Rap1A DNA甲基化在Hcy促进巨噬细胞增殖中的作用

目的探讨Rap1A DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)促进小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖中的作用。方法将处于对数生长期的RAW264.7细胞分为对照组(Hcy 0μmol/L)和不同浓度的Hcy(20,40,60,80,100μmol/L)干预组,24 h后用XTT检测细胞活力;Edu检测细胞增殖情况;qRT-PCR和Western blot检测Rap1A的mRNA和蛋白的表达;甲基化特异性PCR法(MSP)检测Rap1A启动子区甲基化改变;激光共聚焦显微镜观察Rap1A的变化;将Rap1A干扰腺病毒转染RAW264.7细胞并用Hcy刺激,检测Rap1A的mRNA和蛋白水平的变化及细胞的增殖情况。结果与对照组相比,不同浓度的Hcy干预细胞后,细胞活力增强,其中100μmol/L Hcy浓度最为明显(P<0.01),且细胞增殖水平明显增加(P<0.01);经Hcy刺激后,细胞Rap1A的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.01),启动子区甲基化水平降低(P<0.01);干扰Rap1A的表达后能够部分逆转Hcy所致的细胞增殖(P<0.01)。结论 Rap1A启动子区低甲基化介导了Hcy导致的RAW264.7细胞增殖。