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rPA(K)原核表达产物的复性与纯化
被引量:
1
1
作者
罗惠霞
李敏
+1 位作者
王玉炯
田楠
《河北师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2009年第1期100-106,共7页
为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X-100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2 mol/L脲1、mL/L TritonX-100、200 mL/L乙醇洗涤,15%饱和...
为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X-100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2 mol/L脲1、mL/L TritonX-100、200 mL/L乙醇洗涤,15%饱和度的硫酸铵沉淀后,包涵体的纯度由16.0%提高到56.6%.在此基础上,利用稀释复性和透析复性2种方法对包涵体进行复性,以恢复产物的天然构象,获得具有生物学活性的目的蛋白.结果如下:采用透析复性法,rPA(K)的比活可达1.33×105IU/mg;采用稀释复性法,rPA(K)的比活可达1.06×105IU/mg.利用S.TagTMrEK纯化试剂盒对目的产物进行进一步纯化,并对rEK和MgCl22种洗脱剂的洗脱效果进行了比较.SDS-PAGE结果显示,MgCl2洗脱后的产物,分子量未发生变化,仍为43 ku,其纯度为72%;而rEK洗脱后的产物,其纯度达到了72%,且分子量减小至约40 ku,表明去除了融合蛋白中的非目的片段.
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关键词
RPA(K)
包涵体
纯化
复性
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职称材料
rPA(K)的原核表达及其产物的初步纯化
2
作者
罗惠霞
李敏
+1 位作者
王玉炯
石晶
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2007年第6期120-124,共5页
rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超...
rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超声破碎次数,包涵体洗涤液(脲,Triton X-100,乙醇)的不同浓度对纯化的影响因素进行了摸索。结果表明,超声2次,2M脲,0.5%Triton X-100,20%乙醇对目的蛋白纯化的效果最好,从而为进一步的纯化和复性奠定基础。
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关键词
RPA(K)
包涵体
初步纯化
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职称材料
骨桥蛋白在胃癌中的表达及与胃癌侵袭转移的关系
被引量:
18
3
作者
张东涛
袁静
+5 位作者
杨力
郭新宁
郝志明
韩者艺
吴开春
樊代明
《中华肿瘤杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期167-169,共3页
目的 探讨骨桥蛋白 (OPN)在胃癌侵袭转移中的作用。方法 采用免疫组织化学SABC法检测OPN、核因子 κBp6 5 (NF κBp6 5 )和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在 12例非癌胃组织和 72例胃癌标本中的表达及分布。结果 OPN、NF κBp6 5和MMP 9...
目的 探讨骨桥蛋白 (OPN)在胃癌侵袭转移中的作用。方法 采用免疫组织化学SABC法检测OPN、核因子 κBp6 5 (NF κBp6 5 )和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在 12例非癌胃组织和 72例胃癌标本中的表达及分布。结果 OPN、NF κBp6 5和MMP 9的阳性表达率 ,在 12例非癌胃组织中均为 0 ,在 30例无淋巴结转移胃癌组织中分别为 4 3.3%、4 0 .0 %和 4 6 .7% ;在 2 6例有淋巴结转移胃癌组织中分别为 76 .9%、73.1%和 80 .8% ,与无淋巴结转移的胃癌组织的差异有统计学意义 (P值分别为 0 .0 11,0 .0 13和 0 .0 0 9) ;在 16例有淋巴结转移且伴胃外器官转移的胃癌组织中分别为 87.5 %、81.3%和 93.8% ,与无淋巴结转移的胃癌组织差异有统计学意义 (P值分别为 0 .0 0 4 ,0 .0 0 7和0 .0 0 2 )。胃癌组织中 ,OPN与NF κB及NF κBp6 5与MMP 9的阳性表达率有差别 ,但有相关关系 ,r分别为 0 .6 7和 0 .72。结论 OPN与胃癌的侵袭转移有关 ,可能机制是通过活化NF κB ,上调转移相关分子MMP 9的表达 ,从而促进癌细胞的侵袭转移。
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关键词
胃癌组织
淋巴结转移
MMP-9
OPN
癌侵袭
表达
NF-κB
结论
可能机制
意义
原文传递
题名
rPA(K)原核表达产物的复性与纯化
被引量:
1
1
作者
罗惠霞
李敏
王玉炯
田楠
机构
宁夏大学生命科学学院重点实验室
出处
《河北师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2009年第1期100-106,共7页
基金
宁夏自然科学基金(NZ0505)
文摘
为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X-100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2 mol/L脲1、mL/L TritonX-100、200 mL/L乙醇洗涤,15%饱和度的硫酸铵沉淀后,包涵体的纯度由16.0%提高到56.6%.在此基础上,利用稀释复性和透析复性2种方法对包涵体进行复性,以恢复产物的天然构象,获得具有生物学活性的目的蛋白.结果如下:采用透析复性法,rPA(K)的比活可达1.33×105IU/mg;采用稀释复性法,rPA(K)的比活可达1.06×105IU/mg.利用S.TagTMrEK纯化试剂盒对目的产物进行进一步纯化,并对rEK和MgCl22种洗脱剂的洗脱效果进行了比较.SDS-PAGE结果显示,MgCl2洗脱后的产物,分子量未发生变化,仍为43 ku,其纯度为72%;而rEK洗脱后的产物,其纯度达到了72%,且分子量减小至约40 ku,表明去除了融合蛋白中的非目的片段.
