六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全模型小鼠的分子机制

背景:在临床上,大多数治疗早发性卵巢功能不全的方剂均以六味地黄丸为基础方演变而来,并且取得了较好的疗效。目前对六味地黄丸的实验研究大多为体内动物模型的形态学观察及生理生化指标的检测,而分子机制方面的研究报道较少。目的:探讨六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全的分子作用机制。方法:环磷酰胺120 mg/kg联合白消安12 mg/kg腹腔注射制备早发性卵巢功能不全小鼠模型,然后用六味地黄丸混悬液对早发性卵巢功能不全小鼠进行干预,干预12周采用ELISA法检测小鼠血清中促卵泡刺激素、促黄体生成素、雌激素、抗苗勒氏管激素、8-羟脱氧鸟苷、总抗氧化能力、活性氧水平;苏木精-伊红染色观察小鼠卵巢形态学改变;透射电镜观察小鼠卵泡颗粒细胞超微结构及颗粒细胞线粒体的凋亡情况;免疫组化法检测六味地黄丸对小鼠卵巢颗粒细胞中核受体转录辅激活因子(receptor gamma coactivator-1 alpha,PGC-1α)、线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,TFAM)的表达水平。结果与结论:①与模型组比较,实验组小鼠血清促卵泡刺激素、促黄体生成素、活性氧、8-羟脱氧鸟苷水平降低(P<0.05),雌激素、抗苗勒氏管激素、总抗氧化能力水平升高(P<0.05);②苏木精-伊红染色发现模型组小鼠卵巢组织中闭锁卵泡和黄体较多,个别可见次级卵泡,间质纤维化增生;实验组小鼠卵巢组织可见大量闭锁卵泡,黄体较少,边缘可见原始卵泡,次级卵泡较少,未见明显成熟卵泡;③透射电镜发现实验组小鼠卵巢颗粒细胞内细胞器较完整;④免疫组化结果显示,实验组小鼠卵巢组织PGC-1α的表达水平在第4周稍有升高至第8,12周无明显变化,与模型组有明显差异;实验组小鼠卵巢组织TFAM的表达水平在第4周时短暂升高,然后稍有所下降,但结果均与模型组有明显差异;⑤结果表明,六味地黄丸通过PGC-1α-TFAM-ROS信号通路在一定程度上抑制早发性卵巢功能不全小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,从而改善卵巢的内分泌功能,提高机体抗氧化能力,减轻氧化应激损伤程度。

六味地黄丸调节肠道微生物组平衡抑制卵巢早衰小鼠的氧化应激

背景:研究表明,卵巢早衰患者肠道菌群结构发生变化,肠道菌群失调可能是卵巢早衰发生的重要机制之一。目的:探讨六味地黄丸对环磷酰胺诱导卵巢早衰小鼠氧化应激和肠道微生物群的影响。方法:45只雌性ICR小鼠随机分为3组:空白组(正常小鼠)、模型组(卵巢早衰小鼠)、六味地黄丸组,后2组小鼠一次性腹腔注射环磷酰胺(120 mg/kg)制备卵巢早衰小鼠模型,造模成功后六味地黄丸组小鼠连续灌胃六味地黄丸(1.56 g/kg)28 d,其余2组灌胃等量生理盐水28 d,灌胃结束后取材。每周记录小鼠体质量,计算卵巢指数,苏木精-伊红染色观察小鼠卵泡的发育情况,ELISA法检测血清抗苗勒管激素、雌二醇、促卵泡激素、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和丙二醛水平,并通过16S rDNA测序检测所有小鼠的肠道微生物组。结果与结论:(1)模型组小鼠的毛发疏松,活力及抓力下降,体质量几乎无增长,卵巢指数下降;六味地黄丸治疗后小鼠的体质量高于模型组,卵巢指数也随之升高(P<0.05)。(2)模型组小鼠动情周期紊乱;六味地黄丸能恢复卵巢早衰小鼠的发情周期,减少闭锁卵泡数量。(3)模型组小鼠血清中促卵泡激素、丙二醛水平显著升高(P<0.01),血清雌二醇、抗苗勒管激素、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶水平显著下降(P<0.01);六味地黄丸组小鼠血清促卵泡激素、丙二醛水平显著降低(P<0.01),雌二醇、抗苗勒管激素、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶水平升高。(4)根据16S rDNA测序结果,六味地黄丸可调控肠道微生物群的丰度和多样性,可增加有益菌的相对丰度,KEGG通路分析显示,肠道微生物群与代谢途径、次生代谢产物的生物合成、不同环境中的微生物代谢、氨基酸的生物合成等通路受六味地黄丸的调控。(5)结论:肠道微生物组的改变可能是六味地黄丸治疗卵巢早衰的潜在机制之一。六味地黄丸能调节肠道微生物组结构,增加有益菌数量,减少有害菌数量,从而改善肠道微生态平衡。这种调节作用有助于降低氧化应激水平,进一步抑制卵巢早衰小鼠卵巢氧化应激。

