胎牛血清联合FSH对玻璃化冻存小鼠卵巢的保护作用

目的观察玻璃化冻存液中联合添加促卵泡刺激素(follicle-stimulatiny hormore,FSH)与胎牛血清对卵巢的保护作用,为优化卵巢玻璃化冷冻保存技术提供科学依据。方法将3周龄雌性ICR小鼠卵巢分为新鲜对照组(FCG)、空白对照玻璃化冻存组(B-VCG)、FSH干预玻璃化冻存组(FSH-VCG)、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)干预玻璃化冻存组(FBS-VCG)、FBS联合FSH干预玻璃化冻存组(FBS+FSH-VCG)5组,采用卵泡计数方法计算正常卵泡率,采用免疫组织化学方法及蛋白免疫印迹技术观察凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 FBS+FSH-VCG组的正常卵泡百分比高于B-VCG组(P=0.012),FBS+FSHVCG组和FBS-VCG(P=0.751)和FSH-VCG(P=0.693)组比较差异无统计学意义(P>0.05);与FCG组相比,玻璃化冻存各组卵巢组织内的凋亡蛋白Bax表达均升高(P均<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达均减少(P均<0.05);与B-VCG组比较,FBS-VCG、FSH-VCG和FBS+FSH-VCG组的Bcl-2蛋白表达较高(P均<0.05),Bax蛋白表达率较低(P均<0.05);在FBS+FSH-VCG组中,Bcl-2/Bax比值大于1,Bcl-2表达占优势,与B-VCG组相比差异有统计学意义(P=0.034),FBS+FSH-VCG组与FCG组Bcl-2表达相似。结论小鼠卵巢组织玻璃化冻存过程中胎牛血清和FSH的添加可以减少对卵巢组织的冷冻损伤,提高正常卵泡百分比,二者联合添加对卵巢的保护效果最好。

结核分枝杆菌TB10.4亚单位疫苗的构建及免疫原性研究

目的构建结核分枝杆菌TB10.4基因的原核表达载体,表达和纯化该蛋白,构建亚单位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法从重组质粒p ET-SUMO-TB 10.4获得基因片断后,将其插入到载体p ET-28a(+),转化Ecoli DH5α感受态细胞,随机筛选阳性克隆,测序正确后并将该重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化并复性。随机将C57BL/6雌性小鼠分为Tris-HCl组、TB10.4组(佐剂为DDA/Poly I∶C)及卡介苗(BCG)3组,每组10只,每只小鼠每次免疫200μL,其中DDA250μg及Poly I∶C 25μg,蛋白量为20μg,而BCG为5×106CFU,分别于1、4、7周皮下免疫小鼠。末次免疫4周后,用特异性抗原TB10.4刺激脾淋巴细胞,检测其分泌IFN-γ水平;用ELISA检测血清特异性抗体Ig G2b、Ig G1。结果构建了原核表达重组质粒p ET-28a-TB10.4,并在分子量约为10.4k Da处观察到蛋白条带;小鼠血清中产生特异性抗体Ig G2b与Ig G1,体外脾淋巴细胞受TB10.4刺激时分泌IFN-γ水平显著高于Tris-HCl组(P<0.05)及BCG组(P<0.05)。结论 TB10.4蛋白与佐剂构建了亚单位疫苗,该疫苗可在C57BL/7小鼠中诱导抗原特异性免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。