hsa-miR-342-3p 生物信息学分析

通过生物信息学方法预测hsa-miR-342-3p靶基因及其功能机制。检索Pub Med有关hsa-miR-342-3p的研究报道并进行功能分析;检索miRBase获取hsa-miR-342-3p序列;通过Target Scan,Pictar和PITA数据库预测靶基因并取交集,对其进行组织和疾病特异性表达谱分析、功能富集分析(GO enrichment analysis)、信号转导通路富集分析(Pathway enrichment analysis)和蛋白质相互作用网络分析(PPI analysis)。结果发现:hsa-miR-342-3p序列在多物种间具有高度保守性;hsa-miR-342-3p在肾脏组织和急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌疾病中表达水平较高(RPM≥1 000);预测得到14个hsa-miR-342-3p靶基因;靶基因分子功能分别富集于转化生长因子活性、DNA结合和蛋白激酶激活等(P<0.05);hsa-miR-342-3p靶基因GO生物学过程主要集中于大分子代谢抑制,肺部组织发育、呼吸系统发育及管状组织发育建成(P<0.05);细胞信号通路主要富集于TGF-Beta信号通路、细胞因子、受体作用信号通路及前列腺疾病信号通路(P<0.01)。hsa-miR-342-3p在体内分布广泛,预测的靶向TGF-Beta信号通路可能在疾病发生中发挥重要调控作用,是具有潜在研究价值的生物学靶标。

PI-RADS v2.1和PI-RADS v2对移行带前列腺癌诊断价值的研究

目的研究PI-RADS v2.1和PI-RADS v2(第2.1版和第2版前列腺影像报告与数据系统)在移行带前列腺癌(prostate cancer,PCa)和临床显著性前列腺癌(clinically significant prostate cancer,csPCa)诊断中的价值。材料与方法回顾性分析108例[病理证实:PCa 53例、前列腺增生和(或)前列腺炎55例]病变位于移行带的患者的临床与影像资料。两名医师根据PI-RADS v2.1和PI-RADS v2对病灶评分。使用Kappa检验评估2名医师评分结果间的一致性;使用ROC曲线评估PI-RADS v2.1和PI-RADS v2对PCa、csPCa的诊断效能;采用Spearman相关分析对评分结果与Gleason评分的相关性进行分析。结果PI-RADS v2.1的一致性较PI-RADS v2有所提高(Kappa系数全部病变为0.794、0.724,csPCa病变为0.826、0.758,PCa病变为0.734、0.678);PI-RADS v2.1诊断PCa、csPCa的敏感度、准确度和AUC值及PCa的特异度均稍高于PI-RADS v2,P均>0.05;PI-RADS v2.1和PI-RADS v2评分结果均与Gleason评分呈中度正相关(r值分别为0.552和0.507,P均<0.05)。结论PI-RADS v2.1一致性更好,诊断效能不低于PI-RADS v2;PI-RADS评分可以指导穿刺,有助于评估肿瘤的侵袭性。

超高b值DWI对外周带前列腺癌的诊断价值

目的探讨高b值(1000 s/mm^(2))及超高b值(2000 s/mm^(2))的弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)及表观弥散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)对外周带前列腺良恶性病变的诊断效能。材料与方法回顾性分析2015年1月至2016年5月在宁夏医科大学总医院放射科行前列腺常规磁共振检查及超高b值DWI成像的64例患者的临床及影像学资料;两名医师根据前列腺影像报告和数据系统第二版(Prostate Imaging Reporting and Data System Version 2.0,PI-RADS V2)并采用双盲法在T2WI和DWI上用五分制对图像进行评估;采用三维感兴趣区法逐层勾画病灶,并对ADC值行直方图分析。结果 (1)对前列腺癌灶的诊断方面,超高b值(2000 s/mm^(2))获得的DWI图像的敏感度明显高于高b值(1000 s/mm^(2))(P<0.001);(2)直方图参数ADC第10百分位数(ADC_(10))的诊断效能最高,受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积超高b值与高b值分别为0.902 [95%CI (0.802~0.962)]和0.823 [95%CI (0.707~0.907)],但超高b值与高b值ADC值诊断效能的差异无统计学意义(P>0.05)。结论超高b值与高b值所对应的ADC值直方图对外周带前列腺癌的诊断效能相似,而在b值为2000 s/mm^(2)时,DWI图像的敏感度高于1000 s/mm^(2)。因此,超高b值DWI有助于提高对外周带前列腺癌的诊断价值。

雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤对RAW264.7细胞中8种miRNAs表达的影响

目的探究雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理对RAW264.7细胞中miR-181c,miR-101b和miR-1192等8种自噬相关miRNAs的表达水平,为研究miRNAs在细胞自噬中的功能提供理论基础。方法生物信息学预测分析与细胞自噬相关的miRNAs并构建miRNAs调控细胞自噬的网络图;分别用Rapa和3-MA对RAW264.7细胞做不同条件处理,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测不同条件处理后RAW264.7细胞中miR-181b、miR-181c、miR-101b、miR-1192、miR-362-3p、miR-590-3p、miR-875-5p和miR-335-5p的相对表达量。结果生物信息学预测结果显示8种miRNAs可能分别靶向作用于细胞自噬通路中多个关键蛋白,对细胞自噬起到促进或抑制作用;与正常对照组相比,miR-181c、miR-101b、miR-1192、miR-362-3p、miR-335-5p、miR-875-5p在Rapa处理RAW264.7细胞组中表达显著下调(P<0.05),而在3-MA处理组则都显著上调(P<0.05);miR-181b在Rapa组表达显著上调,在3-MA组表达下调(P<0.05);miR-590-3p在Rapa组和3-MA组都无显著性变化(P>0.05)。结论 miR-181c、miR-101b等7种miRNAs可能在RAW264.7巨噬细胞自噬过程中发挥重要调控作用。

基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统建立与应用

目的:构建能够用于稳定动态监测细胞自噬流变化和过表达基因的红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-鼠源LC3融合慢病毒多功能表达载体(PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat,PCDH-Duo),并构建小鼠腹腔巨噬细胞Raw264. 7稳转株观察自噬流变化。方法:应用基于PCR精确合成mRFP-eGFPph-LC3rat融合全基因,将其克隆至慢病毒表达载体PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP中,重组质粒经菌落PCR、酶切及测序分析正确无误后,包装慢病毒,转染Raw264. 7细胞,并利用流式分选术获取稳转株,经氯喹抑制自噬模型及Western blot鉴定eGFP蛋白表达确认其可靠性。结果:成功构建了PCDH-Duo重组慢病毒质粒,包被慢病毒并获得Raw264. 7稳定细胞系(Raw264. 7-PCDHDuo),可稳定表达双荧光蛋白,经3mmol/L氯喹作用6h后,能够稳定准确指示自噬流变化。结论:成功构建了基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统,为研究细胞自噬与编码基因及非编码基因之间的关系提供了方便有力的工具。

集成MRI弛豫时间定量技术在前列腺癌诊断及侵袭性评估中的价值

目的:探讨集成MRI弛豫时间定量技术在前列腺癌诊断及侵袭性评估中的应用价值。方法:回顾性搜集2020年3月至2021年3月宁夏医科大学总医院行前列腺MRI常规序列和磁共振图像编译(MAGiC)序列扫描的前列腺疾病患者119例[共122个感兴趣区(ROI)],依据病理结果分为前列腺癌组(58例,61个ROI)和非前列腺癌组(61例,61个ROI)。前列腺癌组为前列腺癌患者,年龄48~85(69.8±5.9)岁,依据发生部位分为两个亚组:外周带癌组(43例,45个ROI)和中央腺体癌组(15例,16个ROI)。非前列腺癌组为良性前列腺增生或合并慢性前列腺炎患者,年龄41~81(68.6±7.0)岁,依据发生部位分为两个亚组:外周带非癌组(45例,45个ROI)和中央腺体良性前列腺增生组(16例,16个ROI)。前列腺癌病灶分为低危(GS≤6分)和中/高危(GS≥7分)。前列腺癌组和非前列腺癌组 MAGiC图像经过后处理后得到T_(1)、T_(2)、质子密度(PD)值,同时用相关软件进行后处理生成表观扩散系数(ADC)值,并采用独立样本 t检验或Mann-Whitney U检验分析两组间数据的比较,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析各定量参数诊断前列腺癌和鉴别低危、中高危前列腺癌的诊断效能,采用Spearman相关分析评估各定量参数与Gleason评分的相关性。 结果:外周带癌组的T_(1)值和T_(2)值[ M( Q1, Q3)]均低于外周带非癌组[1 201.3(1 103.5,1 298.2)ms比2 274.0(1 620.9,2 776.5)ms;78.0(74.0,83.8)ms比(160.6±54.9)ms](均 P<0.001),两组PD 值差异无统计学意义( P>0.05)。中央腺体癌组的T_(1)值和T_(2)值均低于中央腺体良性前列腺增生组[1 073.3(1 003.9,1 164.9)ms比1 340.8(1 208.5,1 502.8)ms;76.9(74.8,82.8)ms比95.1(82.8,103.4)ms](均 P<0.001),两组PD值差异无统计学意义( P>0.05)。区分外周带癌组与外周带非癌组时,T_(2)值显示出与ADC值相似的曲线下面积(AUC)(0.963比0.991, P=0.105),而区分中央腺体癌组与中央腺体良性前列腺增生组时,T_(2)值、T_(1)值与ADC值的AUC均相似(0.867、0.930 比0.938,两两之间均 P>0.05)。ADC值、T_(2)值均与 Gleason评分呈负相关( r=-0.747、-0.453,均 P<0.001)。T_(2)值和ADC值在区分低危和中高危前列腺癌时的诊断效能相当,差异无统计学意义(AUC:0.787比0.943, P=0.069)。 结论:集成MRI获得的定量T_(1)和T_(2)值能够鉴别前列腺癌和其他良性病变,T_(2)值与ADC值诊断效能相当。集成MRI具有较高的临床应用价值,T_(2)值能够区分低危与中高危前列腺癌。