小鼠卵巢自体移植后血管重建及移植部位血管密度的实验观察

目的观察小鼠卵巢自体异位移植物与受体移植部位的血供重建时间及移植部位血管密度对移植物存活的影响。方法成年小鼠卵巢剥膜后一分为二,体外培养3h后进行半卵巢自体异位移植于肾被膜下和颈部皮下,实验分为新鲜组、肾背膜下移植组、颈部皮下移植组,于移植后36 h取材,通过墨汁灌注和组织切片技术,观察卵巢移植后血管重建及卵泡存活情况。结果肾被膜下移植组可见有贯穿肾组织至卵巢组织之间的血管,正常卵泡计数较多,与颈部皮下移植组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。肾组织血管密度明显大于颈部皮下组织(P<0.05)。结论富含血管的肾被膜下移植较血管较少的颈部皮下移植更有利于卵巢组织移植后的血供重建。

三种冷冻方法对胎儿卵巢组织凋亡相关蛋白表达的Bcl-2、Bax、Caspase影响

目的观察三种冷冻方法对胎儿卵巢组织卵泡凋亡蛋白的影响。方法分别采用程序冻存法(PFG)、快速冻存法(RFG)、玻璃化冻存法(VG)冻存胎儿卵巢组织,解冻后采用免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果各冷冻组卵泡Bcl-2蛋白阳性表达率下降,与新鲜组相比差异显著(P<0.05);Bax蛋白阳性表达率上升,PFG、VG组Bax蛋白阳性表达与新鲜组(FCG)差别不显著(P>0.05);RFG显著高于FCG、PFG、VG(P<0.001)。冷冻后,Caspase-3蛋白阳性表达率上升,PFG、RFG显著高于FCG(P<0.05),VG与FCG差别不显著(P>0.05)。结论玻璃化冻存法可有效冻存胎儿卵巢组织。

小鼠卵巢器官不同部位移植的效果比较

背景:最佳移植部位的选择对于保证卵巢的存活起着很重要的作用。目的:比较小鼠卵巢器官不同移植部位自体移植后的生长发育情况。设计、时间及地点:动物实验观察,于2008-09/11在宁夏医科大学生殖与遗传重点实验室完成。材料:清洁级健康ICR品系雌性小白鼠60只,按照不同的移植部位随机分为对照组、自体肾被膜下、颈部皮下、腹腔内及下肢根部肌肉内移植组,12只/组。方法:①对照组:新鲜取卵巢后立刻固定。各移植组在切除双侧卵巢后,立即进行自体异位移植。②肾被膜移植组:在肋脊角处逐层切开两侧的皮肤和肌肉,充分暴露小鼠双侧肾脏,用显微手术镊将完整卵巢由肾被膜切口移入肾脏下端。③颈部皮下移植组:在颈部双侧靠近颈动脉处切口,钝性分离皮下组织,用缝线将附近结缔组织缝成荷包,将完整卵巢植入荷包内并缝合。④腹腔移植组:将卵巢移植于腹腔子宫角系膜处。⑤下肢根部肌肉组织移植组:移植前4d分别在小鼠左右下肢根部作一切口,用小弯钳在肌层内进行钝性分离制备一创面后,缝合切口。4d后进行自体卵巢移植时,将卵巢组织移进肌层预制的创面内,缝合切口。主要观察指标:于移植后48,168h取移植卵巢进行组织学和血供重建分析。结果:移植48h后,肾被膜下移植组卵巢与移植部位重建血供,而下肢根部肌肉移植组无血供建立;移植168h,腹腔移植组的卵泡计数最低,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);下肢根部肌肉移植组卵泡结构正常,但数目较肾被膜移植组及颈部移植组少,但差异无显著性(P>0.05)。肾被膜下移植组和颈部皮下移植组存活的卵巢器官内均可见不同发育阶段的卵泡,形态正常,与对照组相近。结论:卵巢组织的肾被膜下及颈部皮下移植较腹腔及下肢肌肉移植更易重建血供并利于卵泡的发育。

两种玻璃化法冻存小鼠卵巢的研究

目的:探讨2种玻璃化法对小鼠卵巢组织、器官形态和功能保存作用的影响。方法:以改良的DMEM-F12为玻璃化液,分别采用常规玻璃化法(A组)和超速玻璃化法(B组)冻存小鼠卵巢组织及器官,解冻后通过组织学观察、卵巢组织异体、卵巢器官自体肾被膜下移植,观察动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况,并分别以新鲜卵巢组织异体移植、卵巢器官自体移植(C组)为对照,评价2种玻璃化法的冻存效果。结果:①A组、B组、C组卵巢组织异体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别10.5±5.4d、8.0±2.2d、6.3±1.0d。A组与C组比,差异显著(P<0.05);B组与C组无差异,A组与B组间也无差异(P均>0.05)。②A组、B组、C组卵巢器官自体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别为9.4±0.9d、6.9±1.1d、6.1±1.1d,A组与B、C组相比有统计学差异(P<0.05),而B组与C组间无差异(P>0.05)。移植存活的卵巢组织、器官内均可见不同发育阶段的卵泡,形态正常。结论:2种玻璃化法可有效地冻存卵巢组织及器官,但超速玻璃化法效果较优。