天然药物化学自我设计实验教学研究

文章将自我设计实验教学引入我校药理学专业硕士点的学位课程——天然药物化学实验教学中,对如何充分发挥自我设计实验教学的作用,从实验教学内容、教学方法和教学环节等方面进行了改革尝试,为培养天然产物研究与利用的高级应用型人才提供了新的实验教学参考模式。

睡菜水提液对小鼠的急性毒性实验研究

目的:观察睡菜水提液对大鼠的急性毒性.方法:预实验:灌胃给予小鼠水提液剂量分别为2455、1841.25、1380.94、1035.70 g/L,观察给药当天及7 d内小鼠的状态,计算半数致死量(50%lethal dose,LD_(50));最大耐受量实验:灌胃给予睡菜最大剂量2455 g/L,观察给药后14 d内小鼠状态和死亡情况,给药14 d后检测小鼠的血液生化指标、计算主要脏器指数以及观察主要脏器病理学变化.结果:未能测出睡菜水提液的半数致死量.最大耐受量实验显示:给药后14 d内小鼠状态良好,无中毒反应或死亡情况.给药组小鼠第3、7、11、14 d体质量增长与空白组比较无统计学差异(P>0.05);给药组小鼠血液生化指标、主要脏器指数与空白组无统计学差异(P>0.05);组织形态学、组织病理学检查未发现睡菜水提液对小鼠主要脏器产生病理改变.结论:睡菜水提液的最大无毒剂量大于2455 g/L,是成人临床用药(15 g)的100.6倍,是安全的用药剂量范围.

内生放线菌Streptomyces californicus XY3-1抗菌活性次级代谢产物研究

从三峡地区濒危植物内生菌中寻找活性次级代谢产物过程中,发现中华蚊母树叶片得到的内生放线菌XY3-1粗提物显示较强抑制植物病原菌活性。以抗菌活性指导分离从Streptomyces californicus XY3-1液体发酵乙酸乙酯提取物中分离鉴定9个化合物,运用核磁共振,质谱及文献对照等方法确定其确定结构,分别为Benzodipyran(1),Okicenone(2),2-(2'-hydroxypropyl)-5-methyl-7-hydroxychromone(3),2-(6-methyl-8-oxo-5,8-dihydronaphthalen-1-yl)-acetic acid(4),3,8-dihydroxy-1-methyl-4a,9a-dihydroanthracene-9,10-dione(5),dibutylphthalate(6),bis(2-ethylhexyl)benzene-1,2-dicaroxylate(7),p-hydroxybenzaldehyde(8),indole-3-aldehyde(9)。以滤纸片法评价化合物1~9的抗菌活性,结果表明化合物1对番茄枯萎病原菌、角斑病原菌、柑橘溃疡病菌、鳗弧病菌均有抑制效果,MIC值分别为62.50μg·mL^(-1)、7.81μg·mL^(-1)、62.50μg·mL^(-1)、7.80μg·mL^(-1);化合物2对角斑病原菌,鳗弧病菌两种病原菌具有抑制作用,MIC值分别为7.80μg·mL^(-1)、3.90μg·mL^(-1);化合物4仅对鳗弧病原菌有抑制作用,MIC值为7.80μg·mL^(-1),其余化合物对四种指示病原菌均无有意义的抗菌活性。

七叶一枝花内生真菌Penicilliumsp．(No．4)聚酮类次级代谢产物研究

从濒危药用植物七叶一枝花的叶片中分离得到内生真菌Penicillium sp.(NO.4),活性筛选结果显示Penicillium sp.(NO.4)显示出较强的抑制肝癌细胞活性,通过固体发酵,乙酸乙酯萃取得浸膏,其浸膏经硅胶柱层析,Sephadex LH-20,半制备型HPLC等分离手段分离得到八个化合物,经核磁共振,质谱等手段鉴定其结构分别为1,3,14-三甲氧基-6-甲基-9,10-蒽醌(1),bostrycin(2),isorhodoptilometrin(3),physcioin(4),emodin(5),aloesol(6),coniochaetone B(7),2,5-dimethyl-7-hydroxychromone(8),其中化合物1为一新天然产物。体外细胞毒活性显示化合物1,3,14-三甲氧基-6-甲基-9,10-蒽醌(1),bostrycin(2)和isorhodoptilometrin(3)对肝癌细胞有较强的抑制活性,其IC50分别为15.6,6.5,13.2μg/mL,化合物4～8则没有显示生物活性。

