基于卓越医生培养的病原生物学与免疫学教学改革

"卓越医生教育培养计划"要求更新教育教学观念,改革教学内容、教学方法与课程体系和评价考核方法,推进以学生自主学习为导向的教学方法改革,完善以能力为导向的形成性与终结性相结合的评定体系。宁夏医科大学在病原生物学与医学免疫学教学中,努力探索,实施了一系列改革措施,以适应培养卓越医学人才的要求。

留学生医学寄生虫数字化标本库、病例库的建设及其在线上线下混合式实验教学中的应用与评价

目的构建医学寄生虫数字化标本库及病例库,并探索其在留学生“医学寄生虫学”线上线下实验教学中的应用及效果评价。方法将我校人体寄生虫教研室的大体标本和玻片标本制作成数字化标本库,以Pubmed公开发表的Case Report中报道的寄生虫病的真实病例文献为主素材构建病例库。以2021级留学生临床本科1班为实验组,采用线上线下混合式实验教学法,以本校2021级留学生临床本科2班为对照组,采用常规实验室教学法。结果分析比较实验组和对照组共同参与的实验报告、标本辨认及病例分析成绩。跟对照组比较,实验组的平均实验报告成绩增高但不显著(P>0.05)、标本辨认成绩及案例分析成绩显著增高(P<0.01,P<0.05)。结论医学寄生虫数字化标本库及病例库在混合式实验教学中的应用激发了留学生对医学寄生虫学的学习兴趣及解决寄生虫病相关临床问题的能力,值得其他基础医学课程借鉴与参考。

宁夏西吉县中小学生包虫病感染情况分析

目的了解宁夏西吉县在校中小学生包虫病感染的情况,为制定包虫病的防控策略提供科学依据。方法 2006-2007年采用随机抽样的方法,将宁夏西吉县及周边4个镇15个乡26个村的在校中小学生作为调查对象进行血清包虫抗体的检测和腹部B超检查,并将这两种检测结果进行分析比较。结果在被调查的1467名中小学生中,ELISA法检测包虫阳性率分别为1.57%(23/1467),B超法检测包虫阳性率分别为1.16%(17/1467)。≥10岁年龄组较<10岁年龄人群包虫阳性率高(P<0.01),ELISA法检测的阳性率分别为2.19%,B超法检测的阳性率为1.16%。ELISA法检测包虫抗体女性阳性率为3.01%,高于男性0.83%,包虫抗体阳性率在不同性别组间差异有统计学意义(χ2=10.19,P<0.05);B超法检查女性阳性率(2.61%)高于男性(0.41%),包虫感染在各年龄组阳性人群组间差异有统计学意义(χ2=13.87,P<0.01)。包虫感染阳性率在不同民族之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论宁夏西吉县中小学生存在包虫感染情况,包虫感染率与年龄、性别有关。

重症监护病房脓毒血症患者病原学分布及死亡高危因素分析

目的探讨重症监护病房(ICU)脓毒血症患者的临床特征、病原菌的分布及死亡高危因素。方法选取2016年1月~2018年12月在宁夏医科大学总医院心脑血管病医院ICU科确诊的脓毒血症患者198例,分析其病原菌分布及耐药情况,根据患者预后情况分为生存组(137例)和死亡组(61例),对患者29项死亡高危因素进行单因素、多因素Logistic回归分析。结果共检出210株病原菌,其中革兰阴性菌122株(58.1%)、革兰阳性菌78株(37.1%)、真菌8株(3.8%)、厌氧菌2株(1.0%);排前六位的病原菌依次为大肠埃希菌(20.4%)、肺炎克雷伯菌(16.2%)、凝固酶阴性葡萄球菌(16.2%)、鲍曼不动杆菌(8.6%)、金黄色葡萄球菌(7.2%)及肠球菌属(7.6%);210株致病菌中共检出99株多重耐药菌株,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为31.2%和68.0%,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率分别为49.0%和41.4%,耐碳青霉烯类药物的菌株占21.3%;对死亡组和生存组资料进行单因素及多因素Logistic回归分析得出:APACHE II评分≥18分、糖尿病、基础疾病≥2种、多种细菌混合感染、多重耐药菌感染、脓毒性休克、多脏器功能衰竭、侵入性治疗、NT-proBNP和PCT是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论ICU脓毒血症患者分离的病原菌种类多,耐药性高,导致患者死亡的因素较多,临床应加强这些危险因素的监测管理,早期制定有效的抗感染治疗方案。

