达检测。造模后14 d,行闪光视觉诱发电位检测。最后处死大鼠取眼球,观察各组大鼠视网膜和视神经的病理形态,行视网膜神经节细胞计数。结果:造模后4 d,远志皂苷元组视网膜神经节细胞凋亡数量明显低于视神经损伤组(P<0.05),造模后7 d与视神经损伤组相比远志皂苷元组Bax基因和蛋白表达显著降低P<0.05);Bcl-2基因和蛋白表达显著升高P<0.05)。造模后14 d,荧光金阳性RGC数:视神经损伤组最少,远志皂苷元组较多,正常组最多,且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。远志皂苷元组大鼠闪光视觉诱发电位伏期较视神经损伤组大鼠短(P<0.05)、波幅明显高于视神经损伤组(P<0.05)。结论:远志皂苷元干预通过减少大鼠视神经钳夹后RGCs的凋亡,降低视网膜Bax基因和蛋白的表达,促进BCL-2基因基因和蛋白的表达,对视神经损伤起到保护作用。

吡拉西坦氯化钠对大鼠创伤脑组织内AQP9表达的影响

目的探讨吡拉西坦氯化钠注射液对大鼠外伤性脑水肿脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的影响。方法健康SD大鼠144只,随机分为:对照组、手术组、吡拉西坦氯化钠注射液组,采用液压颅脑损伤仪,给予2.5～3.0atm液压冲击力,制成重型液压颅脑损伤模型,分别在6h、1d、3d和5d4个时间点将大鼠麻醉后断头取脑,采用干湿比重法测脑组织含水量,行HE染色,并用RT-PCR、WesternBlot检测脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的变化。结果与对照组相比,手术组、吡拉西坦氯化钠注射液组均从6h开始出现脑水肿,3d时达到高峰,且吡拉西坦氯化钠注射液组脑水肿低于手术组;同样AQP9及其mRNA的表达在手术后6h后开始升高,3d后达到高峰,且手术组较对照组相和吡拉西坦氯化钠注射液组明显增高(P<0.05)。结论 AQP9与脑水肿形成有关,吡拉西坦氯化钠注射液可以降低脑组织内AQP9的基因表达和蛋白合成从而减轻脑水肿。

脑出血免疫抑制大鼠模型的构建及评估

背景:研究表明,大鼠脑出血后经治疗可以有效抑制其免疫功能。已有文献研究对缺血性脑卒中后免疫抑制现象进行详细研究,但脑出血后机体免疫功能研究鲜见报道。目的:构建脑出血后免疫抑制大鼠模型并进行稳定性评估。方法:将60只Wistar大鼠随机分为3组,即对照组、假手术组、脑出血组,每组20只。采用自身动脉血50μL注入大鼠基底节方法建造急性脑出血模型;假手术模型注入50μL生理盐水,手术过程同脑出血模型;对照组不做任何处理。分别于造模后24,48,72,96 h用血液分析仪检测白细胞、淋巴细胞、淋巴细胞百分数;采用ELISA测定大鼠血清中促炎细胞因子白细胞介素6和抗炎细胞因子转化生长因子β的水平;剖取大鼠脾组织进行组织学及病理学检查;通过RT-PCR及Western blotting检测转化生长因子β、白细胞介素6基因和蛋白在脾组织中的表达变化。结果与结论:(1)与假手术组及对照组相比,脑出血组大鼠于造模后24,48,72,96 h白细胞数明显升高,淋巴细胞百分数逐渐降低,差异有显著性意义(P<0.05);(2)与假手术组及对照组相比,脑出血组大鼠血液、脾的白细胞介素6在24 h时高表达,72 h达高峰,96 h时表达降低,差异有显著性意义(P<0.05);(3)与假手术组及对照组相比,脑出血组大鼠血液、脾的转化生长因子β于24 h时低表达,72 h逐渐升高,96 h时高表达,差异有显著性意义(P<0.05);(4)结果提示,大鼠在脑出血后先呈现免疫功能亢奋,随即96 h后出现免疫功能抑制,说明脑出血后免疫抑制大鼠模型造模成功,并具有良好的稳定性。

