宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛甲基化及其与基因失活的关系

背景与目的:脆性组氨酸三联基因(fragile histidine triad gene,FHIT)作为抑癌基因与多种实体瘤的发生有关,并在多种肿瘤中因甲基化而失活。本研究拟探讨宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛甲基化状况及其与基因失活的关系。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation鄄specificPCR,MSP)和免疫组织化学法分别检测10例正常宫颈鳞状上皮、40例宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛的甲基化发生状况和FHIT蛋白表达情况。结果:(1)正常宫颈鳞状上皮组织中未发现存在FHIT基因甲基化状态,而宫颈癌组织中FHIT基因5'端CpG岛的甲基化率为40.0%(16/40);(2)临床Ⅱ期宫颈癌病例中FHIT基因甲基化的发生率为56.5%(13/23),明显高于Ⅰ期的14.3%(2/14)(P<0.05);(3)宫颈癌组织中存在FHIT蛋白表达降低或缺失,阳性率仅为30.0%(12/40),显著低于正常宫颈组织的100.0%(10/10)(P<0.05)。结论:FHIT基因5'端CpG岛甲基化是宫颈癌中该基因失活的机制之一,可能与宫颈癌的发生发展有关。

卵巢癌组织中EphA2受体蛋白的表达

目的:探讨卵巢癌组织中EphA2受体蛋白的表达及其评价预后的价值。方法:应用免疫组织化学法对 135例卵巢癌组织进行EphA2检测,对其中15例不同级别EphA2蛋白表达的冰冻组织标本,应用激光捕获显微切 割技术(LCM)捕获卵巢癌细胞,应用Western印迹分析方法检测其蛋白表达水平。结果:在135例卵巢癌组织中, EphA2蛋白阳性表达率为91.1%,分别为(-)12例(8.9%),(+)75例(55.6%),( )30例(22.2%),( )18例 (13.3%)。EphA2蛋白表达与卵巢癌患者的年龄、FIGO分期、组织学类型、组织分化程度以及残余肿瘤大小均无 关(P>0.05)。平均生存时间在EphA2蛋白染色强度-～+组与 ～ 组间差异有统计学意义(P<0.05),且 Western印迹结果与免疫组织化学结果一致。结论:EphA2蛋白高表达与卵巢癌患者生存差有关,具有潜在的预测 预后价值。

宫颈鳞癌组织中EphA2基因的表达

目的 :探讨宫颈鳞癌组织中EphA2的表达。方法 :应用免疫组化法观察EphA2在 2 0 6例FIGOⅠa Ⅳb期的宫颈鳞癌组织中的表达 ,从中选择 2 0例不同EphA2蛋白表达的病例 ,应用激光捕获显微切割技术 (Lasercapturemicrodissection ,LCM)从冰冻组织切片中选切大约 5 0个宫颈鳞癌细胞 ,应用RT PCR方法检测EphA2mRNA的表达。结果 :2 0 6例宫颈鳞癌组织中 ,EphA2蛋白阴性表达 2 3例 (1 1 .2 % ) ,弱阳性表达 94例 (4 5 .6 % ) ,阳性表达 72例 (35 .0 % ) ,强阳性表达 1 7例 (8.3% ) ;EphA2蛋白与其mRNA表达水平不完全一致 ;EphA2蛋白表达与宫颈鳞癌患者的年龄、FIGO分期及淋巴结转移无关 ,总生存期在EphA2染色强度 0～ 3级之间差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :EphA2在宫颈鳞癌中的高表达预示患者的生存差。

卵巢癌组织中EphA2与ERβ的表达

目的:探讨卵巢癌组织中EphA2与雌激素受体ERβ的表达及相关性。方法:应用免疫组化法对118例卵巢癌组织进行EphA2、ERβ检测,对其中10例EphA2及ERβ阳性表达的冰冻组织标本,应用激光捕获显微切割技术(LCM)捕获卵巢癌细胞,应用Western印迹分析方法检测其中EphA2及ERβ蛋白表达水平。结果:卵巢癌组织中ERβ及EphA2阳性率分别为99.2%(117/118)和90.7%(107/118);EphA2表达与卵巢癌患者的年龄、组织学类型及残余肿瘤大小无关(P>0.05),而与FIGO分期、组织分化程度有关(P<0.05);ERβ表达与卵巢癌患者的年龄、组织学类型、FIGO分期、残余肿瘤大小无关(P>0.05),与组织分化程度有关(P<0.05);ERβ与EphA2的表达有相关性(rs=0.184,P<0.05)。Western印迹分析,EphA2蛋白和ERβ蛋白条带强度一致。结论:ERβ与E-phA2蛋白可能与卵巢癌的进展有关。

