大鼠脑出血后的细胞凋亡及其与NF-κB和I-κBα蛋白表达的关系

目的:探讨大鼠脑出血(ICH)后细胞凋亡及其与NF-κB和I-κBα蛋白表达的关系和演变规律,本实验用Ⅶ胶原酶联合肝素注入大鼠右侧脑纹状体制备脑出血模型。方法:TUNEL染色(末端脱氧核糖核苷转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)观察细胞凋亡的变化;免疫组化SABC法检测NF-κB和I-κBα蛋白的表达;Western Blot技术检测NF-κB和I-κBα蛋白相对光密度值。结果:(1)ICH组TUNEL阳性细胞于出血后12h可检测到,3d达高峰,7d仍有较高表达(P<0.01);(2)ICH组I-κBα和NF-κB蛋白免疫阳性细胞分别于出血12h、3d达高峰,7d仍高于假手术组和正常对照组(P<0.01);(3)Western Blot结果显示NF-κB相对光密度比值在ICH3d出血侧达高峰,I-κBα蛋白相对光密度比值在ICH组ICH侧12h达高峰,7d时仍明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:ICH后存在细胞凋亡;NF-κB和I-κBα参与了ICH所致的细胞凋亡。

人卵母细胞样细胞体内分化模型的建立

干细胞通过诱导培养,在体外能够分化为卵母细胞样细胞(Oocyte-like cell,OLC),将其置于体内环境能够有效地改善OLC的质量和发育能力。通过检测猪卵泡液中激素和Bmp 15蛋白的含量,选取了中等卵泡的卵泡液对人羊水干细胞进行体外诱导培养,10 d后,经实时定量PCR检测发现,早期生殖细胞样细胞团高表达生殖基因oct4和重新甲基化转移酶基因dnmt3b。将这些细胞团用猪卵泡膜包裹后形成移植物,移植到小鼠肾被膜下。1个月后取出移植物,发现移植物内的细胞在形态上,不仅与正常的卵母细胞极为相似,而且还表达生殖细胞和卵母细胞特异标记基因(oct4、nanog、stella、ifitm3、dazl、nanos3、bmp15和gdf9)。证明技术体系能够有效改善OLC的形成和发育能力。