酶解-超声法破碎大肠杆菌提纯包含体

大肠杆菌的破碎方法对包含体的纯度有较大影响。采用酶解和超声波相结合的方式进行了大肠杆菌的破碎实验研究,考察了溶菌酶用量、酶解温度、超声处理功率和时间等因素对菌体破碎程度的影响,通过测定破碎液的A650,A280,A260nm来反映细胞的破碎程度和胞内蛋白及核酸物质的释放情况。在优化的条件下,每克湿菌体添加2mg溶菌酶,30℃酶解60min、500W超声破碎50次后,经分离洗涤可获得纯度达57%的包含体。本方法可获得纯度更高的包含体,利于重组蛋白的进一步纯化。

发酵条件对毕赤酵母表达重组人干扰素ω糖基化的影响

发酵条件是影响毕赤酵母 (P .pastoris)表达外源重组糖蛋白时糖基化的重要因素。通过菌体浓度、起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、装液量等摇瓶发酵实验 ,研究不同发酵条件对毕赤酵母表达分泌型重组人干扰素ω(rhIFNω)过程中糖基化的影响 ;同时 ,在连续培养过程中考察pH值变化对rhIFNω糖基化的影响和分批发酵过程中rhIFNω糖基化的变化。结果表明 ,控制菌体密度 2 5 0g L(WCW)、起始pH值 6 0、装液量小于 30mL、甲醇诱导浓度 15g L、甲醇诱导 3次 (每 2 4h诱导一次 )等发酵条件 ,有利于摇瓶发酵过程中rhIFNω的糖基化 ;控制pH值 7 0～ 7 5可促进rhIFNω的糖基化 ;分批发酵过程中 ,糖基化与非糖基化rhIFNω的含量有同比变化趋势 ,但糖基化rhIFNω所占比例明显低于摇瓶发酵实验的结果 ,其原因有待进一步研究。

聚乙二醇修饰重组人干扰素ω的过程优化

采用分子量20000直链单甲氧基PEG-琥珀酰亚胺琥珀酸酯(mPEG-SS)对毕赤酵母表达的重组人干扰素ω(rhIFNω)进行氨基化学修饰,以期获得抗原性降低及稳定性增加的单链PEG修饰产物(PEG-rhIFNω)。建立了PEG修饰rhIFNω的反应体系,考察了修饰反应各因素对单修饰产物得率的影响,优化修饰工艺条件为:反应体系起始pH值8.5,rhIFNω/PEG摩尔比1∶7,rhIFNω浓度0.75 mg.ml-1,磷酸盐缓冲液浓度50mmol.L-1,于25℃振荡反应4 h,用30%冰醋酸终止反应。在优化条件下,单链PEG-rhIFNω含量和修饰率分别达到0.25 mg.ml-1和34.63%。纯化后的单链PEG-rhIFNω具有典型PEG修饰蛋白的特性,体外抗病毒活性保留了天然rhIFNω抗病毒活性的15%。

毛囊黑素干细胞研究进展

位于毛囊中的黑素干细胞在人和动物的皮肤附件系统中起着黑素细胞储存库的作用。在哺乳动物,黑素干细胞负责向毛母质提供黑素细胞,活化的黑素细胞向毛干的角质形成细胞提供黑素。在人类,黑素干细胞一方面可为毛母质提供黑素细胞,如生长期毛母质中的黑素细胞、斑秃毛发再生中毛母质的黑素细胞等;另一方面可为脱色的表皮提供黑素细胞,如白癜风复色、表皮烧伤或擦伤后的复色。所以,对毛囊黑素干细胞的深入理解在研究色素变化和相关疾病方面具有重要的意义。

假丝酵母产生物表面活性剂的研究

从扬子石化的废水淤泥中筛选到1株假丝酵母(Candida),其发酵上清液有较强的表面活性,可将水的表面张力从72.3mN/m降到32.5mN/m。发酵上清液经酸化、丙酮沉淀后得到浅黄色固体,经TLC、IR、GC-MS分析表明:此种物质为脂肽类物质,疏水基部分为十六碳酸和9-十八烯酸,亲水基部分含有多种氨基酸。其临界胶束质量浓度为150mg/L,可耐受120℃高温和饱和浓度盐离子(质量分数为36%的Na+),pH适应范围广(pH2～12),是一种极具应用前景的生物表面活性剂。

