鞘氨醇-1-磷酸干预对小鼠玻璃化冻融卵巢移植后凋亡的影响

目的探讨鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)干预对小鼠玻璃化冻融卵巢移植后卵泡形态和凋亡的影响。方法取21日龄ICR雌性小鼠卵巢分为新鲜对照组、冻存对照组和2μmol·L-1 S1P干预组,新鲜卵巢及两组冻存卵巢解冻后移植于6~8周龄ICR雌性去势小鼠肾被膜下2 d、14 d后,通过HE染色观察移植后卵巢的卵泡形态,TUNEL检测移植后卵巢的凋亡率;实时荧光定量PCR检测卵巢移植后Caspase3、Bax、Bcl-2的基因表达情况。结果移植2 d和14 d后,与新鲜对照组相比,冻存对照组和S1P干预组卵泡形态的完整性较差,闭锁卵泡多,正常卵泡明显减少,卵泡凋亡率较高(P均<0.05)。与冻存对照组相比,S1P干预组卵泡形态较完整,闭锁较少,卵泡发育良好,原始卵泡较多,卵泡凋亡率降低(P均<0.05),促凋亡基因Bax和凋亡基因Caspase3表达降低(P均<0.05);抗凋亡基因Bcl-2表达增高(P<0.05)。结论小鼠玻璃化冻融卵巢移植后S1P的干预可维持较好的卵泡发育,抑制卵泡闭锁,降低移植后卵巢凋亡,抵抗玻璃化冷冻移植对卵巢的损伤。

小鼠卵巢异体不同部位无血管吻合移植后的血管重建及对促性腺激素的反应

目的探讨小鼠卵巢不同移植部位无血管吻合移植后的血管重建及对促性腺激素的反应。方法将成年ICR小鼠的半卵巢分别移植到异体去势小鼠卵巢囊内、肾被膜下、背部肌肉内和颈部皮下,术后120h受体鼠及同批次未做移植鼠腹腔注射10 IU的孕马血清促性腺激素(PMSG),注射48h后取出卵巢;以同批次未做移植鼠作为对照组。通过卵巢组织HE染色观察卵泡形态并作卵泡分类计数;免疫组化检测卵巢组织Ki67、CD34和MVH的表达,观察卵巢内细胞增殖、卵巢内新生血管生成、雌性生殖干细胞增殖分化的情况。结果移植组每高倍视野各级卵泡数及Ki67阳性表达率均低于对照组(P均<0.01),但卵巢囊内移植组Ki67与对照组接近,间质细胞Ki67阳性表达率各移植组低于对照组(P均<0.01)。闭锁卵泡数以颈部皮下移植组的最多(P<0.01),背部肌肉内移植组闭锁卵泡最少(P<0.01)。除卵巢囊内移植组的新生血管与对照组相似外,其他异位移植组新生血管数量均增加,以背部肌肉内移植组最高(P<0.01)。结论卵巢囊内的卵巢原位移植可维持最佳的卵泡存活及对促性腺激素的反应,异位移植点较好的血供重建及卵泡生存则依次为肾被膜下、背部肌肉内及皮下移植。

小鼠卵巢玻璃化冻融过程中FSH联合S1P干预对血管内皮生长因子和缝隙连接蛋白表达的影响

目的研究小鼠卵巢玻璃化冻融过程中重组人促卵泡刺激素(rhFSH)和1-磷酸鞘氨醇(S1P)联合干预对卵泡形态、血管内皮生成相关因子(VEGF)及其受体(VEGFR-2)、缝隙连接蛋白(CX43、CX37)表达的影响。方法将21日龄ICR雌性小鼠卵巢分为新鲜组、冻存组、0.3 IU·mL^-1FSH干预玻璃化冻融组、2μmol·L^-1S1P干预玻璃化冻融组、不同浓度FSH(0.3、1、0.5、0.2、0.1 IU·mL^-1)+2μmol·L^-1S1P干预玻璃化冻融组、不同浓度S1P(4、10、20、40μmol·L^-1)+0.3 IU·mL-1FSH干预玻璃化冻融组。通过TUNEL检测冻融卵巢的卵巢凋亡率、形态学卵泡计数分析各组正常卵泡百分比及免疫组织化学法观察卵巢组织VEGF、VEGFR-2、CX43、CX37蛋白表达情况。结果除0.1 IU·mL^-1FSH+2μmol·L^-1 S1P组及0.3 IU·mL^-1 FSH+4、10μmol·L^-1S1P组,各组闭锁卵泡数均低于冻存组(P均<0.05);添加FSH及S1P后各组卵巢凋亡率均低于冻存组(P均<0.05);除0.5、0.1 IU·mL^-1 FSH+2μmol·L^-1S1P组及0.3 IU·mL^-1FSH+40μmol·L^-1SIP组,各组VEGF表达均高于冻存组(P均<0.05);2μmol·L^-1S1P组及0.3 IU·mL^-1FSH+10、40μmol·L^-1SIP组VEGFR-2表达均高于冻存组(P均<0.05);0.3、0.5、0.2 IU·mL^-1FSH+2μmol·L^-1S1P组及0.3 IU·mL^-1FSH+4、20μmol·L^-1S1P组CX43蛋白表达均高于冻存组(P均<0.05);除0.3 IU·mL^-1FSH+40μmol·L^-1SIP组,各组CX37表达均高于冻存组(P均<0.05)。联合干预结果显示1IU·mL^-1FSH、0.1 IU·mL^-1FSH及40μmol·L^-1SIP不能维护较好的卵泡结果及相关蛋白的表达。结论玻璃化冻存过程FSH联合S1P的干预可抑制卵泡闭锁,但过高的FSH及S1P导致卵泡激活成熟;0.3 IU·mL^-1FSH与2μmol·L^-1S1P干预可维持较高数目的原始卵泡池,该作用与提高VEGF、VEGFR-2、CX43及CX37蛋白表达有关。