三峡紫皮大蒜与市售百合蒜品质的比较研究

目的比较三峡紫皮大蒜与市售百合蒜的品质。方法采用水蒸气蒸馏法提取大蒜挥发油,GC-MS联用法分析大蒜挥发油化学成分,水浴及超声波提取大蒜水溶性物质,考马斯亮蓝G-250法测大蒜蛋白质含量。结果三峡紫皮大蒜的挥发油及蛋白质含量均高于市售百合蒜。结论三峡紫皮大蒜的品质优于市售百合蒜,是适宜推广的品种。

蛇菰内生菌Aspergillus sp. SHG-7代谢产物研究

从药用植物宜昌蛇菰(Balanophora henryi Hesml.)中分离得到一株内生真菌Aspergillus sp.SHG-7,通过固体发酵,乙酸乙酯萃取得浸膏,其浸膏经硅胶柱层析、Sephadex LH-20、半制备型HPLC等分离手段分离得到6个化合物,经核磁共振、质谱等手段鉴定其结构分别为灰黄霉素(1),麦角甾醇(2),麦角甾-7,22-二烯-3,6-二酮(3),麦角甾-7,22-二烯-3,5,6-三醇(4),软脂酸-1-甘油酯(5),肉豆蔻酸(6).化合物1对MCF-7、A549及Hela细胞具有一定的细胞毒活性,IC50分别为18.36±2.32μM、26.58±1.62μM和74.29±1.34μM,化合物2~化合物6对以上肿瘤细胞无明显活性.

斑茅内生真菌Nigrospora sp.BM-2次级代谢产物研究

内生菌具有丰富的生物多样性,是潜力巨大的微生物新资源。内生菌的研究对于保护野生与濒危药用植物、拓展药用资源、新药研发等均有一定意义。从药用植物斑茅(Saccharum arundinaceum Retz.)的叶片中分离得到内生真菌Nigrospora sp. BM2,对其代谢产物化学成分进行研究,通过固体发酵,乙酸乙酯萃取得浸膏,其浸膏经硅胶柱层析,Sephadex LH-20,半制备型HPLC等分离手段分离得到10个化合物,经波谱学方法鉴定其结构分别为Pestalotiopyrones G(1)、Nigrosporapyrone D(2)、Pestalotiopyrones A(3)、Hydroxypestalopyrone(4)、Mellein(5)、6-hydroxymellein(6)、4-hydroxymellein(7)、5,8-dihydroxy-4-methyl-coumarin(8)、~1H-indole-3-carboxaldehyde(9)和Isosclerone(10)。体外细胞毒活性显示以上化合物对HepG2和Caski细胞均无明显抑制活性,其IC_(50)>100μM。除化合物1和5外,其余8个化合物均为首次从该属菌株的代谢产物中分离得到。

益贞颗粒急性毒性实验研究

以益贞颗粒对小鼠灌胃,观察小鼠死亡情况及相关指标的变化情况来评价其安全性.通过半数致死量实验分别以不同浓度的益贞颗粒对小鼠灌胃,观察7d未见小鼠死亡,无法测出半数致死量;进行最大耐受量实验,实验小鼠以益贞颗粒最大混悬浓度和可承受的最大体积1d内灌胃2次,连续观察14d,每天记录小鼠的一般状况、体质量、进食量和饮水量.14d后处死动物,观察并记录脑、心、肝、脾、肺、肾、睾丸/卵巢等主要脏器的病变情况,若肉眼可见病理变化则即刻进行组织病理学检查.结果表明,14d内小鼠活动正常,无1只小鼠死亡.益贞颗粒组实验小鼠的体质量、进食量和饮水量与空白对照比较均无显著性差异(P>0.05);肉眼观察脑、心、肝、脾、肺、肾、睾丸/卵巢等主要脏器未发现有明显异常.实验小鼠灌胃益贞颗粒的量相当于成人临床日用量的93倍,说明益贞颗粒无明显毒性,临床常用量是安全可靠的.