NgR基因沉默骨髓间充质干细胞/许旺细胞支架复合体的构建

背景:细胞联合移植、NgR基因沉默及聚乳酸-乙醇酸支架为近年来脊髓神经损伤修复的研究热点。目的:探讨NgR基因沉默的骨髓间充质干细胞/许旺细胞在聚乳酸-乙醇酸膜上生长及分化的可行性。方法:将骨髓间充质干细胞、许旺细胞分离、纯化及扩增后,经小分子干扰RNA转染以沉默NgR基因表达,用反转录-聚合酶链反应、Western blot检测两种细胞在转染前后NgR基因/蛋白的表达。在有血清的条件下,按骨髓间充质干细胞组、许旺细胞组及联合组(均以未转染细胞为对照,共6组)分别接种到聚乳酸-乙醇酸膜上,观察各组细胞的贴附、生长、分化情况。结果与结论:转染小分子干扰RNA后,与转染前相比,实验组NgR基因和蛋白的表达量明显降低(P<0.05)。经过培养,在聚乳酸-乙醇酸膜上观察与未转染组相比,NgR基因沉默各组均观测到种植细胞的大量贴附和生长。提示NgR基因沉默有促进骨髓间充质干细胞/许旺细胞贴附、生长的作用。

NgR基因沉默细胞-PLGA移植对脊髓损伤大鼠后肢功能的影响

目的观察NgR基因沉默细胞-PLGA共移植对脊髓损伤大鼠后肢功能修复的作用。方法健康成年雌性Wistar大鼠72只,建立脊髓T9半横断损伤模型。随机分为单纯支架组(A组)、骨髓间充质干细胞+施旺细胞+聚乳酸-乙醇酸(PLGA)组(B组)、NgR基因沉默细胞+PLGA组(C组),每组24只。于脊髓缺损处分别植入对应的复合物。造模后1、2、4、6、8周行运动功能检测,4周后行HE染色及免疫荧光观察PKH-26标记的骨髓间充质干细胞的存活和分布情况。结果斜板实验和改良BBB评分结果提示,下肢运动功能评价B组优于A组(P<0.01),C组优于B组(P<0.05);A、B、C组PKH-26阳性细胞数分别为0、(34.43±9.78)、(69.58±8.15)个/高倍视,3组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 NgR基因沉默细胞-PLGA共移植能够明显促进脊髓半横断损伤大鼠的脊髓轴突再生,并改善肢体的运动功能。

数字化成形钛网在颅骨修补术中的应用

颅骨修补术常选用的修补材料有自体游离骨瓣、硅橡胶、有机玻璃、骨水泥、钛网等。不同的修补材料之间各有其优缺点。手术采用数字化成形钛网,方法简单,操作方便,节省了手术时间,易塑形、易固定、抗压性能强、组织相容性好、并发症极少,对植入者无任何不良影响,提高了患者的满意度,显著提高了患者的生活质量,是理想的颅骨修补材料,具有推广及应用价值。

微创手术治疗高血压脑出血患者的临床研究进展

脑出血是高血压患者常见的并发症,具有较高的病死率和致残率。近年来,随着临床医学水平的提升,微创手术成为高血压脑出血患者的重要治疗方法。与传统开颅血肿清除术相比,微创手术具有创伤小、出血量少、恢复快等优势,可快速缓解患者的颅内压,最大限度清除血肿,提高患者的生存率和预后生命质量。该研究主要探讨微创手术治疗高血压脑出血患者的临床研究进展。

老年脑卒中患者治疗前后血同型半胱氨酸及血脂各项指标的变化

目的观察老年脑卒中患者治疗前后血同型半胱氨酸及血脂各项指标水平的变化。方法将2016年2月-2017年2月选择于我院接受检测与治疗的老年脑卒中患者40例(观察组),以及同期接受体检的健康者40例(对照组)进行对比分析,观察并比较两组的检测结果,以及脑卒中患者治疗前后的相关指标[同型半胱氨酸(Hcy)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三油甘脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)]的变化情况。结果所有脑卒中患者治疗后的Hcy含量、TC、LDL-C均有所下降,且与对照组相比,其差异具有统计学意义(P <0. 05);而其治疗后的TG、HDL-C、ApoA1、ApoB均与治疗前相差不大,与对照组相比,同样相差不大,因而不具有统计学意义(P> 0. 05);治疗后的hs-CRP明显下降,且与对照组的比较差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论对于脑卒中的老年患者而言,血同型半胱氨酸与血脂的各项指标水平可作为其治疗的相关检测指标,且对临床的诊断与治疗有辅助意义。