人类微量精子冷冻载体的研究进展

全球不孕不育症中男性因素约占50%,其中无精子症患者通常需要通过手术获取微量精子,或极重度少弱精子症患者的精子数量稀少,采用常规冷冻载体冷冻复苏后难以寻找到存活的精子。因此为避免取卵日无精子可用而取消周期,临床上应用微量精子冷冻载体预先冷冻少量精子,如空卵透明带、海藻酸胶囊、微滴法、麦管法、薄片法、剥卵针等。本文就人类微量精子的不同冷冻载体的研究进行综述,为临床上优化微量精子的冷冻方法提供理论依据。

沙棘籽油通过调节自噬水平改善多囊卵巢综合征

目的:研究沙棘籽油对多囊卵巢综合征(PCOS)的改善作用,并探索其可能机制。方法:4周龄雌性ICR小鼠分为正常对照组、模型组、二甲双胍(50 mg/kg)阳性对照组、沙棘籽油(2.5 mL/kg)组,除正常对照组外其余各组小鼠用来曲唑200μg/kg灌胃联合高脂高糖饲料21 d建立PCOS模型,确定造模成功后,各给药组灌胃相应药物,正常对照组和模型组灌胃相应体积生理盐水,共给药28 d。每4 d称量质量、阴道涂片观察动情周期,取材前1 d行葡萄糖耐量试验(OGTT),取材后HE染色观察卵巢组织病理学变化,ELISA法检测血清中睾酮(T)、雌二醇(E_(2))、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗苗勒管激素(AMH)的含量,免疫组化和Western Blot法检测各组小鼠卵巢组织中Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白表达。结果:与模型组比较,沙棘籽油组小鼠动情周期及卵巢组织病理学明显改善,糖耐量显著升高,血清LH、E_(2)水平显著升高,T、AMH、FSH/LH水平显著降低,卵巢组织中自噬相关因子LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:沙棘籽油对PCOS小鼠模型有很好的改善作用,能显著调节自噬水平。

基于网络药理学探讨黑果枸杞多酚缓解二苯甲酮-3致雄性泌尿生殖损伤机制的研究

目的:研究黑果枸杞多酚对二苯甲酮-3(BP-3)致雄性泌尿生殖损伤的影响及其机制。方法:分别通过CTD数据库和Swiss Target Prediction、TargetNet数据库筛选出BP-3的雄性泌尿生殖毒性靶点和黑果枸杞多酚的药理靶点;通过Venny 2.1.0工具得到BP-3与黑果枸杞多酚的交集靶点。将靶点输入STRING数据库,构建蛋白相互作用网络。在R语言中进行GO生物学过程富集分析和KEGG代谢途径富集分析。运用Cytoscape 3.8.2软件构建黑果枸杞多酚—共同靶点—通路网络。利用AutoDockvina 1.1.2软件将上述靶点分别与黑果枸杞多酚及BP-3进行分子对接。结果:筛选得到56个BP-3雄性泌尿生殖系统潜在作用靶点,296个黑果枸杞多酚的潜在药理靶点,交集靶点14个。药物代谢动力学分析得出,黑果枸杞多酚中对香豆酸、咖啡酸有较好类药性和较强肠道吸收性;GO、KEGG富集分析结果提示BP-3和黑果枸杞多酚可作用于雄性泌尿生殖系统;共同靶点—通路网络分析结果表明,PIK3R1、TP53等分子可能在黑果枸杞多酚缓解BP-3所致的雄性泌尿生殖损伤中发挥着重要作用;分子对接结果表明,BP-3和黑果枸杞多酚可通过氢键等化学键形式与PIK3R1、TP53、ESR1、PTGS2、ESR2活性位点附近的氨基酸结合,且两者与靶蛋白间均具有较强的结合能。结论:黑果枸杞多酚可以从一定程度上缓解BP-3所致的雄性泌尿生殖损伤效应,PIK3R1、TP53、ESR1、PTGS2、ESR2等靶点分子可能介导了上述拮抗效应。

