医学微生物学课程创新的探索与实践

介绍了“医学微生物学”课程顺应我国高等教育教学的发展要求,针对课程教学中的痛点问题,课程组创设了“道术、仁术”的生态和氛围深入推进课程思政,继而契合新医科理念行交叉学科知识更新融合,科研反哺教学,基础密接临床,锤炼学生“学术、技术”。通过重置教学内容,线上线下混合式教学,运用数字信息化技术,紧扣“三态四环”培养服务适应地方经济建设和社会需要的“下得去、留得住、用得上”的医学人才。实践证实,“道术、仁术”价值塑造驱动了学生“学术、技术”的有效提升,本课程也被认定为首批国家级课程思政示范课程、教学名师和教学团队。

新冠肺炎期间高职学生病原生物学与免疫学课程网络教学探讨

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情暴发席卷全球。疫情期间,中国教育部发起“停课不停教、停课不停学”的倡议,统筹国家、地方和学校相关教学资源,提供线上课程,帮助超过23亿人次大、中、小学生在家远程学习。疫情之下的医学教育方式备受关注。宁夏医科大学各学院、各学系利用前期该校已经构建的在线学习平台结合钉钉直播、会议连线及微信互动、网络答疑等教学联合策略,保证进度、保证质量地顺利完成了2020年春季各门课程的教授。该文就疫情防控期间,应用上述教学方法对该校高职护理和药学三年制学生进行病原生物学与免疫学课程线上教学的经验进行总结,并提出了相应的改进措施。

青年教师留学生医学免疫学实验教学的体会

通过探讨教学内容设计、教学手段运用、学生需求、作业完成反馈、课后交流等方面,青年教师结合自身留学生医学免疫学实验教学实践,分析并总结几点思考与体会,为进一步提高留学生医学免疫学实验课的教学水平积累经验。

问卷星在留学生医学免疫学教学中的应用实践

医学免疫学是一门重要的医学基础课程和桥梁课程,因内容抽象且免疫机制复杂,加之全英文授课,为留学生医学免疫学(medical immunology)教学带来了一定的挑战。为此,文章结合快速发展的现代教育教学技术与手段,采用问卷星建立医学免疫学全英文单元测试题库和课程学习前、中、后期问卷调查评估表,在宁夏医科大学留学生医学免疫学近两年的理论课程中开展教学实践,总结与评价问卷星实际教学效果,旨在为采用问卷星提升留学生医学免疫学课程教学效果提供经验与借鉴。

医学免疫学线上线下混合式教学的探索与实践

现代网络信息技术的飞速发展,为医学教育提供了丰富的资源和学习模式。而传统的课堂教学在医学教育中有着悠久的历史和重要地位。在线学习与课堂教学的有机结合,优势互补,形成了线上线下混合式教学模式,有利于提高教学效果。本文结合自身工作实践,探索线上线下混合式教学模式在医学免疫学教学中的应用,以期为医学免疫学教学改革提供借鉴。

细粒棘球蚴95抗原在真核昆虫表达系统中表达、纯化及免疫原性初步分析

目的采用真核昆虫表达系统表达细粒棘球蚴95(Eg95)抗原,探讨其免疫原性。方法从GeneBank获取Eg95基因序列(序列编号:EU595937.1),合成开放读码框(CDS)全长基因;利用杆状病毒表达系统Bac-to-Bac symtem在昆虫细胞中表达目的基因Eg95,亲和层析纯化,Western blot鉴定;对Balb/c小鼠分别免疫接种重组昆虫表达目的蛋白Eg95(简称eu rEg95)、原核重组表达Eg95(简称pro rEg95)、阴性对照PBS,制备免疫血清,间接法ELISA对各组特异性IgG抗体进行分析。结果合成Eg95基因CDS全长471 bp,经测序与理论完全一致;Western blot证实目的蛋白通过重组杆状病毒在昆虫细胞内实现可溶性表达;ELISA结果表明:eu rEg95能够诱导产生原头蚴特异性IgG抗体,抗体水平高于pro rEg95组(P<0.05)。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达出具有良好免疫原性的Eg95抗原,为优化细粒棘球蚴疫苗奠定基础。

