氧化苦参碱对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨氧化苦参碱(OMT)对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)法复制大鼠脓毒症动物模型。造模后将48只SD大鼠分为6组,即CON(假手术)组、OMT对照组、CLP(模型)组、CLP+OMT(52、26、13 mg·kg-1)剂量组。采用BL-420生物机能实验设备检测大鼠心功能改变,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI),放射免疫分析法测定心肌组织匀浆中肿瘤坏死因子-a(TNFa)蛋白含量的改变。结果不同剂量的OMT能明显降低脓毒症大鼠的HR、左室舒张末压(LVEDP),升高平均动脉压(MAP)、LVSP、±LVdp/dtmax(P<0.05),降低心肌组织匀浆中TNF-a蛋白含量(P<0.05)及心肌细胞凋亡指数(P<0.05)。结论 OMT(52、26、13 mg·kg-1)能减轻脓毒症导致的大鼠心肌细胞凋亡现象,对抗由心肌细胞凋亡引起的心功能损伤。

DNMT3B mRNA3′非编码区报告基因载体的构建与功能验证

目的构建用于鉴定microRNA(miRNA)靶基因的报告基因系统并进行功能验证,为研究动脉粥样硬化的发生发展机制奠定良好基础。方法在pGL3-control载体的荧光素酶基因下游克隆位点插入DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)3′非编码区序列,经酶切、测序验证是否插入及正确性。生物信息学分析DNMT3B与miRNA-125b的靶向关系,并用miRNA-125b过表达载体与所构建载体共转染人血管平滑肌细胞,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了DNMT3B3′非编码区报告基因载体,经酶切和测序鉴定正确;共转染细胞24h后,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性,结果显示与空载体对照组相比,构建载体组荧光素酶活性下降了54.8%(P<0.01)。结论成功构建了DNMT3BmRNA 3′非编码区报告基因载体,且提示miRNA-125b靶向调控了DNMT3B。