假丝酵母E-2产生物表面活性剂摇瓶发酵条件的优化

从扬子石化的废水淤泥中筛选到1株能发酵液体石蜡产脂肽类生物表面活性剂的假丝酵母CandidaE-2。通过单因子实验和正交试验,得到了最佳发酵培养基组成(g/L):牛肉膏3.0,蔗糖2.0,酵母膏0.25,KH2PO412.5,MgSO40.3,NaCl 1.5,CaCl20.05,尿素0.5;液体石蜡10%(体积分数)。最佳培养条件:初始pH7.0,接种量0.12 g/L,装液量为200mL三角瓶30 mL,培养时间为5 d。最终产量提高了2.7倍,达1.582 g/L。

重组人成骨蛋白-1基因在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达

目的 研究重组人成骨蛋白 -1(rhOP -1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达。方法 利用RT -PCR技术 ,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP- 1成熟肽基因片段 ,再将rhOP- 1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX- 4T- 2中 ,构建表达质粒pCCBC- OP- 1,并转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)中 ,在发酵过程中不添加任何诱导剂。表达产物经SDS -PAGE分析。结果 扩增的目的基因序列与文献报道一致。表达的目的蛋白相对分子质量为 14 0 0 0 ,表达量达到菌体蛋白的 4 0 %。结论 克隆了人OP -1成熟肽基因 ,并实现了rhOP- 1的非诱导高效表达。

2000年～2003年长江流域6城市抗高血压药利用分析

目的:评估长江流域6城市抗高血压药使用特点及用药趋势。方法:采用购药金额排序法,对临床常用的6大类抗高血压药在6城市的销售情况、所占百分比和重点药品等进行分析。结果:6城市抗高血压药的销售金额呈上升趋势,其中上海、南京和杭州增长较高,武汉、成都和重庆增长相对较低。钙通道阻滞药用量约占抗高血压药的50 % ,血管紧张素转换酶抑制药约占25 % ,血管紧张素Ⅱ受体拮抗药约占10%。结论:钙通道阻滞药、血管紧张素转换酶抑制药和血管紧张素Ⅱ受体拮抗药为临床用量最大的3类抗高血压药,其它3类药物临床用量较少,生产企业应予关注。

高效液相色谱梯度洗脱法测定注射用美洛西林钠-舒巴坦钠中有关物质

目的建立HPLC梯度洗脱法测定注射用美洛西林钠-舒巴坦钠有关物质的方法。方法使用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0μm),以磷酸盐缓冲液(5.44 g L-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH至3.8,即得)和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL min-1,柱温为31℃,检测波长为215 nm。结果样品中有关物质完全洗出,美洛西林和舒巴坦主峰与有关物质峰均达到基线分离,舒巴坦杂质A、B分离度符合要求;舒巴坦杂质A、舒巴坦杂质B、舒巴坦和美洛西林与峰面积线性关系良好,相关系数(r)均>0.997 2;舒巴坦杂质A相对舒巴坦校正因子为0.6,舒巴坦杂质B相对舒巴坦校正因子为0.5;舒巴坦杂质A、B检测限分别为3.11 ng和5.98 ng,定量限分别为10.36 ng和17.93 ng,舒巴坦检测限和定量限分别为8.46 ng和31.01 ng;美洛西林的检测限和定量限分别为12.20和40.25 ng;舒巴坦杂质A、B平均回收率(n=9)分别为100.9%和102.0%。结论该方法对注射用美洛西林钠舒巴坦钠有关物质的测定灵敏、准确、专属性强,适用于产品质量控制。

