人血管内皮细胞体外培养模型的建立

目的探讨人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)体外原代培养及功能检测的可靠方法。方法采用改良的胶原酶灌注消化法分离HUVEC,用免疫荧光法鉴定细胞纯度;用血清+DMSO冻存HUVEC,用Edu法检测细胞增殖能力,Matrigel体外成管实验检测血管内皮细胞功能。结果培养得到高纯度(99%)、高数量(1×106~3×106)、高质量(增殖与成管能力均良好)的原代细胞。结论建立了分离、培养、保存HUVEC及对其功能检测的可靠方法,为血管新生研究提供了理想的细胞模型和实验思路。

定量研究血管新生的Matrigel plug体内模型建立

目的建立能够定性、定量检测血管新生的Matrigel plug体内模型,为抗肿瘤血管药物筛选提供在体研究平台。方法在小鼠皮下建立Matrigel plug实验模型,从Matrigel大体标本观察血管网络,运用免疫荧光法检测血管密度,通过三维立体成像检测血管内皮细胞的成管能力,并通过实时荧光定量PCR(q PCR)对血管内皮细胞表达的标记分子CD31与VE-Cadeherin进行定量分析。结果用上述方法能够定性、定量检测到血管密度、成管能力及血管内皮细胞标记分子CD31、VE-Cadehrin的表达与Matrigel plug中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度成正相关,能够客观的反映血管新生的程度。结论建立了能够定性、定量分析Matrigel plug内血管新生程度的体内模型,为血管新生研究及抗肿瘤血管药物研发提供新的策略和平台。

胶原盘状结构域受体2基因缺失对小鼠卵巢功能的影响

目的利用胶原盘状结构域受体2(Discoidin domain receptor 2,DDR2)基因缺失小鼠,研究DDR2缺失对卵巢功能的影响,探索DDR2缺失小鼠不孕的原因。方法①阴道脱落细胞涂片结合改良巴氏染色法检测DDR2基因缺失纯合子(SLIE)与野生型(WT)小鼠动情周期的差异。②PMSG+HCG促排卵后在体式显微镜下计数排卵数量差异,HE染色法观察SLIE小鼠与WT小鼠促排卵后卵巢与子宫形态及结构的差异。结果①成年SLIE小鼠缺乏明显的动情期,绝大多数处于动情间期,缺乏规律的动情周期。②促排卵实验发现,SLIE小鼠促排卵数量显著减少;③排卵后黄体生成早期,SLIE小鼠子宫壁薄,体积小;卵巢切片中没有黄体生成;子宫切片HE染色显示子宫内膜薄,腺体及间质增生不明显,未见分泌粘液,未能进入分泌期。结论DDR2缺失导致卵巢对促性腺激素的反应能力降低,促排卵后黄体生成障碍。

牛蒡苷对小鼠急性毒性及神经系统的影响

目的观察牛蒡苷对小鼠急性毒性及神经系统的影响,为牛蒡苷及牛蒡子的临床安全用药提供依据。方法采用灌胃和腹腔注射方法确定小鼠的半数致死剂量（LD50）。应用自发活动测试、戊巴比妥钠阈下催眠试验和协同催眠试验观察牛蒡苷对小鼠神经系统的影响。结果小鼠口服牛蒡苷的LD50为7.13g/kg,相当于人临床剂量的580倍;腹腔注射LD50为0.74g/kg,相当于人日口服剂量的60倍。口服0.122∽0.488g/kg剂量的牛蒡苷（相当于临床剂量的10,20和40倍）对神经系统无明显影响。结论牛蒡子药材临床口服途径应用安全,但非口服途径应慎重使用。

牛蒡苷抗炎和解热作用研究

目的研究牛蒡苷的抗炎和解热作用,为牛蒡苷及牛蒡子的临床应用提供依据。方法应用小鼠耳廓肿胀模型、大鼠肉芽肿和弗氏完全佐剂模型观察牛蒡苷对急慢性炎症的影响,采用大肠杆菌内毒素发热家兔模型观察牛蒡苷的解热作用。结果牛蒡苷在60、120、240 mg/kg剂量下显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,减少大鼠肉芽组织增生,明显降低发热家兔体温,但并不改善佐剂性关节炎大鼠足关节肿胀程度。结论牛蒡苷具有良好的抗急性炎症和解热作用。