GSDMB和ZPBP2基因单核苷酸多态性与宁夏汉族人群系统性红斑狼疮的相关性研究

目的分析GSDMB基因rs7216389位点及ZPBP2基因rs11557467、rs12936231位点单核苷酸多态性与宁夏汉族系统性红斑狼疮(SLE)发生的相关性。方法采用病例-对照关联研究,利用Taqman基因分型系统检测144例SLE患者和322例正常对照者的3个SNP位点,分析组间基因型及等位基因频率的分布差异。结果 2组3个SNP位点基因型频率差异无统计学意义(P>0.05);患者组rs11557467 T、rs12936231 G、rs7216389C等位基因频率均小于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 GSDMB基因rs7216389位点及ZPBP2基因rs11557467、rs12936231位点单核苷酸多态性与宁夏汉族人群SLE发生无相关性。

执业医师考试融入《医学微生物学》实验教学的初步研究

执业医师分阶段考试要求医学生具备应用基础医学知识解决临床综合问题的能力,而传统的《医学微生物学》实验教学方法已不能满足其要求。为使学生尽早应对执业医师考试,依据《医学微生物学》实验教学特点,有计划地将本课程教学大纲和内容与执业医师考试有机结合,并综合应用多种教学方法和课程形成性评价,有效提升了课堂教学效果,激发了学生的课堂学习兴趣,切实加强了对学生早期临床思维能力和创新能力的培养。

十二指肠乳头旁憩室与胆胰疾病的关系

目的探讨十二指肠乳头旁憩室(PAD)与胆胰疾病的关系。方法收集行内镜逆行胰胆管造影(ERCP)检查患者884例,分为PAD组(185例)和非PAD组(699例),对比分析PAD与胆胰疾病的关系。结果PAD患病率为20.93%(185/884),不同年龄组PAD患病率差异有统计学意义(P=0.000)。PAD患者合并胆道结石、胆囊结石合并胆总管结石、原发性胆总管结石、胆囊切除术后胆总管结石、胆总管探查术后复发性胆总管结石、ERCP术后复发性胆总管结石以及急性胰腺炎患病率高于非PAD患者(P<0.05)。憩室直径、位置不同,PAD合并胆道结石患病率亦不同(P<0.05)。结论 PAD发生与年龄相关,可能是胆道结石及胰腺炎发生的因素之一。

SLC11A1基因多态性与宁夏南部人群肺结核易感性研究

目的 探索SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865等位点多态性与中国宁夏回族自治区南部人群肺结核易感性的关系.方法 于2010年7-11月选取宁夏回族自治区南部的西吉、海原、泾原、彭阳、原州、同心、中卫、隆德等8个地区,并在该地区居住10年以上,且经当地疾病预防控制中心确诊为活动性肺结核的患者作为观察组,共965例.同期选取上述地区的健康人群作为对照组,共897名.收集研究对象基本信息,采集研究对象外周静脉血5 ml,应用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝,-80℃保存,用于提取基因组DNA.利用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法对SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865位点进行基因分型,分析3个单核苷酸多态性（SNP）位点与结核易感性的关系.结果 rs17235409位点AA、AG、GG基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.4％（13/950）、23.5％（223/950）、75.1％（714/950）和2.7％ （23/842）、25.1％（211/842）、72.2％（608/842）,两组比较差异无统计学意义（x2=5.12,P=0.077）;rs17235416位点TGTG（-）/（-）、TGTG（＋）/（-）、TGTG（＋）/（＋）基因型在观察组和对照组中的分布频率分别为1.8％（17/939）、22.7％（213/939）、75.5％（709/939）和3.4％（28/824）、23.8％（196/824）、72.8％（600/824）,两组比较差异无统计学意义（x2=4.99,P=0.082）;rs3731865位点CC、GC、GG基因型在观察组和对照组中分布频率分别为2.3％（22/951）、26.1％（248/951）、71.6％（681/951）和2.4％（20/843）、24.9％（210/843）、72.7％（613/843）,两组比较差异无统计学意义（x2 =0.32,P=0.852）.在隐性模型中,rs17235409位点AA、AG＋ GG-基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.4％（13/950）、98.6％（937/950）和2.7％（23/842）、97.3％（819/842）,两组分布频率比较差异有统计学意义（x2=4.21,P=0.040）;但多因素logistic回归分析结果与单因素结果不-致,说明条件因素包括性别、年龄、民族等不同对结果有一定影响,所以不能说明rs17235409位点与肺结核发病相关（OR=0.51,95％CI=0.25～1.03,P=0.060）.rs17235416位点TGTG（-）/（-）、TGTG（＋）/（-）＋TGTG（＋）/（＋）基因型在观察组和对照组中分布频率分别为1.8％（17/939）、98.2％（922/939）和3.4％（28/824）、96.6％（796/824）,两组分布频率比较差异有统计学意义（x2 =4.45,P=0.038,OR=0.52、1.91,95％CI=0.23～0.97、1.04～3.51）;经多因素logistic回归分析,排除性别、年龄和民族等条件因素对结果的影响,多因素结果与单因素结果相似,发现条件因素对结果无影响,结果仍有意义,说明携带rs17235416位点TGTG（＋）/（-）和（或）TGTG（＋）/（＋）基因型的个体较携带TGTG（-）/（-）基因型的个体患肺结核的风险增加（OR=0.54,95％CI：0.29～1.00,P=0.049）.结论 SLC11A1基因rs17235409和rs3731865位点多态性与宁夏南部地区人群肺结核易感性不相关.而rs17235416位点在隐性模型中,即携带TGTG（＋）/（-）与TGTG（＋）/（＋）基因型的个体发病风险增高.