两种不同术式对中隔子宫患者生殖预后改善的研究

目的:探讨经宫颈宫腔镜下子宫中隔切除术(TCRS)和经宫颈宫腔镜下子宫中隔切开术(TCIS)对有不良孕产史以及不孕的中隔子宫患者生殖预后改善情况。方法:回顾性分析2009年1月到2012年6月我院收治的中隔子宫患者,对不同手术方式所用手术时间、术后月经情况、术后妊娠率、术后足月分娩率等指标行统计学分析。结果:与TCRS术组相比,TCIS术式可减少手术时间(17.23±4.14分钟,14.75±2.56分钟,t=3.050,P=0.003)、术中出血量(15.20±2.12ml,7.23±3.45 ml,t=11.474,P=0.000)、术中膨宫液用量(4820±840 ml,3910±760 ml,t=4.759,P=0.000);宫腔内膜上皮化满意率高(39.4%,64.9%,χ2=4.541,P=0.033)、术后残隔率低(21.2%,2.7%,χ2=4.217,P=0.040);但术中并发症发生率、术后宫腔镜复查宫腔粘连发生率差别不明显(P>0.05)。TCIS组术后总妊娠率高于TCRS组((64.9%,39.4%,χ2=4.541,P=0.033),但早孕流产率、早产率以及足月产率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TCIS术式在减少手术时间、术中出血量、膨宫液用量方面有优势,可增加宫腔内膜上皮化进程,提高术后总妊娠率。

血清miR-135b、ANGPTL3与冠心病患者Gensini积分的相关性分析

目的探讨血清微小RNA-135b(miR-135b)、血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)与冠心病患者Gensini积分的相关性。方法选取收治的110例冠心病患者作为研究组,选取同期100例体检健康者作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测受试者血清miR-135b水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ANGPTL3水平,观察两组受试者血清miR-135b、ANGPTL3水平与血脂指标变化,不同冠状动脉狭窄程度血清miR-135b、ANGPTL3水平变化,两者水平与患者血脂指标相关性及与Gensini积分三者之间相关性。结果研究组患者血清miR-135b、ANGPTL3、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显高于对照组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.05);重危组、中危组患者血清miR-135b、ANGPTL3水平高于低危组(P<0.05),重危组高于中危组(P<0.05);冠心病患者血清miR-135b与TC、TG、LDL-C呈正相关(P<0.05),与HDL-C呈负相关(P<0.05);血清ANGPTL3水平与TG、LDL-C呈正相关(P<0.05),与HDL-C呈负相关(P<0.05);血清miR-135b表达与ANGPTL3、Gensini积分呈正相关(P<0.05),ANGPTL3表达与Gensini积分呈正相关(P<0.05)。结论冠心病患者血清miR-135b、ANGPTL3水平升高,两者呈正相关,并与血脂、冠状动脉狭窄程度相关。