激光捕获显微切割技术检测卵巢癌组织中EphA2受体的表达

目的:检测卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平。方法:应用激光捕获显微切割技术(LCM)辅助的一步RT-PCR及Western blot方法检测30例卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平。结果:LCM成功地将卵巢癌细胞从卵巢癌冰冻组织切片中分离。RT-PCR结果显示,卵巢癌组织中有不同级别的EphA2受体mRNA表达,mRNA表达与卵巢癌患者的年龄、FIGO分期、组织学类型、组织分化程度以及残余肿瘤大小均无关(P>0.05)。Western blot结果显示EphA2受体表达与mRNA表达水平一致。结论:LCM能够精确分离少量卵巢癌细胞;卵巢癌组织中有不同级别的EphA2受体mRNA及蛋白质表达。

卵巢上皮性癌组织中雌激素受体亚型的表达

目的探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型ERα及ERβ蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其与临床病理学因素及生存的关系。方法应用免疫组化法对118例卵巢上皮性癌组织进行ERα及ERβ检测,对其中10例ERα及ERβ阳性表达的冰冻组织标本,应用激光捕获显微切割技术(laser capture m icod issection,LCM)捕获卵巢癌细胞,应用W estern印迹分析方法检测其蛋白表达水平。结果118例卵巢上皮性癌组织中ERα表达为0级32例(27.1%),1级表达20例(16.9%),2级表达17例(14.4%),3级表达49例(41.5%);ERβ表达为0级表达1例(0.8%),1级表达7例(5.9%),2级表达13例(11%),3级表达97例(82.2%)。ERα蛋白表达在卵巢癌患者不同的年龄、组织学类型、F IGO分期、组织分化程度以及残余肿瘤大小间差异无统计学意义(P>0.05);ERβ蛋白表达在卵巢癌患者的年龄、F IGO分期、残余肿瘤大小间差异无统计学意义(P>0.05),在不同组织分化程度间差异有统计学意义,低分化者显著高于中、高分化者(P<0.05);总生存率在ERα表达各组间比较差异无统计学意义(P>0.05),在ERβ表达各组间比较差异有统计学意义,强表达组生存期明显缩短(P<0.05)。W estern印迹结果与免疫组化结果一致。结论卵巢上皮性癌组织以ERβ表达为主,ERβ蛋白表达与组织分化程度有关。

卵巢上皮性癌组织中二肽基肽酶Ⅳ蛋白和mRNA的表达

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)蛋白和mRNA的表达及其与临床病理特征的关系。方法:应用激光捕获显微切割技术对31例新鲜卵巢癌组织进行处理,准确地获取较纯的卵巢癌细胞,采用Western Blot和RT-PCR检测DPPⅣ蛋白和mRNA的表达,同时选取9例正常卵巢组织作为对照。结果:28例(90.32%)卵巢上皮性癌组织中检测到相对分子量200000～220000DPPⅣ蛋白;29(93.54%)例扩增出228bp的DPPⅣ mRNA。卵巢癌组织中DPPⅣ蛋白和mRNA含量分别为(1.49±0.36)和(1.28±0.31),高于正常卵巢组织的(0.48±0.29)和(0.50±0.18),差异有统计学意义(t值分别为4.90、6.23,P均<0.05)。DPPⅣ蛋白和mRNA的表达水平与患者FIGO分期、组织学分级和淋巴结转移有关(蛋白:F值分别为8.58,9.15,t=1.65;mRNA:F值分别为7.02、7.31,t=1.87,P<0.05),与年龄、肿瘤大小和组织学类型无关。结论:DPPⅣ参与了卵巢癌的发生发展,可能成为卵巢癌的检测指标及基因治疗的潜在靶点。

上皮性卵巢癌组织中seprase mRNA的表达

目的:应用FITC cRNA探针原位杂交技术检测卵巢上皮性癌组织中seprasemRNA的表达。方法:设计5′端含有T7RNA聚合酶启动子序列的PCR引物,以质粒PA15His的cDNA为模板扩增得到DNA片段,并在T7RNA聚合酶作用下,采用体外转录方法合成FITC标记的Seprase正义和反义RNA探针,对86例卵巢上皮性癌石蜡包埋组织进行原位杂交,检测seprasemRNA的原位表达,12例正常卵巢组织作对照。结果:86例卵巢癌组织se prasemRNA的表达阳性率为96.5%(83/86),显著高于在正常卵巢组织的16.16%(2/12)(P<0.01)。seprase mRNA的表达与卵巢癌组织学分级和临床分期有关,而与患者年龄、组织学类型无关。结论:在卵巢癌的发生发展中seprasemRNA起一定作用。