X射线对胃癌细胞和人脐静脉内皮细胞LOX家族成员的不同影响

目的比较不同剂量X射线对人低分化粘液样胃腺癌细胞MGC-803和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)赖氨酰氧化酶(LOX)家族成员的影响,为了解X射线辐射后不同细胞中基因和蛋白的改变提供依据。方法0、2、4、6、8和10 Gy剂量X射线辐射MGC-803和HUVEC细胞,用细胞增殖实验检测细胞致死率并计算细胞半数致死量(LD 50),确定后序测试剂量组;Realtime PCR、Western blot、ELISA及Amplex Red过氧化氢法分别检测辐射后细胞LOX家族成员mRNA丰度、蛋白相对量、分泌量及LOX酶活性变化;Western blot方法分析X射线辐射对细胞p-p38MAPK和p-Erk1/2MAPK影响。结果X射线辐射后的LD 50胃癌MGC-803为8.2 Gy,HUVEC为6 Gy,后序试验选用0、2、4和6 Gy剂量组。MGC-803细胞经各剂量X射线辐射后LOXL1、LOXL2和LOXL4的mRNA均下调,而LOX的mRNA上调(P<0.05);2 Gy组LOX和LOXL4的蛋白和酶分泌水平低于0 Gy组(P<0.05);4 Gy组LOX、LOXL1、LOXL2和LOXL4的蛋白和分泌低于0 Gy组(P<0.05);6 Gy组LOXL1的蛋白和分泌低于0 Gy组(P<0.05);但LOXL3的mRNA、蛋白和分泌在2 Gy组均高于0 Gy组(P<0.05)。HUVEC中,2 Gy组LOXL1和LOXL3的mRNA、蛋白和酶分泌水平均显著高于0 Gy组(P<0.05);4 Gy组LOX、LOXL1、LOXL3和LOXL4的mRNA、蛋白和酶分泌水平均较0 Gy组升高(P<0.05);6 Gy组LOXL2和LOXL4的mRNA、蛋白和酶分泌水平均较0 Gy组升高(P<0.05)。2 Gy和6 Gy组HUVEC的LOX酶活性增强(P<0.05)。MGC-803细胞的2 Gy和6 Gy组p-p38、p-p42、p-p44较0 Gy组上调(P<0.05);HUVEC经各剂量辐射p-p38、p-p42和p-p44均上调(P<0.05)。结论X射线辐射对两种细胞作用不同,一定剂量X射线辐射上调HUVEC的LOX及其家族成员的产生、分泌和酶活性,下调胃癌细胞MGC-803的除LOXL3外其他成员的产生和分泌。

抗分枝杆菌海洋微生物的分离与鉴定

目的从海洋微生物中发现具有抗分枝杆菌活性的细菌,并对其进行鉴定。方法从印度洋热带地区的海底沉积物中分离海洋微生物。通过纸片法活性测定,发现了一株具有抗耻垢分枝杆菌活性的细菌。光学显微下观察细菌形态和菌落。测定细菌的理化特性,提取其基因组,荧光法测定基因组的T_(m)值,扩增其16S rDNA并进行测序。将序列提交NCBI和EzTaxon网站进行搜索比对,使用MEGA 7.0软件构建系统进化树。结果分离得到的菌株IMBGY10-46的发酵产物具有抗耻垢分枝杆菌活性;其与Pseudomonas sabulinigriJ64的16S rDNA相似性最高,但菌体形态和基因组的Tm值相差较大,并且过氧化氢酶试验呈阴性。将该菌株命名为假单胞菌属新菌株。该细菌的16S rDNA序列提交GenBank,收录号为JQ362457。结论从海底沉积物中获得了具有抗耻垢分枝杆菌作用的海洋微生物新菌株。

嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用

目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG/IgM/IgA的ELISA检测试剂盒筛出40份阳性血清和30份阴性血清,用纯化的MIP蛋白建立间接ELISA,同时与R&D的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后对这两种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性,来评价该方法的应用价值。结果诱导相对分子质量(Mr)大约40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表达并纯化。纯化蛋白建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与国外ELISA试剂盒(R&D)进行比较,IgG抗体的灵敏度88.5%,特异度95.5%,一致性Kappa值0.846(P<0.05),ROC曲线下面积0.927。IgM抗体的灵敏度89.3%,特异度97.6%,一致性Kappa值0.88(P<0.05),ROC曲线下面积0.947。IgA抗体的灵敏度90%,特异度95.2%,一致性Kappa值0.856(P<0.05),ROC曲线下面积0.931。结论成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化,运用MIP作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值。

黄芩苷调节let-7i-3p/PI3K/Akt/NF-κB信号轴减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞NLRP3炎性小体活化

目的研究黄芩苷减轻类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human fibroblast like synoviocytes of rheumatoid arthritis,HFLS-RA)NLRP3炎性小体活化的作用及机制。方法为证实黄芩苷减轻HFLS-RA中NLRP3炎性小体活化,采用免疫荧光观察黄芩苷处理前后NLRP3的表达;Western blot检测黄芩苷处理48 h后,p-PI3K、p-Akt、NF-κB p65、NLRP3、ASC及caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞上清中IL-1及IL-18的含量。为探究黄芩苷减轻NLRP3炎性小体活化的机制,采用双荧光素酶及Western blot验证let-7i-3p与PIK3CA的对应关系;RT-qPCR检测黄芩苷干预前后let-7i-3p及PI3K的表达;采用let-7i-3p干扰,验证黄芩苷是否减轻了增强的NLRP3炎性小体的活化。结果50、100 mg·L^(-1)黄芩苷明显减轻了NLRP3炎性小体的活化,抑制p-PI3K、p-Akt、NF-κB p65、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白的表达,抑制IL-1、IL-18的分泌。let-7i-3p与PIK3CA存在靶向对应关系,黄芩苷上调了let-7i-3p的表达、下调了PIK3CA的表达;黄芩苷减轻了因let-7i-3p干扰而增强的NLRP3炎性小体的活化。结论黄芩苷经上调let-7i-3p表达、抑制PI3K/Akt/NF-κB信号转导,从而减轻NLRP3炎性小体的活化。

类风湿关节炎和骨关节炎滑膜滑液中MMP-2和MMP-9的比较

目的检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)在类风湿关节炎活动期(rheumatoid arthritis,RA)和骨关节炎(osteoarthritis,OA)活动期膝关节滑液及滑膜中的含量,并探讨两者在RA和OA病变中的作用。方法收集宁夏医科大学总医院风湿免疫科和骨科确诊的14例RA活动期患者和24例OA活动期患者的膝关节滑液和滑膜组织,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测滑液中MMP-2和MMP-9的含量,用免疫组化法检测滑膜组织中MMP-9的相对表达量,组间比较采用秩和检验。结果 RA活动期患者膝关节滑液中的MMP-2和MMP-9浓度明显高于骨关节炎活动期患者(P<0.01);RA活动期患者膝关节滑膜中MMP-9的相对表达量明显高于OA活动期患者(P<0.01)。结论 MMP-2和MMP-9在RA活动期患者滑液中高表达,MMP-9在RA活动期患者滑膜中高表达,可能参与RA发生发展过程中滑膜炎、骨质破坏。

槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞CD14、P38、iNOS表达的影响

目的探讨槐定碱不同给药方式对内毒素诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞表达CD14、p38 MAPK及i NOS的影响及意义。方法采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型;实验细胞分为4组(n=6):空白对照组、LPS组、槐定碱预处理组、槐定碱预混合组;分别利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞CD14、p38、i NOS m RNA表达量及蛋白表达量。结果槐定碱2种给药方式(预处理及预混合)均可显著下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p38、i NOS m RNA及CD14、p-p38、i NOS蛋白表达;槐定碱与LPS预混合可下调LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞CD14 m RNA表达,而槐定碱预处理对CD14 m RNA表达无明显影响。结论槐定碱可能通过调控CD14、p38、i NOS表达与活化发挥抗内毒素效应。

