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细粒棘球蚴2HSP70重组质粒的构建、原核表达、纯化和初步鉴定
被引量:
5
1
作者
丁淑琴
王洁
+2 位作者
王淑静
张焱
赵巍
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第8期764-766,799,共4页
目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,EG)2热休克蛋白70(heat shock protein,2HSP70)表达重组质粒,原核表达及纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定。方法从EG2HSP70/pGEM-T/JM109质粒中分离EG2HSP70目的基因,将...
目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,EG)2热休克蛋白70(heat shock protein,2HSP70)表达重组质粒,原核表达及纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定。方法从EG2HSP70/pGEM-T/JM109质粒中分离EG2HSP70目的基因,将此片段重组入表达载体pGEX-6P-1后转化入大肠杆菌BL21,鉴定后以IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE检测其表达水平,用亲和层析纯化并分离重组蛋白,利用Western blot来鉴定重组蛋白的免疫学特性。结果酶切鉴定及测序分析表明,成功构建细粒棘球蚴pGEX-6P-1/EG2HSP70重组质粒;IPTG诱导表达后,融合蛋白占菌体总蛋白的39%,占裂解物上清总蛋白的70.4%,表明重组的EG2HSP70基因能在BL21中高效表达,表达的蛋白大部分以可溶性状态存在。亲和层析法纯化重组蛋白EG2HSP70,通过Western blot证实该重组蛋白能被细粒棘球蚴囊壁免疫兔血清识别。结论成功构建细粒棘球蚴中国大陆株pGEX-6P-1/EG2HSP70重组质粒,重组的EG2HSP70能够高效表达,表达的EG2HSP70具有免疫学活性。
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关键词
细粒棘球蚴
热休克蛋白HSPTO
重组质粒
表达
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职称材料
题名
细粒棘球蚴2HSP70重组质粒的构建、原核表达、纯化和初步鉴定
被引量:
5
1
作者
丁淑琴
王洁
王淑静
张焱
赵巍
机构
宁夏医学院病原细胞学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第8期764-766,799,共4页
基金
国家自然科学基金项目(项目编号:30260105)
宁夏自然科学基金资助项目:批准号NZ0540
宁夏卫生厅科技重点计划项目资助.
文摘
目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,EG)2热休克蛋白70(heat shock protein,2HSP70)表达重组质粒,原核表达及纯化重组蛋白,并对重组蛋白进行免疫学特性的初步鉴定。方法从EG2HSP70/pGEM-T/JM109质粒中分离EG2HSP70目的基因,将此片段重组入表达载体pGEX-6P-1后转化入大肠杆菌BL21,鉴定后以IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE检测其表达水平,用亲和层析纯化并分离重组蛋白,利用Western blot来鉴定重组蛋白的免疫学特性。结果酶切鉴定及测序分析表明,成功构建细粒棘球蚴pGEX-6P-1/EG2HSP70重组质粒;IPTG诱导表达后,融合蛋白占菌体总蛋白的39%,占裂解物上清总蛋白的70.4%,表明重组的EG2HSP70基因能在BL21中高效表达,表达的蛋白大部分以可溶性状态存在。亲和层析法纯化重组蛋白EG2HSP70,通过Western blot证实该重组蛋白能被细粒棘球蚴囊壁免疫兔血清识别。结论成功构建细粒棘球蚴中国大陆株pGEX-6P-1/EG2HSP70重组质粒,重组的EG2HSP70能够高效表达,表达的EG2HSP70具有免疫学活性。
关键词
细粒棘球蚴
热休克蛋白HSPTO
重组质粒
表达
Keywords
Echinococcus granulosus
H SP70
recombinant plasmid
expression
分类号
R383.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
细粒棘球蚴2HSP70重组质粒的构建、原核表达、纯化和初步鉴定
丁淑琴
王洁
王淑静
张焱
赵巍
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
5
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