小鼠黄体血管中周细胞的动态变化及调控因素研究

目的研究血管周细胞在小鼠黄体血管新生及成熟过程中的动态变化及其调控因素,阐明黄体血管结构的变化规律。方法对21日龄小鼠腹腔注射促性腺激素(PMSG,HCG)促排卵,建立黄体生成模型,分别于注射HCG后20h(黄体早期,H20)、48h(黄体发展期,H48)、72h(黄体中期,H72)、96h(黄体晚期,H96)收取卵巢组织,利用激光共聚焦技术检测血管密度(血管内皮细胞marker CD31)、成熟度(周细胞marker Desmin);通过qPCR及免疫荧光检测血管新生关键调控因子(VEGF、HIF1-α、ANGPT-1及ANGPT-2)的表达和分布。结果在H20阶段,血管内皮细胞和周细胞进入颗粒细胞层,部分周细胞在内皮细胞前端;VEGF表达开始上升,HIF1-α表达上调,ANGPT-1/ANGPT-2的比值增加。在H48时,血管密度达最大,有周细胞覆盖,VEGF和HIF1-α达最高,ANGPT-1/ANGPT-2的比值达最高,与其他时间组比较差异有统计学意义(P<0.0001)。在H72时,血管开始退化,血管内皮细胞的减少先于周细胞的减少;HIF1-α和VEGF表达下降,ANGPT-1/ANGPT-2的比值下降,并在H96时降至最低。结论黄体早期,周细胞伴随血管内皮细胞爬行进入黄体,引导血管新生;发展期,周细胞促进血管成熟稳定;中、晚期,周细胞与血管内皮细胞一起退化;且黄体血管结构组成的变化受HIF1-α-VEGF通路和ANGPT1/ANGPT2的协同调控。

激活素A调节人卵巢颗粒细胞Smad2和CYP19A表达的研究

目的 探讨激活素A通过Smad2和CYP19A表达促进颗粒细胞增殖的作用途径。方法2017年3~8月,在宁夏医科大学总医院生殖医学中心就诊的患者中,选取体外受精-胚胎移植(IVFET)或卵胞质内单精子注射(ICSI)两种助孕方式治疗的15例患者为研究对象。取分离纯化的卵巢颗粒细胞,经原代培养48h后分组:激活素A组添加50μg/ml的激活素A,Bimagrumab组添加5μM选择性ActRⅡ抑制剂Bimagrumab,混合组同时添加50μg/ml的激活素A与20μM的Bimagrumab,再继续培养24h。采用Western印迹法检测蛋白表达水平,逆转录及实时PCR检测mRNA表达水平,细胞免疫荧光化学检测蛋白定位。采用单因素方差分析、t检验进行统计学分析。结果 激活素A组中ActRⅡ、p-Smad2/Smad2蛋白表达水平均高于空白对照组,Bimagrumab组中ActRⅡ和p-Smad2/Smad2蛋白表达水平低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),提示Bimagrumab对ActRⅡ有抑制效果,激活素A对ActRⅡ有促进效果。混合组中CYP19A1蛋白表达低于空白对照组,激活素A组中CYP19A1蛋白表达水平高于空白对照组;差异有统计学意义(P<0.05)。激活素A组中Smad2和CYP19A1mRNA表达水平高于空白对照组,混合组中Smad2和CYP19A1mRNA表达水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫化学染色显示,Smad2和CYP19A1存在于卵巢颗粒细胞中,Smad2阳性染色定位于细胞胞浆,CYP19A1阳性染色定位于细胞胞浆和细胞膜。结论 颗粒细胞分泌因子激活素A激活ActRⅡ信号通路,增加p-Smad2/Smad2和CYP19A1的表达水平,进一步促进颗粒细胞增殖和分化。