pH对L-天冬酰胺酶发酵的影响及其控制

pH对大肠杆菌L-天冬酰胺酶的产生有很大的影响。通过对不同缓冲体系试验和对摇瓶发酵过程pH变化的分析,了解摇瓶发酵过程中pH对L-天冬酰胺酶合成的影响。采用流加磷酸自控L-天冬酰胺酶发酵过程的pH,可延长发酵周期,有效地防止菌体的过早自溶,大大促进L-天冬酰胺酶的合成,较分批发酵提高产酶 83%,达到 110u/mL。发酵动力学特性分析表明,该发酵方式L-天冬酰胺酶的合成与菌体生长不相关,控制比生长速率μ为 0. 15~0. 30h-1,均有利于L-天冬酰胺酶的合成,可使比产酶速率的最大值Qpmax达到 3 922u/(g·h)。

异烟肼片微生物限度检查法的建立

建立一种适用于异烟肼片的微生物限度检查方法,并对方法进行验证。需氧菌、霉菌和酵母菌总数计数法、控制菌(大肠埃希菌)检查均采用薄膜过滤法,供试液浓度为1∶10。需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数法方法验证各试验菌的回收试验结果均在0.5~2.0之间,大肠埃希菌检查法适用性试验符合要求。该方法可行性强,适用于异烟肼片的微生物限度检查。

原子吸收分光光度法分析注射用头孢替安中钠的含量

目的:测定注射用头孢替安中钠的含量;方法:采用原子吸收分光光度法(AAS)测定钠的含量;结果:该法测定的Na元素浓度在0.87~1.74μg/m L范围内线性关系良好,平均回收率为100.29%(n=9),RSD=0.58%;结论:采用原子吸收分光光度法测定注射用盐酸头孢替安样品中钠的含量,方法简便、准确。

重组人干扰素ω在对数生长期毕赤酵母中的高效表达特性研究

用不同比生长速率μ的毕赤酵母探讨其表达外源重组蛋白的差异性，通过起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、菌体浓度、装液量等实验，优化具有较高μ的对数生长期毕赤酵母表达rhlFNω的摇瓶条件。结果表明，μ对毕赤酵母表达rhlFNω有显著影响。μ为0．1612h^-1的毕赤酵母表达rhlFNω最高为558mg／L，较μ为0．1321、0．0505和0．0052h^-1的毕赤酵母分别提高50％、68％和99％。对数生长期的毕赤酵母表达rhlFNω的最适摇瓶表达条件为：250mL摇瓶装入30mL BMMY，控制菌体浓度达到200～300g／L（WCW），起始pH值自然，每24h添加甲醇15g／L一次。诱导表达周期为4d。通过表达条件的优化，rhlFNω的表达量达到1070mg／L。较优化前提高149％。

大肠杆菌重组人成骨蛋白-1的非诱导表达特性

目的 研究大肠杆菌重组人成骨蛋白 1的非诱导表达特性。方法 通过水质、起始pH、接种量、葡萄糖添加量、甘油添加量、装液量、转速等实验研究不同营养条件和培养条件对OP 1非诱导表达的影响。通过传代实验 ,考察该系统OP 1表达的稳定性。结果 水质对OP 1的表达没有明显影响 ,2 %～ 4 %的接种量有利于OP 1的表达 ,起始pH以 6 0为宜。葡萄糖对OP 1的表达有较大影响 ,2 %～ 4 %的葡萄糖添加量可以获得较高表达。甘油的添加能明显促进OP 1的表达 ,最适添加量为 0 3% ,较对照提高表达 81 7%。该表达系统对溶氧的需求不大 ,装液量和转速分别以 12 5～ 15 0ml和 15 0r min为宜。在优化条件下 ,最适表达时间为 2 4～ 2 6h ,OP 1的表达量可达到菌体蛋白的 4 0 %。优化的营养条件和培养条件对本系统OP 1的表达和质粒的稳定有利 ,10次传代可保持 90 %表达。结论 建立了非诱导表达的摇瓶发酵工艺 ,对其非诱导表达特性有了较为深入的了解 ,为进一步放大研究奠定了基础。