慢性应激损伤对大鼠海马GABRD基因表达的影响及逍遥散干预机制的研究

目的：用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区GABRD基因的表达情况。方法：以45只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组15只。造模方法采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2 mL/只·d,连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。运用Agilent表达谱芯片筛选各组差异基因,并选取GABRD基因,采用实时荧光定量PCR及免疫组织化学染色法对各组大鼠海马区域GABRD基因mRNA及其蛋白表达情况加以验证。结果：Agilent表达谱芯片结果显示慢性应激模型组大鼠海马GABRD下调,逍遥散干预后有上调趋势,但无统计学意义。RT-PCR及免疫组化法验证结果显示：慢性应激模型组大鼠海马GABRD mRNA及其相应蛋白表达均显著下调,中药复方逍遥散可从蛋白水平纠正这种下调的表达变化。结论：γ-氨基丁酸A受体δ亚型表达变化参与了慢性应激损伤的过程,逍遥散可能通过调控这一基因的表达而发挥对慢性应激损伤所致一系列神经、精神紊乱症状的保护性调节作用。

卵巢移植对去势大鼠海马神经元数量和ER-β、NG表达的影响

目的:观察去势大鼠卵巢移植后海马神经元数量变化及雌激素受体β(ER-β)和神经颗粒素(NG)表达的变化,评价卵巢移植对中枢神经的保护作用。方法:成年雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术(OVX)后,在肾被膜下移植出生3日内乳鼠的卵巢,于干预后的4、7、14、21 d和28 d,通过Nissl染色计数海马神经元的数量,采用免疫组化法观察海马神经元ER-β和NG蛋白的表达情况,并与OVX组和正常对照组比较。结果:与OVX组相比,卵巢移植组随移植时间的延长,海马神经元的数量逐步恢复;ER-β和NG蛋白的表达在海马各区均有所升高(P<0.05)。结论:卵巢移植可以防止海马神经元数量的减少,并促进ER-β和NG表达,发挥雌激素对中枢神经系统的保护作用。

切除修复交叉互补组5基因rs17655多态性对精子DNA碎片率和原发性男性不育的影响研究

目的探讨切除修复交叉互补组5(ERCC5)基因rs17655多态性对精子DNA碎片率和原发性男性不育的影响。方法采用病例对照的研究方法,收集2011年12月—2012年12月在宁夏医科大学总医院生殖医学中心确诊的原发性男性不育患者347例为病例组,选择同期来此院体检的生育史正常的男性368例为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测两组的rs17655基因型。采用精子染色质扩散(SCD)实验检测病例组患者精子DNA损伤程度。结果病例组和对照组rs17655基因型和等位基因频率的分布间差异无统计学意义(P>0.05)。3个病例组亚组(无精子症组、少弱精症组、精液参数正常不育组)与对照组rs17655基因型和等位基因频率的分布间差异均无统计学意义(P>0.05)。少弱精症组精子DNA碎片率〔(50.0±22.1)%〕高于精液参数正常不育组〔(37.8±20.7)%,P<0.05〕,并且均高于对照组〔(21.4±9.2)%,P<0.05〕。携带rs17655 3种不同基因型的原发性男性不育患者精子DNA碎片率间差异无统计学意义(P>0.05)。rs17655与吸烟、饮酒对原发性男性不育的发病影响无交互作用(P>0.05)。结论 ERCC5基因rs17655的基因型可能与原发性男性不育的发病风险无关,不会影响ERCC5修复精子DNA损伤的能力;其与吸烟、饮酒对原发性男性不育的发病影响无交互作用。精子DNA碎片率增加可能是原发性男性不育的病因之一。

