苦豆子抗内毒素效应的实验研究

目的:研究苦豆子中提取的苦豆子总碱及氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱对内毒素肺损伤小鼠模型的干预作用及其作用机制。方法:以清开灵注射液作为本研究的阳性对照药物。分别连续3天腹腔注射给予ICR小鼠各个生物碱及清开灵,均末次给药后1 h腹腔注射LPS(E.coil,055∶B5)9 mg/kg造成小鼠内毒素性肺损伤,观察小鼠一般状况、白细胞数量、肺W/D比值、肺组织病理形态学改变,以及免疫组织化学法检测肺组织CD14和清道夫受体(SR-A)的表达,放免法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果:预防性给予内毒素肺损伤小鼠苦豆子总碱和三种苦豆子单体碱,均不同程度改善了模型鼠的一般状况,并可不同程度地升高外周血白细胞,降低肺脏W/D比值,减轻肺组织病理改变,降低模型鼠肺组织CD14表达,增加SR-A表达,降低血清中TNF-α和IL-6的水平。结论:苦豆子总碱和三种苦豆子单体碱可不同程度地减轻内毒素肺损伤小鼠的病理损害,它们的抗内毒素机制可能与调节LPS的识别受体,并进而影响下游炎症因子表达有关。

四种人胃癌细胞体外增殖和侵袭能力比较

目的比较四种不同组织来源、不同分化程度的胃癌细胞MGC-803、HGC-27、BGC-823、SGC-7901的体外增殖和侵袭能力。方法分别培养四种细胞,用直接计数法绘制细胞生长曲线,计算其群体倍增时间;以细胞克隆形成率比较其增殖能力;体外划痕法和Transwells法比较四种细胞迁移、侵袭能力。结果与MGC-803和HGC-27相比,BGC-823和SGC-7901的生长速度依次减慢,群体倍增时间依次增加(P<0.05);平板克隆形成率从MGC-803、HGC-27、BGC-823到SGC-7901分别是42.7±2.2、38.6±1.6、28.9±1.7、21.3±1.9,差异有统计学意义(P<0.05)。体外划痕法和Transwells小室侵袭实验均表明MGC-803和HGC-27细胞的迁移侵袭能力较BGC-823和SGC-7901高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论四株胃癌细胞株,从MGC-803、HGC-27、BGC-823到SGC-7901其增殖和侵袭能力逐渐下降。

槐定碱抗内毒素效应的初步研究

目的探讨槐定碱的抗内毒素（ET）作用.方法鲎试剂显色基质法定量测定槐定碱体外降解ET的作用,复制内毒素肺损伤小鼠模型,以小鼠一般状况、白细胞计数、肺W/D比值、肺组织病理形态学改变以及血清肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）含量,观察槐定碱抗内毒素的体内效应.结果槐定碱浓度为5μg/mL时对ET的降解率为79.34%,在0.625～5μg/mL范围内呈现剂量依赖性.槐定碱可改善内毒素肺损伤小鼠的一般状况,使白细胞回升（均P＜0.05）,肺W/D比值下降（P＜0.05）,减轻肺组织病理损伤,降低TNF-α和IL-6含量（P＜0.05）.结论槐定碱具有直接拮抗内毒素作用,并可减轻内毒素肺损伤小鼠的病理损害.

赖氨酰氧化酶样基因-3在体外培养的人主动脉平滑肌细胞的表达

目的研究赖氨酰氧化酶样基因-3(Lysyl Oxidase-Like Gene 3,LOXL3)在体外培养的人主动脉平滑肌细胞(Hu-man Aortic Smooth Muscle Cell,HAoSMC)的表达模式。方法提取不同生长阶段的人主动脉平滑肌细胞的不同组分,用Northern Blot、Western Blot从mRNA和蛋白水平分析LOXL3表达,并与赖氨酰氧化酶样基因-2(Lysyl Oxidase-Like Gene 2,LOXL2)比较。结果LOXL3 mRNA和蛋白含量在细胞汇合前高于细胞汇合期和汇合后,且LOXL3蛋白在细胞外基质和细胞的不可溶组分中含量较高,而LOXL2则在细胞培养液中表达较高。结论LOXL3的表达量在细胞生长的不同阶段有所不同,人主动脉平滑肌细胞的LOXL3和LOXL2分布不同,可能与其功能有关。

嗜肺军团菌pilE基因的克隆及其原核表达

目的克隆嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白pilE基因,构建重组质粒pET-pilE,并在原核系统中表达。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增军团菌Ⅳ型菌毛蛋白pilE基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达重组质粒pET-pilE,经限制性内切酶鉴定、PCR及测序分析后,转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了429bp完整的pilE基因,构建的原核表达重组质粒pET-pilE表达出35.7 kDa的融合蛋白质。结论成功构建了军团菌pilE基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中得到了高效表达,为以后深入研究奠定了基础。