两种特异抗体检测与B超诊断在包虫病流行病学调查中的应用

目的应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和滴金免疫渗滤法(DIGFA)检测人群包虫病流行情况,评价两种抗包虫特异抗体检测结果与B超诊断的一致性,探讨二者在包虫病流调中的应用。方法用粗纯化的人源型细粒棘球蚴囊液抗原(CE抗原)和鼠源型的泡球蚴组织抗原(AE抗原)做常规ELISA,检测-80℃存放8年的1999份滤纸血的包虫病特异性抗体,其结果与流调现场应用的DIGFA法检测结果进行比较,并将两种方法的血清学检查结果分别与现场B超诊断比较。用Kappa一致性检验,确定检查结果的一致性。结果用ELISA法检测-80℃存放8年的血清结果和现场用DIGFA法检测包虫阳性率分别为6.70%(134/1999)、7.15%(143/1999);以≥60岁组为最高(24.44%和17.78%);各年龄组间差异有统计学意义(P均<0.01)。女性感染率(7.96%和9.45%)高于男性(5.58%和5.11%),性别间差异有统计学意义(P均<0.05)。包虫病诊断中ELISA法检测结果敏感性与特异性均高于DIGFA法,与B超诊断结果一致良好(Kappa=0.41);反之亦然,DIGFA检测结果与B超诊断结果不完全一致(Kappa=0.26)。结论包虫病感染率与年龄和性别有关。DIGFA方法操作简单,检查用时短,所需设备简单,适合于流动性现场调查用;而ELISA法用时较长,检查要求有相当的实验室设备和一定培训技能的人员进行操作,用于现场流调有一定困难,但特异性和敏感性相对比前者高,尤其是用较为新鲜的血样标本更为理想。

重组猪IL-2对口蹄疫重组腺病毒免疫增强效果的研究

目的构建表达猪白细胞介素-2(poIL-2)的重组腺病毒,研究其作为佐剂对口蹄疫重组腺病毒免疫效果的影响。方法将poIL-2基因克隆到腺病毒的穿梭载体中,与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态细胞,获得的重组病毒质粒通过脂质体转染HEK-293A细胞,获得表达poIL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)。以rAd5poIL-2作为佐剂与表达PMDV VP基因的重组腺病毒(rAd5VP1)联合免疫小鼠,以单独免疫rAd5VP1的小鼠作为对照。通过测定淋巴细胞增殖指数、特异性抗体、IL-4和IFN-γ的水平来衡量rAd5poIL-2对rAd5VP1的免疫增强效果。结果经PCR鉴定,成功构建了rAd5poIL-2。MTT与抗体检测结果显示,rAd5poIL-2既能增强rAd5VP1诱导小鼠淋巴细胞增殖,又能促进rAd5VP1诱导小鼠特异性抗体的产生,细胞因子检测结果显示,rAd5poIL-2能促进rAd5VP1诱导Th1和Th2的分化。结论 rAd5poIL-2可望成为口蹄疫疫苗的候选佐剂。

嗜肺军团菌重组MOMP蛋白间接ELISA方法的建立及其在血清学诊断中的应用

目的表达及纯化出嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)作为诊断抗原,研究其在嗜肺军团菌感染血清学诊断中的实用价值。方法将已成功构建的重组质粒pET-momp转化到大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中,诱导重组MOMP表达,运用SDS-PAGE和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG、IgM、IgA的ELISA试剂盒筛选出58份阳性血清和32份阴性血清,用纯化的MOMP蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA,同时与R&D公司军团菌的IgG、IgM、IgA ELISA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后用受试者工作特征(ROC)曲线对这2种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及检测结果的一致性,来评价重组MOMP间接ELISA的应用价值。结果成功诱导表达并纯化出相对分子质量(M r)大约为45 000的重组MOMP蛋白。重组MOMP建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与R&D公司的ELISA试剂盒进行比较,IgG抗体灵敏度90.9%,特异度91.7%,一致性Kappa值0.784(P<0.05),ROC曲线下的面积0.913;IgM抗体灵敏度91.4%,特异度90.6%,一致性Kappa值0.809(P<0.05),ROC曲线下的面积为0.910;IgA抗体灵敏度92.1%,特异度88.9%,一致性Kappa值0.793(P<0.05),ROC曲线下的面积0.905。结论成功诱导表达及纯化出重组MOMP蛋白,将其作为诊断抗原所建立的间接ELISA表现出了较好的特异性,灵敏度和一致性,为军团病的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础。

