沉默REV7联合奥沙利铂诱导人结肠癌细胞THC 8307凋亡的研究

目的探讨抗肿瘤药物奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)联合沉默REV7基因对人结肠癌细胞THC8307细胞凋亡的影响。方法体外培养人结肠癌细胞株THC8307,将REV7基因的特异性siRNA片段转染THC8307细胞,运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot法检测转染后细胞中REV7 mRNA和蛋白表达;运用MTT方法确定L-OHP对THC8307细胞的半数抑制浓度,实验分为不作任何处理的THC8307组、加药处理的L-OHP组,药物联合REV7 siRNA处理的L-OHP+REV7 siRNA组,采用细胞免疫荧光法检测THC8307细胞Bax、BCL-2的表达定位;采用流式细胞术(FCM)测定各组细胞凋亡率;Western blot法检测各组细胞Bax、BCL-2蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,流式细胞术结果显示L-OHP、L-OHP联合REV7 siRNA组均能促进THC8307细胞凋亡,Western blot结果显示,L-OHP、L-OHP联合REV7 siRNA可明显下调凋亡因子BCL-2、上调Bax的蛋白表达水平、BCL-2/Bax灰度比值显著性下降(P<0.05),同时L-OHP、L-OHP联合REV7 siRNA两组相比较,后者较单独L-OHP组对THC8307细胞促进凋亡作用更加显著(P均<0.05)。结论 L-OHP联合沉默REV7基因可显著性地诱导人结肠癌细胞THC8307凋亡,发挥抗肿瘤作用。