不同冷冻方法对胎儿卵巢组织早期卵泡的影响

目的观察不同冷冻方法对胎儿卵巢组织早期卵泡的影响。方法分别采用程序冷冻法(PFG)、快速冷冻法(RFG)、玻璃化冷冻法(VG)冻存胎儿卵巢组织,解冻后进行光镜、电镜观察。结果光、电镜组织形态学观察发现冻后各组卵泡结构均存在一定程度的冷冻损伤。冷冻后的胎儿卵巢内形态正常的卵泡数明显下降,在2 mm×2 mm×1 mm的卵巢皮质内,形态正常的卵泡数在PFG、RFG、VG及新鲜对照组(FCG)中分别为(992.3±618.2)个、(542.8±202.5)个、(1604.8±964.0)个和(1888.2±645.3)个。RFG卵泡数显著低于FEG与VG(P<0.05),但与PFG间差异无统计学意义(P>0.05)。结论三种冷冻方法均可有效冻存胎儿卵巢组织,其中玻璃化法对卵巢内早期卵泡的损伤最小,单位体积内保存的卵泡数最多。

去势小鼠自体冷冻卵巢移植后海马神经元超微结构变化

目的观察去势小鼠卵巢移植对大脑海马神经元超微结构变化的影响,探讨卵巢分泌激素对中枢神经系统的作用。方法将去势雌性BALB/C小鼠随机分为移植组、去势对照组和空白对照组,每组各10只。移植组于去势后2周行自体冷冻卵巢解冻移植,移植组于移植2周后、去势对照组和空白对照组于4周后取大脑海马部位观察神经元行形态学变化。结果移植组小鼠大脑神经元超微结构与正常对照组相同,形态及结构完整正常;神经元突触密度较去势对照组增高(P<0.01),而去势对照组小鼠神经元结构欠完整,突触密度也降低。结论去势小鼠行卵巢移植可增加海马神经元突触数,保护神经元的形态结构和功能。

不同浓度保护剂及渗透平衡时间对慢速冷冻小鼠卵母细胞活力的影响

目的探讨不同的冷冻保护剂浓度、渗透平衡时间对小鼠卵母细胞冷冻后存活率及存活卵母细胞ICSI受精后胚胎发育潜能的影响。方法小鼠卵母细胞来自用HMG／HCG刺激的性成熟小鼠，依据预平衡液浓度，即1．0M或1．5M丙二醇（PROH），将卵母细胞分为A、B组。依据装载液蔗糖浓度（0．1、0．2、0．3M）的不同将A、B两组分为A1、A2、A3、B1、B2、B3 6组；依卵母细胞在平衡液中的渗透平衡时间不同（〈10min、〉20min）分为C、D两组；依装载液中的渗透平衡时间不同（〈10min、〉30min）分为E、F两组。卵母细胞在预平衡液中渗透平衡10—20min，在装载液中渗透平衡5～30min后进入慢速程序化冷冻并保存，快速解冻后观察卵母细胞存活率、ICSI受精率和优质胚胎形成率。结果A、B组间冻存卵母细胞存活率差异有非常显著性统计学意义（43．7％vs23．5％）；A2组的卵母细胞存活率最高（52．5％），如组次之（42．9％）；C、D两组间冻存卵母细胞存活率、透明带破裂率差异无统计学意义。E、F两组间存活率、透明带破损率差异有统计学意义（52．5％vs6．3％；6．6％vs75．0％）；新鲜组和冷冻组卵母细胞受精率、卵裂率、优质胚胎率差异均有统计学意义（81．8％vs40％；77．3％vs100％；90．9％vs83．3％）。结论（1）在慢速冷冻中，平衡液较低的PROH浓度（1．0M）和装载液较高的蔗糖浓度（0．2M）有益于卵母细胞冻存存活率的提高。（2）小鼠卵在平衡液中的渗透平衡时间以10min为宜；在装载液中室温下的渗透平衡时间以5～10min为宜，最好不要超过15min。（3）冻存复苏后的存活卵经ICSI受精后受精率下降，但受精后胚胎的发育潜能似乎未受多大影响。