共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究

构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3同源重组。重组腺病毒质粒转染HEK-293A细胞,得到重组腺病毒rAd5VP1-2A-Po IL-2。MTT法检测重组IL-2的生物活性。用rAd5VP1-2A-poIL-2免疫接种小鼠,同时设免疫单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1和空腺病毒的对照组。通过检测淋巴细胞增殖功能,特异性抗体分泌,IL-4和IFN-γ的表达水平衡量rAd5VP1-2A-poIL-2对小鼠特异性免疫应答的影响。结果显示,成功获得了rAd5VP1-2A-poIL-2,MTT法检测重组IL-2具有生物学活性。小鼠免疫试验结果显示,与rAd5VP1免疫组相比,rAd5VP1-2ApoIL-2免疫既能增强重组病毒诱导小鼠淋巴细胞增殖的能力,又能提高重组病毒诱导小鼠特异性抗体的水平。细胞因子检测结果显示,串联IL-2能促进重组病毒诱导Th1和Th2的分化。研究结果说明,rAd5VP1-2A-poIL-2可望成为口蹄疫的候选疫苗。

槐定碱抑制脂多糖诱导巨噬细胞系NF-κB表达

目的观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组及槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS 100μg/L孵育1 h,弃去LPS后加入槐定碱15.63 mg/L,作用5、30、60和120 min,分别获取细胞与培养液。RT-PCR与Western blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P<0.01),IκBαmRNA低于同时间点对照组(P<0.01或P<0.05);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P<0.01或P<0.05),而IκBαmRNA则显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF-α分泌是其抗内毒素作用机制之一。

共表达口蹄疫病毒VP1-2A与猪IFN-α的重组腺病毒增强小鼠免疫功能

目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒感染HEK293A细胞,获得重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。用rAd5VP1-2ApoIFN-α免疫BALB/c小鼠,同时设注射单独表达FMDV VP1的重组腺病毒(rAd5VP1)和空腺病毒的对照组。通过ELISA检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平;MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果成功构建了共表达FMDV VP-2A和IFN-α的重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。小鼠免疫实验结果显示,与单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1相比,重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能增强特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,促进IL-4和IFN-γ的分泌,并能增强小鼠淋巴细胞增殖功能。结论重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能明显增强小鼠特异性免疫应答。

表达口蹄疫病毒VP1的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响

目的检测表达FMDV VP1基因的重组腺病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只,将重组腺病毒rAd5VP1以腹膜内接种的方式免疫小鼠,对照组小鼠分别腹膜内接种等量的PBS和口蹄疫病毒灭活疫苗。通过测定IgGI、gG1I、gG2a、淋巴细胞增殖功能I、L-4和IFN-γ的水平来衡量重组病毒的免疫效果。结果重组腺病毒免疫小鼠既能刺激小鼠淋巴细胞增殖又能诱导小鼠特异性抗体的产生,证明重组病毒具有良好的免疫原性。免疫原性略低于灭活疫苗免疫组,但明显高于PBS组。结论重组病毒刺激小鼠淋巴细胞增殖和抗体分泌的能力略低于灭活疫苗,但重组病毒诱导Th1分化的能力强于灭活疫苗。