苎麻叶凝胶急性毒性、皮肤刺激性及过敏性实验研究

为了观察苎麻叶凝胶经皮用药的安全性,采用苎麻叶凝胶对新西兰大白兔进行正常和破损皮肤急性毒性实验及皮肤刺激性实验;对豚鼠进行皮肤过敏实验。结果:苎麻叶凝胶均未引起家兔毒性反应;对家兔完整和破损皮肤无刺激作用;对豚鼠皮肤无过敏作用。结果显示,苎麻叶凝胶皮肤给药使用安全。

苎麻叶凝胶皮肤长期毒性实验研究

本文观察苎麻叶凝胶长期连续经皮肤给药对完整皮肤和破损皮肤实验大鼠可能产生的毒性反应,为临床应用提供毒理学依据。利用160只Wistar大鼠,随机分为完整皮肤凝胶基质对照组、完整皮肤苎麻叶凝胶低、中、高剂量组(相当于临床人用量的20、40、80倍),破损皮肤凝胶基质对照组、破损皮肤苎麻叶凝胶低、中、高剂量组(相当于临床人用量的20、40、80倍),每组20只,雌雄各半,每日涂药2次,连续给药4周,观察大鼠的一般状况、体重、摄食量,测定给药4周及停药2周后大鼠的血液生化指标,脏器系数、解剖学及病理组织学改变情况。结果表明,苎麻叶凝胶各组大鼠一般状况良好,体重增长、摄食情况、脏器系数、血常规、血液生化指标、解剖学和主要脏器的病理组织学检查均正常,与凝胶基质对照组比较无明显差异。苎麻叶凝胶在临床剂量范围内毒性小,使用安全。

湖北海棠提取液对三峡紫皮大蒜生产的影响

[目的]研究不同浓度湖北海棠提取液对三峡紫皮大蒜出苗率和产量的影响。[方法]用1%、2%和5%浓度的湖北海棠提取液浸泡三峡紫皮蒜种24h后播种,在20和35d统计出苗率,收获时计算产量。[结果]5%浓度湖北海棠提取液浸泡蒜种后,能提高出苗率23.29%,提高光合速率,增产32.49%。[结论]湖北海棠提取液能够杀灭大蒜中的病毒,促进出苗和提高产量,适宜在生产上应用。

衰老对小鼠肠黏膜上皮屏障功能影响的实验研究

目的:研究衰老对小鼠肠黏膜上皮屏障结构与功能的影响。方法:雄性SPF级C57BL/6小鼠按发育阶段的不同分为1月龄组、6月龄组、10月龄组、12月龄组。采用HE染色、PAS(高碘酸-Schiff试剂)染色、甲苯胺蓝染色对小肠黏膜形态与结构进行观察测量并统计免疫细胞数量;免疫组织化学染色检测紧密连接蛋白(Occludin)的表达。结果:随着月龄增加,小鼠小肠各段绒毛长度均呈降低趋势,相同月龄不同肠段相比,绒毛长度从十二指肠到空肠、回肠呈递减趋势。十二指肠绒毛宽度呈先增高后降低趋势,空肠和回肠绒毛宽度呈下降趋势。十二指肠隐窝深度随月龄增高呈增高趋势,空肠和回肠的隐窝深度随月龄增长呈先增高后降低趋势。随月龄增长,小鼠十二指肠、空肠、回肠各肠段中上皮内淋巴细胞数和肠壁固有层肥大细胞呈先增高后降低趋势,杯状细胞数呈下降趋势。小肠上皮黏膜组Occludin表达随着月龄升高逐渐减少。结论:衰老过程中,小鼠小肠形态发生了一系列结构性改变,黏膜组织中免疫细胞数量减少,肠黏膜上皮屏障免疫相关功能下降。

湖北地区茯苓饮片质量标准研究

为促进湖北地区中药材深加工和产业结构调整,提高茯苓药材的利用率,带动中药材种植业、中医药知识经济等相关产业的发展,针对湖北地区茯苓饮片质量标准进行了研究.利用HPLC法测定茯苓药材中茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸的含量;采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化法测定水溶性多糖的含量测定,以无水葡萄糖为指标,利用分光光度法,建立了茯苓中水溶性多糖的含量测定方法.对水分、总灰分、二氧化硫残留和醇溶性浸出物进行了检测.经研究,湖北地区10批次茯苓饮片中茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸的平均百分含量分别为0.2592%、0.5579%和0.3538%,水溶性多糖的平均百分含量为0.2516%.该方法简便、稳定、专属性强、重复性好,对茯苓饮片质量标准进行了较为系统的研究.