关键词
RPA(K)
包涵体
纯化
复性
Keywords
rPA(K)
inclusion body
purification
renaturation
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
rPA(K)的原核表达及其产物的初步纯化
2
作者
罗惠霞
李敏
王玉炯
石晶
机构
宁夏大学生命科学学院重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2007年第6期120-124,共5页
基金
宁夏自然科学基金资助(项目号:NZ0505)
文摘
rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超声破碎次数,包涵体洗涤液(脲,Triton X-100,乙醇)的不同浓度对纯化的影响因素进行了摸索。结果表明,超声2次,2M脲,0.5%Triton X-100,20%乙醇对目的蛋白纯化的效果最好,从而为进一步的纯化和复性奠定基础。
关键词
RPA(K)
包涵体
初步纯化
Keywords
rPA(K) Inclusion body Purification
分类号
R341 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
骨桥蛋白在胃癌中的表达及与胃癌侵袭转移的关系
被引量:
18
3
作者
张东涛
袁静
杨力
郭新宁
郝志明
韩者艺
吴开春
樊代明
机构
宁夏大学
生命科学
学院
生物
重点
实验室
解放军第五医院妇产科
宁夏
医
学院
附属医院消化内科
第四军医
大学
西京医院消化病研究所
出处
《中华肿瘤杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期167-169,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目 (3 0 160 0 3 3 )
文摘
目的 探讨骨桥蛋白 (OPN)在胃癌侵袭转移中的作用。方法 采用免疫组织化学SABC法检测OPN、核因子 κBp6 5 (NF κBp6 5 )和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在 12例非癌胃组织和 72例胃癌标本中的表达及分布。结果 OPN、NF κBp6 5和MMP 9的阳性表达率 ,在 12例非癌胃组织中均为 0 ,在 30例无淋巴结转移胃癌组织中分别为 4 3.3%、4 0 .0 %和 4 6 .7% ;在 2 6例有淋巴结转移胃癌组织中分别为 76 .9%、73.1%和 80 .8% ,与无淋巴结转移的胃癌组织的差异有统计学意义 (P值分别为 0 .0 11,0 .0 13和 0 .0 0 9) ;在 16例有淋巴结转移且伴胃外器官转移的胃癌组织中分别为 87.5 %、81.3%和 93.8% ,与无淋巴结转移的胃癌组织差异有统计学意义 (P值分别为 0 .0 0 4 ,0 .0 0 7和0 .0 0 2 )。胃癌组织中 ,OPN与NF κB及NF κBp6 5与MMP 9的阳性表达率有差别 ,但有相关关系 ,r分别为 0 .6 7和 0 .72。结论 OPN与胃癌的侵袭转移有关 ,可能机制是通过活化NF κB ,上调转移相关分子MMP 9的表达 ,从而促进癌细胞的侵袭转移。
关键词
胃癌组织
淋巴结转移
MMP-9
OPN
癌侵袭
表达
NF-κB
结论
可能机制
意义
Keywords
Stomach neoplasms
Neoplasm metastasis
Osteopontin
Nuclear factor-κB
Matrix metalloproteinase-9
分类号
R735.2 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
rPA(K)原核表达产物的复性与纯化
罗惠霞
李敏
王玉炯
田楠
《河北师范大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2009
1
下载PDF
职称材料
2
rPA(K)的原核表达及其产物的初步纯化
罗惠霞
李敏
王玉炯
石晶
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2007
0
下载PDF
职称材料
3
骨桥蛋白在胃癌中的表达及与胃癌侵袭转移的关系
张东涛
袁静
杨力
郭新宁
郝志明
韩者艺
吴开春
樊代明
《中华肿瘤杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
18
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