嗜肺军团菌重组MOMP蛋白间接ELISA方法的建立及其在血清学诊断中的应用

目的表达及纯化出嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)作为诊断抗原,研究其在嗜肺军团菌感染血清学诊断中的实用价值。方法将已成功构建的重组质粒pET-momp转化到大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中,诱导重组MOMP表达,运用SDS-PAGE和亲和层析法纯化。用DRG军团菌IgG、IgM、IgA的ELISA试剂盒筛选出58份阳性血清和32份阴性血清,用纯化的MOMP蛋白作为诊断抗原建立间接ELISA,同时与R&D公司军团菌的IgG、IgM、IgA ELISA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后用受试者工作特征(ROC)曲线对这2种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及检测结果的一致性,来评价重组MOMP间接ELISA的应用价值。结果成功诱导表达并纯化出相对分子质量(M r)大约为45 000的重组MOMP蛋白。重组MOMP建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与R&D公司的ELISA试剂盒进行比较,IgG抗体灵敏度90.9%,特异度91.7%,一致性Kappa值0.784(P<0.05),ROC曲线下的面积0.913;IgM抗体灵敏度91.4%,特异度90.6%,一致性Kappa值0.809(P<0.05),ROC曲线下的面积为0.910;IgA抗体灵敏度92.1%,特异度88.9%,一致性Kappa值0.793(P<0.05),ROC曲线下的面积0.905。结论成功诱导表达及纯化出重组MOMP蛋白,将其作为诊断抗原所建立的间接ELISA表现出了较好的特异性,灵敏度和一致性,为军团病的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础。

逍遥散对慢性应激大鼠海马区Npas2基因表达的影响及其DNA甲基化修饰机制研究

目的采用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区神经PAS域蛋白2(neuronal PASdomain protein 2,Npas2)基因的表达及其DNA特定区域甲基化的修饰情况。方法将90只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组和逍遥散治疗组,共3组,每组30只。造模采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时每天给予逍遥散2 m L,连续造模21 d。采用RT-PCR一步法及免疫组织化学染色法测定各组大鼠海马区Npas2基因及其蛋白表达情况,基因甲基化检测采用SequenomMass ARRAY法。结果慢性应激损伤大鼠海马Npas2m RNA及其相应蛋白表达有明显变化,与空白对照组和逍遥散治疗组比较差异均有统计学意义,但其m RNA及相应蛋白表达变化趋势不一致,其基因某些特定区域的甲基化程度有升高的趋势(个别位点有统计学差异)。逍遥散治疗能够明显逆转慢性应激引起的Npas2m RNA及其相应蛋白的表达变化,相应区域DNA甲基化程度表现出下调趋势(个别位点有统计学差异)。结论 Npas2基因参与了慢性应激损伤过程,其表达变化可能与其基因某些特定位点的甲基化修饰变化有关,逍遥散能够逆转这种表达改变,可能是通过调节Npas2基因特定位点的甲基化程度发挥作用。

p53基因第72位密码子多态性与HPV相关食管鳞癌遗传易感性的研究

目的探究p53基因第72位密码子(codon72)多态性与HPV相关食管鳞癌的关联性。方法选择435例食管鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)患者和550例健康对照,进行p53 codon72与食管鳞癌发生的关联研究。结果病例组的Arg/Arg基因型的频率高于对照组(85.7%vs 49.6%);Arg/Arg基因型携带者发生食管鳞癌的风险是携带Arg/Pro或Pro/Pro基因型个体的6.48倍(P<0.001)。结论 p53 co-don72纯合子Arg/Arg可能是HPV相关食管鳞癌发生的危险因素。

ADM低表达与月经过多及原因不明性不孕的关系

目的探讨肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)及其相关受体降钙素受体相关受体(calcitonin relativereceptor,CRLR)在月经过多及原因不明不孕发生中表达及其与内膜血管密度的关系。方法免疫组化、荧光定量PCR法测定月经过多组妇女(n=20)、原因不明的不孕组妇女(n=22)黄体期子宫内膜中ADM、CRLR蛋白和基因表达、血管数目等的变化,选取健康妇女黄体期子宫内膜(n=20)做对照组。结果免疫组化结果显示子宫内膜腺体中ADM蛋白的表达三组间差异均无统计学意义(P>0.05),而间质细胞中ADM表达不孕症组为(768±213.6),月经过多组为(907±286.6),均低于正常对照组(1243±342.8),P<0.001;在腺上皮、腺体及间质中三组间CRLR蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05);QRT-PCR测定显示对照组内膜中的ADM mRNA表达为(4.5±0.70),较不孕症组(1.69±0.51)的高4.12倍,较月经过多组(0.73±0.56)的高5.6倍,而CRLR mRNA表达三组间比较差异无统计学意义;CD31标示的子宫内膜中微血管密度测定结果显示:不孕症组内膜中微血管密度值(1.03±0.51)、微血管总数目(4.9±0.87)明显低于对照组(P<0.01);月经过多组微血管密度(1.12±0.22)、总微血管数目(5.14±0.94)均低于对照组(P<0.01)。结论原因不明性不孕及月经过多的患者发生与子宫内膜中ADM蛋白和mRNA的呈低表达及血管密度的降低有关;原因不明性不孕与月经过多可能同为低ADM表达所致的内膜血管异常性疾病。