EphA2受体及其配体在浆液性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨浆液性卵巢癌组织中EphA2及其配体EphrinA-1的蛋白表达、定位及其与临床病理学因素及生存的关系。方法应用免疫组织化学方法检测浆液性卵巢癌组织中EphA2及其配体EphrinA-1的蛋白表达、定位,并应用免疫组织化学方法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分析方法联合检测卵巢癌细胞系OVCAR3、SKOV3中EphA2及其EphrinA-1 mRNA及蛋白质表达水平。结果 95例浆液性卵巢癌组织中,EphA2和EphrinA-1蛋白阳性表达率分别为92.6(88/95)和97.9(93/95),高于正常卵巢组织〔40%(8/20)和30%(6/20),P=0.000〕;EphA2阳性染色定位于肿瘤区和血管内皮细胞,EphrinA-1阳性染色主要定位于肿瘤区,二者的阳性表达呈正相关(r=0.98,P=0.02);EphA2和EphrinA-1蛋白表达与浆液性卵巢癌患者的年龄、FIGO分期、残余肿瘤大小及组织分化程度均无相关性,二者强表达与患者生存差有关(P<0.05)。卵巢癌细胞系OVCAR3及SKOV3在mRNA及蛋白质水平均存在EphA2和EphrinA-1的高表达。结论 EphA2与EphrinA-1蛋白可能在浆液性卵巢癌的发展过程中起着协同促进作用,EphA2与EphrinA-1蛋白的强表达与浆液性卵巢癌患者的生存差有关,提示二者具有潜在的预后价值。

Seprase在上皮性卵巢癌胸腹水中的表达及其临床预后意义

目的 探讨Seprase在上皮性卵巢癌胸腹水癌细胞中的表达及其临床预后意义。方法 选择郑州大学第一附属医院和挪威奥斯陆大学附属肿瘤医院2001-2003年住院的65例上皮性卵巢癌患者的胸腹水标本75份，采用免疫组化技术检测了65份卵巢癌腹水和10份胸水细胞石蜡包埋组织中Seprase蛋白的表达，并对其中34份新鲜腹水细胞进行免疫印迹分析，同时检测9份良性腹水脱落细胞作为对照。结果 上皮性卵巢癌胸腹水中Seprase蛋白阳性表达率77．33％（58／75），显著高于良性胸腹水的22．22％（2／9），P〈0．01。Seprase蛋白的表达与卵巢癌患者年龄、FIGO分期、组织学分级和组织学类型无关，而与患者预后呈负相关（P〈0．05）。蛋白印迹表明27／34样本中同时检测到170ku Seprase二聚体和97ku单体，1份仪表达170ku Seprase二聚体。结论 Seprase参与了卵巢癌的发生发展，并与患者不良预后有关，可能成为卵巢癌的预后指标。

EphA2 siRNA转染对人卵巢癌细胞SKOV3生物学行为的影响

目的探讨促红素人肝细胞受体酪氨酸激酶A2(EphA2)干扰性小RNA(siRNA)转染人卵巢癌细胞SKOV3后,对其生物学行为的影响。方法根据EphA2序列合成一对siRNA,转染SKOV3细胞,通过荧光倒置显微镜观察转染效率和细胞形态;Western blot检测EphA2蛋白表达水平;台盼蓝染色细胞计数法绘制细胞生长曲线;集落形成实验、黏附力测定、细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞的集落形成率、黏附和侵袭力。结果构建的EphA2siRNA转染SKOV3后,荧光倒置显微镜下可见大量荧光颗粒;Western blot检测EphA2蛋白水平表达降低(P<0.05);细胞的增殖、黏附力、侵袭力均受到抑制(P<0.05);集落形成率无明显影响(P>0.05)。结论 EphA2siRNA有效降低细胞中EphA2基因表达,抑制细胞的增殖,降低细胞的黏附力和侵袭力,从而逆转其恶性生物学行为,为肿瘤的有效干预和治疗提供新的靶点。