结核分枝杆菌TB10.4亚单位疫苗的构建及免疫原性研究

目的构建结核分枝杆菌TB10.4基因的原核表达载体,表达和纯化该蛋白,构建亚单位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法从重组质粒p ET-SUMO-TB 10.4获得基因片断后,将其插入到载体p ET-28a(+),转化Ecoli DH5α感受态细胞,随机筛选阳性克隆,测序正确后并将该重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化并复性。随机将C57BL/6雌性小鼠分为Tris-HCl组、TB10.4组(佐剂为DDA/Poly I∶C)及卡介苗(BCG)3组,每组10只,每只小鼠每次免疫200μL,其中DDA250μg及Poly I∶C 25μg,蛋白量为20μg,而BCG为5×106CFU,分别于1、4、7周皮下免疫小鼠。末次免疫4周后,用特异性抗原TB10.4刺激脾淋巴细胞,检测其分泌IFN-γ水平;用ELISA检测血清特异性抗体Ig G2b、Ig G1。结果构建了原核表达重组质粒p ET-28a-TB10.4,并在分子量约为10.4k Da处观察到蛋白条带;小鼠血清中产生特异性抗体Ig G2b与Ig G1,体外脾淋巴细胞受TB10.4刺激时分泌IFN-γ水平显著高于Tris-HCl组(P<0.05)及BCG组(P<0.05)。结论 TB10.4蛋白与佐剂构建了亚单位疫苗,该疫苗可在C57BL/7小鼠中诱导抗原特异性免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。