重组白介素-2增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究

通过研究重组白细胞介素-2(IL-2)对口蹄疫病毒(FMDV)多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为FMDV表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性Balb/c小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪IL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)和串联表达FMDV多表位基因的重组腺病毒(rAd5EGS),第2、3和4组分别注射rAd5EGS、灭活疫苗和PBS,间隔2周免疫1次,共免疫3次。首免后每周采血分离小鼠血清,通过ELISA检测血清中特异性IgG;首免后6周检测血清中抗体亚型IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4和IFN-γ的表达水平,同时分离脾细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果显示,联合免疫rAd5poIL-2和rAd5EGS既能增强rAd5EGS诱导小鼠特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,又能增强其诱导淋巴细胞增殖能力,且免疫效果强于灭活疫苗;细胞因子检测结果显示,联合免疫rAd5poIL-2后能增强rAd5EGS诱导小鼠IL-4和IFN-γ的分泌,且其诱导IL-4和IFN-γ分泌能力也强于灭活疫苗。说明重组IL-2能有效增强FMDV多表位疫苗诱导抗体分泌能力和细胞免疫应答,rAd5poIL-2有望作为FMDV表位疫苗的候选佐剂。

SLC11A1基因多态性与宁夏南部人群肺结核易感性研究

目的 探索SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865等位点多态性与中国宁夏回族自治区南部人群肺结核易感性的关系.方法 于2010年7-11月选取宁夏回族自治区南部的西吉、海原、泾原、彭阳、原州、同心、中卫、隆德等8个地区,并在该地区居住10年以上,且经当地疾病预防控制中心确诊为活动性肺结核的患者作为观察组,共965例.同期选取上述地区的健康人群作为对照组,共897名.收集研究对象基本信息,采集研究对象外周静脉血5 ml,应用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝,-80℃保存,用于提取基因组DNA.利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法对SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865位点进行基因分型,分析3个单核苷酸多态性（SNP）位点与结核易感性的关系.结果 rs17235409位点AA、AG、GG基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.4％（13/950）、23.5％（223/950）、75.1％（714/950）和2.7％ （23/842）、25.1％（211/842）、72.2％（608/842）,两组比较差异无统计学意义（x2=5.12,P=0.077）;rs17235416位点TGTG（-）/（-）、TGTG（＋）/（-）、TGTG（＋）/（＋）基因型在观察组和对照组中的分布频率分别为1.8％（17/939）、22.7％（213/939）、75.5％（709/939）和3.4％（28/824）、23.8％（196/824）、72.8％（600/824）,两组比较差异无统计学意义（x2=4.99,P=0.082）;rs3731865位点CC、GC、GG基因型在观察组和对照组中分布频率分别为2.3％（22/951）、26.1％（248/951）、71.6％（681/951）和2.4％（20/843）、24.9％（210/843）、72.7％（613/843）,两组比较差异无统计学意义（x2 =0.32,P=0.852）.在隐性模型中,rs17235409位点AA、AG＋ GG-基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.4％（13/950）、98.6％（937/950）和2.7％（23/842）、97.3％（819/842）,两组分布频率比较差异有统计学意义（x2=4.21,P=0.040）;但多因素logistic回归分析结果与单因素结果不-致,说明条件因素包括性别、年龄、民族等不同对结果有一定影响,所以不能说明rs17235409位点与肺结核发病相关（OR=0.51,95％CI=0.25～1.03,P=0.060）.rs17235416位点TGTG（-）/（-）、TGTG（＋）/（-）＋TGTG（＋）/（＋）基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.8％（17/939）、98.2％（922/939）和3.4％（28/824）、96.6％（796/824）,两组分布频率比较差异有统计学意义（x2 =4.45,P=0.038,OR=0.52、1.91,95％CI=0.23～0.97、1.04～3.51）;经多因素logistic回归分析,排除性别、年龄和民族等条件因素对结果的影响,多因素结果与单因素结果相似,发现条件因素对结果无影响,结果仍有意义,说明携带rs17235416位点TGTG（＋）/（-）和（或）TGTG（＋）/（＋）基因型的个体较携带TGTG（-）/（-）基因型的个体患肺结核的风险增加（OR=0.54,95％CI：0.29～1.00,P=0.049）.结论 SLC11A1基因rs17235409和rs3731865位点多态性与宁夏南部地区人群肺结核易感性不相关.而rs17235416位点在隐性模型中,即携带TGTG（＋）/（-）与TGTG（＋）/（＋）基因型的个体发病风险增高.