SPE-HPLC测定辅酶Q10氯化钠注射液中异构体的含量

目的建立一种固相萃取-高效液相色谱法,用于辅酶Q10氯化钠注射液中异构体的测定,并考察样品在贮藏过程中异构体的变化情况。方法HP-Silica色谱柱(250×4.6mm,5μm);以正己烷-乙酸乙酯(97∶3)为流动相;流速为每分钟1.0mL;柱温35℃;检测波长为275nm;采用自身对照法计算结果。结果辅酶Q10进样量在10.3ng^205.4ng之间线性关系良好(r=0.99997,n=9);重复性良好,RSD为0.9%(n=6);中间精密度良好,RSD为1.8%(n=12);回收率99.5%,RSD为0.8%(n=9);异构体与辅酶Q10分离良好,制剂中其他成分不干扰测定。结论方法可用于该制剂异构体的测定,同时经过稳定性考察本品在避光情况下放置,异构体变化不大。

均匀设计法优化白藜芦醇超临界CO_2流体萃取工艺

目的优选超临界CO2流体萃取虎杖中有效成分白藜芦醇的最佳工艺条件。方法采用均匀设计法安排试验,探索压力、温度、夹带剂等工艺参数对有效成分得率的影响,采用高效液相色谱(HPLC)法测定虎杖萃取产物中白藜芦醇的含量,计算收率,数据处理采用SAS 8.0统计软件处理。结果最佳萃取条件为萃取压力30 MPa,萃取温度60℃,夹带剂用量为100%,萃取时间120 min。结论超临界CO2流体萃取较常规的有机溶剂提取方法可获得更高的收率,为改进虎杖中白藜芦醇的提取方法提供了科学依据。

丹参总酚酸微波真空干燥工艺优化

目的优化丹参总酚酸的微波真空干燥工艺。方法以丹参总酚酸中有效成分丹酚酸B的含量为指标,采用三因素水平BoxBehnken设计法,考察了微波真空干燥前浸膏相对密度、微波功率、干燥时间等影响因素。结果经过验证,确定其最佳工艺参数,浸膏相对密度为1.29 g/m L的稠膏,微波功率为585 W,微波干燥时间为22.33 min;对最佳工艺进行验证,结果实测平均值与模型预测值相对接近,表明该模型可靠。结论微波真空干燥工艺具有干燥时间短、耗能低、特别适合热敏性成分的干燥等优点,值得在中药物料的干燥工序中推广。

头孢哌酮钠静脉滴注液浑浊原因及对策

目的:探讨头孢哌酮钠静脉滴注液浑浊的原因及解决方法。方法:考察药品质量、pH值、不同溶剂。将微量5%碳酸氢钠注射液加入到头孢哌酮钠静脉滴注液中,可以控制其pH值的下降趋势,从而保持药液澄明。结果:室温下溶液出现浑浊的原因在于pH值下降至该药液的变化点(pH值=4.2)以下,与药品质量无关。结论:此解决方法简便,临床应用方便,有推广价值。

层状双氢氧化物改性LDPE复合材料的制备及其性能

利用Mg^(2+),Ca^(2+)制备镁钙层状双氢氧化物(Mg/Ca-LDH),与十二烷基磺酸钠(SDS)以共沉淀方式制备改性Mg/Ca-LDH[记作Mg/Ca-LDH(SDS)],并对低密度聚乙烯(LDPE)进行改性,表征了其结构并研究了其性能。结果表明:Mg/Ca-LDH(SDS)的片层发生剥离,成功进入到LDPE基体中;LDPE复合材料的降解过程属于多阶热降解,LDPE基体的热解温度从330℃提高到390℃,与纯LDPE相比,热降解速率降低,800℃残炭率提高17.63%;Mg/Ca-LDH(SDS)用量为30 phr时,复合材料的最大热释放速率低于纯LDPE,总热释放量降低80.6%;复合材料的极限氧指数达到27.3%,较纯LDPE增长56.6%,能通过垂直燃烧测试,因此,Mg/Ca-LDH(SDS)对LDPE有一定的阻燃作用。