CHI3L1与MMP9在子宫内膜异位症大鼠内膜中的表达及意义

目的探讨CHI3L1与MMP9在子宫内膜异位症(EMs)大鼠内膜组织中的表达及意义。方法选取SPF级雌性SD大鼠20只,采用自体移植法建立EMs大鼠模型(EMs组),假手术组作为对照组。建模4周后再次剖腹,观察异位病灶的外观表现,HE染色鉴定模型是否成功。应用免疫组织化学法和Western blot法检测对照组、EMs组在位内膜和异位内膜中CHI3L1和MMP9表达。结果EMs大鼠模型肉眼观表现:可见移植物呈透明或者半透明囊状增大,内含淡黄色清亮或咖啡色液体;HE染色结果显示:异位病灶组织见腺体、间质或上皮细胞生长即为建模成功;免疫组化结果显示:CHI3L1主要表达于子宫内膜腺上皮细胞及腺体的胞浆中;MMP9主要表达于腺体的胞浆中,胞核内极少量表达。与对照组相比,EMs组大鼠在位内膜和异位内膜中CHI3L1和MMP9的表达水平升高,且异位内膜表达高于在位内膜(P均<0.05);Western blot结果显示:与对照组相比,EMs组大鼠在位内膜及异位内膜中CHI3L1蛋白表达水平升高,且异位内膜组的表达高于在位内膜组(P均<0.05);Pearson相关分析显示:CHI3L1和MMP9在EMs组大鼠在位内膜和异位内膜的表达均呈正相关(r异位内膜=0.663,P<0.05;r在位内膜=0.695,P<0.05)。结论CHI3L1、MMP9在EMs大鼠内膜组织中高表达,提示其可能通过增强EMs异位内膜侵袭性参与了EMs的发生、发展。

情景引导教学在医学遗传学中的应用

医学遗传学是联系基础医学与临床医学的桥梁学科,具有一定深奥性及前沿性。为了提高教学效果,宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学系教师采用情景引导教学方法,从教学设计、引导问题及达到的效果几个方面详细分享了5个教学实例,并对情景引导法进行教学的过程中可能存在的问题及解决办法也进行了说明,以期为情景引导法更好地应用到教学过程中奠定基础。

逍遥散对慢性应激损伤模型大鼠海马区Cacnb4基因表达的影响

目的：本研究用逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,观察其海马区Cacnb4基因的表达情况。方法：以60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组,每组20只。造模方法采用Cart多相性慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时给予逍遥散2m L/（只·d）,连续造模21 d,于第22天处死大鼠并取材。采用RT-PCR一步法及免疫组化检测方法测定各组大鼠海马区域Cacnb4基因及其蛋白表达情况。结果：慢性应激模型组大鼠海马Cacnb4mRNA及其相应蛋白表达均显著上调,中药复方逍遥散可从基因及蛋白水平同时纠正这种上调的表达变化。结论：电压依赖型钙离子通道β4辅助亚基的表达变化参与了慢性应激损伤过程,逍遥散对慢性应激所致神经细胞损伤可能通过调节这一基因发挥保护性作用。