嗜肺军团菌momp基因疫苗的制备及其免疫原性研究

目的构建真核重组质粒GFP-momp作为核酸疫苗,已构建的原核重组质粒pET-momp表达的蛋白作为蛋白疫苗,二者联合免疫BALB/c雌性小鼠,观察其免疫原性。方法 (1)以嗜肺军团菌DNA作为模板,扩增得到momp基因,并克隆至pEGFP-C1载体获得重组质粒GFP-momp。鉴定正确后,将其转染到NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察GFP-momp的表达。(2)选取BALB/c雌性小鼠60只,平均分为4组,即磷酸盐缓冲液(PBS)组(A组)、空质粒pEGFP-C1组(B组)、DNA疫苗组(C组)、联合疫苗组(D组)。以重组质粒GFP-momp作为DNA疫苗,重组质粒GFP-momp和MOMP蛋白作为联合疫苗,第1天A组肌肉注射PBS 50μL,B组注射pEGFP-C1 50μg,C、D组各注射GFP-momp50μg;第14天各组以相同剂量追加免疫1次;第21天A、B、C组用相同剂量再追加免疫1次,D组注射10μg纯化的MOMP蛋白。借助对各试验组小鼠的抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性等指标的动态检测,来评价DNA疫苗与蛋白疫苗的免疫原性。结果扩增出831bp的momp基因,构建重组质粒GFP-momp,转染入NIH3T3细胞并在细胞内表达出绿色荧光蛋白。在淋巴细胞增殖试验中:A组和B组比较差异无统计学意义(P>0.05);C组和D组淋巴细胞增殖活性均高于B组,差异有统计学意义(P<0.05);C组高于D组,差异有统计学意义(P<0.05)。间接ELISA测定血清中抗原特异性抗体水平结果显示,A、B两组比较差异无统计学意义(P>0.05);C、D两组均高于B组,差异有统计学意义(P<0.05);D组抗体滴度高于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。CTL杀伤活性试验结果显示,A、B两组比较差异无统计学意义(P>0.05);C、D两组均高于B组,差异有统计学意义(P<0.05);D组杀伤活性高于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建momp基因的真核表达载体并在NIH3T3细胞中得到表达,并进一步得出嗜肺军团菌momp基因诱导产生的DNA疫苗和DNA-蛋白疫苗均能产生细胞免疫和体液免疫,具有免疫原性。

基于“两微”支持的线上线下混合式教学模式的创新实践与评价——以“人体寄生虫学”为例

目的是以微课为主素材,以微信群及宁夏医科大学在线平台为载体,探索线上线下混合式教学模式应用于"人体寄生虫学"教学效果。方法是以2016级卓越医师计划1、2班为实验组,采用线上线下混合式教学法,以2016级临床本科1、2班为对照组,采用传统课堂教学法。结果是通过对实验组和对照组共同参与的期中测试成绩、实验课考核成绩及期末测试成绩进行比较分析发现,实验组的3项成绩显著高于对照组(P<0.01)。结论是这种混合式教学模式及过程性考核方式能够极大激发学生的学习兴趣及自主学习能力,进而显著提升学习成绩。

非常时期“人体寄生虫学”线上实验教学模式探索

构建一种基于国家启动重大突发性公共卫生事件一级响应、在确保停课不停学、停课不降教学质量的特殊时期的“人体寄生虫学”线上实验教学模式及过程性考核方式,以备在非常时期线上实验教学所用。方法是以本课程组自制的微视频为主素材,以班级微信群、宁夏医科大学在线教学平台及钉钉直播教学平台为载体,同时构建课前、课堂及课后过程性考核方式;以本校2019级护理本科1、2班为实验组,采用线上实验教学法;以本校2019级护理本科3、4班为对照组,采用常规实验室教学法。结果是对实验组和对照组共同参与的实验报告成绩、标本辨识成绩进行比较分析,结果显示实验组的实验报告成绩低于对照组(P>0.05),而标本辨识成绩高于对照组(P<0.05)。结论是这种线上实验教学模式及过程性考核方式适宜于非常时期“人体寄生虫学”线上实验教学,对其他实验性学科具有一定的示范作用。

