显微图像分析法与人工计数法在免疫组化结果判读中的应用

为探讨显微图像分析法与人工计数法在免疫组化结果判读中的优劣,实验组为18例感染性休克大鼠肺组织NF-κB(P65)免疫组化切片,对照组为18例正常大鼠肺组织NF-κB(P65)免疫组化切片,各组均为显色较好且非特异性背景染色控制良好的标本,所有切片分别用Motic Images Advanced 3.2显微图像分析系统和人工计数方法进行分析。结果使用显微图像分析系统判读,实验组肺组织NF-κB(P65)阳性细胞的平均灰度值、阳性细胞百分比与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);人工计数方法判读,实验组肺组织NF-κB(P65)表达与对照组定性比较差异有统计学意义(P<0.05)。显微图像分析方法能对免疫组化结果进行定性、定量分析,同时避免了观察者的主观因素对判读结果的影响,增加试验结果的可信性和说服力。

心肌纤维化大鼠Intermedin_(1-53)及其受体的变化

目的在大鼠心肌梗死致心肌纤维化模型上观察Intermedin1-53及其受体的变化。方法通过结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型,4周后检测心功能,梗死区心肌组织的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,IMD1-53和心室肌降钙素受体样受体(CL)、受体活性修饰蛋白(RAMP)1/2/3的mRNA表达。结果与假手术组比较模型组大鼠的心功能明显减低,检测梗死区心肌组织的Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达增加,心室肌IMD1-53、CL、RAMP1/2/3的mRNA水平分别上调75%(P<0.01)、57%(P<0.05)、61%(P<0.01)、48%(P<0.05)和80%(P<0.05)。结论心肌纤维化大鼠的心肌IMD1-53及其受体明显上调,其变化可能参与心肌纤维化的发病过程。

糖尿病大鼠血管钙化的实验研究

目的观察实验性糖尿病对大鼠血管钙化的影响及其可能机制。方法用肌注维生素D3和灌胃尼古丁建立大鼠血管钙化模型;采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法,建立大鼠糖尿病模型。运用Von Kossa染色,原子吸收分光光度法测定钙含量,放射免疫分析法测定血浆、血管骨钙素(OC)和肿瘤坏死因子(TNF)含量,以及血浆、血管碱性磷酸酶(ALP)活性。结果钙化组大鼠血管Von Kossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量黑色颗粒聚集;与对照组相比,主动脉钙含量、ALP活性、OC含量分别增高1.98、2.83倍和84.12%,主动脉TNF含量明显增加(P均<0.01);采用STZ制备糖尿病动物模型,与钙化组相比较,血管组织钙化指标均增高(P均<0.05),主动脉TNF含量增高(P<0.01)。结论STZ制备的糖尿病大鼠模型血管钙化作用可能与促进血浆和血管组织局部的TNF含量增加有关。

氧化苦参碱对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制

目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对人脐静脉平滑肌细胞(humans umbilical vein smooth muscle cells,HUSMCs)钙化的影响及其可能机制。方法:以β-甘油磷酸盐诱导HUSMCs钙化,实验分为对照组、钙化组、单纯OMT组、OMT干预高、中、低剂量组。采用Von Kossa染色鉴定细胞钙化,比色法检测细胞钙含量,磷酸苯二钠法测定ALP活性,放射免疫法测定骨钙素(OC)含量,ELISA检测细胞培养液中TGF-β1和细胞内psmad2/3,smad2/3的含量变化,Western blot法检测细胞内Cbfα1蛋白的表达。结果:钙化组与对照组相比平滑肌细胞内可见大量黑色颗粒聚集,钙含量,ALP活性,OC,TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白的含量均明显增加;OMT干预后钙化指标均下降,TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白表达量亦明显减少,且高剂量OMT组效应强于中、低剂量组。结论:OMT可有效抑制β-甘油磷酸盐诱导的HUSMCs钙化,且OMT降低TGF-β1,smad2/3磷酸化和Cbfα1蛋白表达可能是OMT抑制HUSMCs钙化的机制之一。