子宫内膜异位症大鼠在位及异位内膜组织中RAS与MEK的表达

目的探讨子宫内膜异位症大鼠在位及异位内膜组织中原癌基因蛋白(RAS)与丝裂原活化蛋白激酶(MEK)的表达水平。方法选取SPF级健康雌性未孕SD大鼠20只,自体移植法建立EMs大鼠模型,其中假手术组作为对照组(每组10只)。应用免疫组织化学法、Western-blot及qRT-PCR检测法检测EMs大鼠在位及异位内膜组织中RAS与MEK蛋白及mRNA表达情况,Pearson相关分析分析两种蛋白表达的相关性。结果苏木素伊红染色显示异位病灶组织见腺体及间质即为模型成功;免疫组化结果显示:RAS蛋白主要定位于子宫内膜腺上皮及腺体的胞浆中,间质内少量表达;MEK主要定位于子宫内膜腺体的胞浆中,胞核中少量表达。Western-blot及qRT-PCR结果显示:与对照组相比,EMs模型组在位及异位内膜组织中RAS、MEK蛋白及mRNA的表达均明显升高,异位内膜组中的表达高于在位内膜组,各组间差异具有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,EMs大鼠在位及异位内膜组织中RAS与MEK蛋白表达呈正相关(r_(异位内膜组)=0.68,P<0.05;r_(在位内膜组)=0.79,P<0.05)。结论EMs大鼠在位及异位内膜组织中RAS与MEK蛋白表达升高且呈正相关,提示两者表达相辅相成,可能与子宫内膜异位症的发生密切相关。

白介素5/TNFRSF13B在深部浸润型子宫内膜异位症微环境中的表达及其意义研究

目的探讨深部浸润型子宫内膜异位症(DIE)与正常子宫内膜组织中白介素5(IL-5)、TNFRSF13B表达的差异。方法选取2015年12月—2016年12月襄阳市中心医院妇科15例因DIE行手术治疗的患者为实验组,同期15例因输卵管再通行腹腔镜或开腹手术的患者作为对照组。选取基因芯片、实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学、Western blotting等方法检测IL-5及TNFRSF13B的表达。结果KEGG信号通路分析结果显示涉及免疫应答的hsa04672(intestinal immune network for Ig A production)通路在DIE中高表达,故对于主要涉及的IL-5、TNFRSF13B基因进行进一步分析。实时荧光定量PCR显示,实验组IL-5、TNFRSF13B mRNA相对表达水平高于对照组(P<0.05)。ELISA显示实验组患者腹腔液及腺上皮细胞上清液中IL-5表达水平均高于对照组(P<0.05)。免疫组织化学及Western blotting显示,实验组TNFRSF13B表达水平高于对照组(P<0.05)。结论 IL-5及TNFRSF13B在DIE微环境中高表达,可能与DIE患者体内免疫机制异常有关,促使炎症形成而偏向免疫耐受,促使异位内膜腺上皮细胞在腹腔中种植生长。

大剂量X射线辐照对离体大鼠脊髓神经元凋亡的影响

目的:研究X射线辐照对大鼠原代脊髓神经元细胞的损伤效应。方法:制备SD大鼠脊髓原代神经元细胞,神经元标志物神经元核抗原(Neu N)免疫荧光染色鉴定其纯度。给予0、3、6和9 Gy等距离X射线辐照,二甲基噻唑-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测神经元存活率,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率评价细胞膜完整性。Western Blot检测DNA损伤反应蛋白-聚(ADP核糖)聚合酶1(PARP1)完整型和裂解型蛋白的表达水平以及胞浆胞核蛋白中凋亡诱导因子(AIF)的表达变化。结果:大鼠脊髓原代90%Neu N染色阳性,提示神经元纯度达90%以上。原代神经元细胞接受0、3、6和9 Gy等距离X射线辐照后48 h,9 Gy辐照使得细胞存活率显著降低(P <0. 05)及LDH漏出率升高(P <0. 05)。6 Gy辐照后神经元细胞中完整型PARP1表达显著升高(P <0. 05),而9 Gy辐照后PARP1水解明显加剧(P <0. 01),提示凋亡增加。6 Gy及以上剂量辐照后神经元细胞核蛋白中AIF显著增多(P <0. 05)。结论:大剂量X射线辐照破坏了大鼠脊髓神经元细胞膜完整性,引起DNA损伤,诱导了caspase依赖及非caspase依赖的细胞凋亡。