三伏天穴位敷贴疗法对变应性鼻炎患者血清IgE、IL-4、IFN-γ的影响

目的观察三伏天穴位敷贴疗法对变应性鼻炎患者血清IgE及IL-4、IFN-γ的影响,为经腧穴处皮肤给药刺激经络系统达到调节免疫,治疗变应性疾病提供依据。方法在农历三伏天对变应性鼻炎患者进行穴位敷贴治疗,采用放射免疫法检测变应性鼻炎患者治疗前后及健康体检者血清IgE、IL-4和IFN-γ。结果治疗前变应性鼻炎患者血清总IgE及IL-4水平明显高于健康体检者(P<0.01),血清IFN-γ与健康体检者相比差异无统计学意义(P>0.05)。经1个疗程穴位敷贴治疗后,患者血清总IgE较治疗前明显降低(P<0.05),但IL-4和IFN-γ无明显变化(P>0.05)。结论穴位敷贴疗法治疗变应性鼻炎可降低血清IgE水平。

抑制赖氨酰氧化酶可抑制胃癌细胞体外迁移和异质黏附

目的用不同浓度的β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)后,观察两株胃癌细胞MGC-803和BGC-823的迁移、黏附能力变化,以探讨LOX对胃癌发生发展的影响。方法分别培养两株胃癌细胞MGC-803和BGC-823,用Real-Time PCR法检测两株胃癌细胞中LOX的m RNA;在用BAPN抑制LOX后,通过体外划痕实验和Transwell小室迁徙实验比较两株胃癌细胞的迁徙能力的变化,以同质黏附实验和异质黏附实验比较其黏附能力的变化。结果两株胃癌细胞中均有LOX的表达;加入0.2和0.3m M BAPN均可抑制胃癌细胞MGC-803和BGC-823的体外迁移能力,增强其同质黏附能力,减弱其异质黏附能力。结论 LOX可能通过增强胃癌细胞的迁移能力,减弱同质黏附、增强异质黏附能力来促进胃癌的转移。

基质金属蛋白酶2促进胃癌侵袭和浸润

目的比较基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases2,MMP2)在不同浸润深度胃癌组织中的表达和活性,探讨MMP2与胃癌浸润的关系。方法收集手术切除新鲜胃癌组织46例,其中T1、T2期20例,T3、T4期26例。提取组织总RNA,用RT-PCR方法检测组织中MMP2 m RNA;Western blot方法检测MMP2蛋白;明胶酶谱法检测MMP2酶活性。结果 T3、T4期胃癌组织中MMP2 m RNA相对量为(0.78±0.21),高于T1、T2期(0.54±0.19)(P<0.05);MMP2蛋白相对表达量在T3、T4期胃癌组织中为(0.70±0.14),高于TI、T2期(0.59±0.19)(P<0.05);MMP2酶活性在T3、T4期胃癌组织中也高于T1、T2期(1.44±0.46 vs 1.12±0.53)(P<0.05)。结论胃癌T3、T4期MMP2的m RNA、蛋白表达及酶活性均高于T1、T2期,提示MMP2可能参与胃癌侵袭和浸润。

胃癌细胞株BGC-823中miR-138-5p负性调控Sirt1基因的表达

目的在胃癌细胞中筛选并鉴定靶向Sirt1基因的micorRNA。方法生物信息学软件预测特异性靶向Sirt1基因3’端非编码区域(3′-UTR)的microRNA;分别构建野生型和突变型与目的 microRNA匹配的Sirt1基因3′-UTR序列双荧光素酶报告基因载体;将miR-138-5p过表达质粒分别与野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体共转染入胃癌细胞株BGC-823中,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。miR-138-5p过表达质粒转染BGC-823细胞,荧光定量PCR检测转染细胞miR-138-5p与Sirt1 mRNA的表达,Western blot检测SIRT1蛋白的表达。结果生物信息学软件预测显示miR-138-5p为靶向调控Sirt1的候选micro RNA;成功构建野生型和突变型Sirt1基因3′-UTR双荧光素酶报告基因载体;荧光素酶活性实验表明,miR-138-5p可以下调野生型质粒的荧光素酶活性,不影响突变型质粒的荧光素酶。miR-138-5p过表达质粒转染后的BGC-823细胞中,miR-138-5p表达显著上调,Sirt1基因mRNA和蛋白的表达水平明显下调。结论在胃癌细胞中miR-138-5p靶向作用于Sirt1基因3′-UTR,并负性调控Sirt1基因。