JNK信号通路与细胞凋亡关系的研究进展

c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal ki-nase,JNK)信号通路是近20年来发现的与细胞分化、细胞凋亡、应激反应以及多种人类疾病的发生和发展关系非常密切的通路之一,其生物化学功能和对细胞生理、病理情况下的调节作用一直被国内外学者所关注。近年来,研究发现JNK信号通路在调控细胞凋亡中发挥重要作用,通过调节JNK信号通路有望成为治疗细胞凋亡引起的疾病的重要靶点。本文就其生物学功能及其与细胞凋亡关系作一阐述。

白根独活抗菌有效部位的化学成分研究

目的：研究白根独活抗菌有效部位的化学成分。方法：利用反复硅胶柱层析法和重结晶法对其进行分离纯化，通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。结果：从白根独活抗菌有效部位分离了7个化合物，即bisabolangelone（Ⅰ）、异欧前胡素（Ⅱ）、氧化前胡素（Ⅲ）、异氧化前胡素（Ⅳ）、水合氧化前胡内酯（Ⅴ）、佛手柑内酯（Ⅵ）、栓翅芹烯醇（Ⅶ）。结论：Bisabolangelone（Ⅰ）为首次从白根独活中分离得到，化合物Ⅱ～Ⅶ均为线性呋喃香豆素。

紫金砂体外抗菌活性的研究

目的紫金砂提取物及其提取部位抗菌活性的研究。方法95%乙醇提取,系统溶剂萃取分离得到5个部位,采用纸片扩散法对提取物及提取部位进行体外抗菌活性研究。结果紫金砂提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌具有抑制作用,氯仿提取部位对大肠杆菌、枯草芽胞杆菌具有抑制作用,正丁醇提取部位对大肠杆菌、绿脓杆菌具有抑制作用。结论紫金砂提取物及提取部位具有抗菌活性。

吉祥草乙酸乙酯提取物抗炎作用及机制研究

目的探讨吉祥草乙酸乙酯提取物及该部位分离得到的化合物RCE-4的抗炎活性及机制。方法采用细菌脂多糖(LPS)刺激经佛波酯(PMA)诱导的人单核细胞THP-1体外炎症模型检测其干预前后上清液中促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的分泌量,角叉菜胶致小鼠足趾肿胀模型检测其肿胀抑制率,通过佐剂关节炎模型检测组织内和血清中NO的含量。结果其能显著减少促炎因子的分泌量(P<0.001),抑制角叉菜胶致小鼠足趾肿胀作用(P<0.05),减少佐剂性关节炎模型组织内和血清中NO的含量(P<0.01),并且抑制作用具有时间和剂量依赖性。结论吉祥草乙酸乙酯提取物及RCE-4具有明显的抗炎活性,其作用机制可能与抑制促炎细胞因子和NO的释放有关。

筒鞘蛇菰化学成分研究

目的研究蛇菰科筒鞘蛇菰Balanophora involicrataHook.f.的化学成分。方法采用硅胶柱层析,Sephadex LH-20,制备型薄层层析(PTLC)等技术手段分离纯化单体,通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。结果从筒鞘蛇菰的石油醚和醋酸乙酯萃取部分,共分得8个化合物,即松柏苷(coniferin,Ⅰ),甲基松柏苷(methylconiferin,Ⅱ),4-O-β-D-葡萄糖吡喃型-松柏醛(4-O-β-D-glucopyranosyl coniferyl aldehyde,Ⅲ),羽扇豆醇(lupeol,Ⅳ),乙酸羽扇豆醇酯(lupeol ac-etate,Ⅴ),β-香树脂醇(β-amyrin,Ⅵ),β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅶ),胡萝卜苷(β-sitosterol glucoside,Ⅷ)。结论化合物Ⅲ为首次从该植物中分得。

中药白根独活抗胃溃疡有效部位研究

采用系统溶剂法提取分离中药白根独活得到5个部位,通过阿司匹林-乙醇溶液所致小鼠胃溃疡模型筛选中药白根独活抗胃溃疡作用的有效部位.结果表明中药白根独活的石油醚、氯仿、乙酸乙酯等脂溶性部位具有显著的抗胃溃疡作用.因此,脂溶性部位为中药白根独活抗胃溃疡的有效部位.