重组干扰素-α增强口蹄疫重组疫苗免疫效果的研究

目的观察重组干扰素-a(IFN-α)佐剂对口蹄疫(FMD)重组疫苗免疫效果的增强作用,为IFN-α作为疫苗佐剂应用提供实验依据。方法 6周龄雌性BALB/c小鼠,分为3组,实验组联合免疫表达猪IFN-α的重组腺病毒(r Ad5po IFN-α)和串联表达FMDV多表位的重组腺病毒(r Ad5EGS),同时设两组对照组,分别注射r Ad5EGS和PBS,间隔两周免疫1次,共免疫3次。首免后每周分离血清,并通过ELISA检测血清中抗FMDV VP1特异性Ig G;首免后6周检测血清中Ig G1、Ig G2a抗体亚型及细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平;同时分离脾细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果与单独免疫r Ad5EGS和注射PBS的对照组相比,联合免疫r Ad5po IFN-α和r Ad5EGS能明显增强特异性Ig G的分泌和小鼠淋巴细胞增殖功能,并能增强抗体亚型Ig G2a和细胞因子IFN-γ的分泌,但对抗体亚型Ig G1和IL-4的分泌没有明显的增强作用。结论重组腺病毒r Ad5po IFN-α能有效增强FMD重组疫苗诱导的Th1型细胞免疫,有望作为FMD重组疫苗的候选佐剂。

基于人体寄生虫实物的3D-数字化标本库的构建及其在“人体寄生虫学”混合式实验教学中的应用

目的构建基于人体寄生虫实物3D-数字化标本库,并探索其在“人体寄生虫学”实验教学中的应用效果。方法以我校人体寄生虫教研室的大体标本和玻片标本为主素材,依托上海梦之路公司制作成3D数字化标本,并配有各自的二维码;以本校2020级护理本科1班为实验组,采用线上线下混合式实验教学法;以本校2020级护理本科2班为对照组,采用常规实验室教学法。结果对实验组和对照组共同参与的实验报告成绩、标本辨认成绩进行比较分析,实验组的实验报告成绩及标本辨认成绩高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论这种基于实物的3D-数字化标本辅助线上线下实验教学促进了医学生对人体寄生虫学的学习,值得推广应用。

胸腺五肽对重症肺炎患者炎症指标、免疫球蛋白水平及疗效的影响

目的观察胸腺五肽对重症肺炎患者炎症指标、免疫球蛋白水平及疗效的影响,为胸腺五肽的应用提供临床资料。方法将80例临床诊断重症肺炎患者随机分为对照组和观察组各40例。对照组给予常规抗感染对症治疗,观察组在常规抗感染对症治疗基础上加用胸腺五肽治疗(10mg·d-1,静脉注射,连续10d),检测两组患者治疗前、治疗5d和10d后外周血白细胞(white blood cell,WBC)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、IgA、IgM、IgG的变化,并比较两组患者退热时间、住院时间及住院总费用的差异。结果两组患者治疗前各指标差异均无统计学意义(P>0.05);治疗5d后,与对照组比较,观察组CRP降低(P<0.05),IgG增高(P<0.05),但两组间WBC、PCT及IgA、IgM差异均无统计学意义(P均>0.05);治疗10d后,观察组WBC、CRP、PCT均低于对照组(P低<0.05),IgA、IgM、IgG均高于对照组(P<0.05或<0.01);观察组患者退热时间、住院时间及住院总费用均明显少于对照组(P<0.05)。结论胸腺五肽可明显改善重症肺炎患者症状,其机制与调节患者免疫功能有关。

嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用

目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG/IgM/IgA的ELISA检测试剂盒筛出40份阳性血清和30份阴性血清,用纯化的MIP蛋白建立间接ELISA,同时与R&D的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后对这两种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性,来评价该方法的应用价值。结果诱导相对分子质量(Mr)大约40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表达并纯化。纯化蛋白建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与国外ELISA试剂盒(R&D)进行比较,IgG抗体的灵敏度88.5%,特异度95.5%,一致性Kappa值0.846(P<0.05),ROC曲线下面积0.927。IgM抗体的灵敏度89.3%,特异度97.6%,一致性Kappa值0.88(P<0.05),ROC曲线下面积0.947。IgA抗体的灵敏度90%,特异度95.2%,一致性Kappa值0.856(P<0.05),ROC曲线下面积0.931。结论成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化,运用MIP作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值。