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rPA(K)原核表达产物的复性与纯化 被引量:1
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作者 罗惠霞 李敏 +1 位作者 王玉炯 田楠 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2009年第1期100-106,共7页
为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X-100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2 mol/L脲1、mL/L TritonX-100、200 mL/L乙醇洗涤,15%饱和... 为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X-100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2 mol/L脲1、mL/L TritonX-100、200 mL/L乙醇洗涤,15%饱和度的硫酸铵沉淀后,包涵体的纯度由16.0%提高到56.6%.在此基础上,利用稀释复性和透析复性2种方法对包涵体进行复性,以恢复产物的天然构象,获得具有生物学活性的目的蛋白.结果如下:采用透析复性法,rPA(K)的比活可达1.33×105IU/mg;采用稀释复性法,rPA(K)的比活可达1.06×105IU/mg.利用S.TagTMrEK纯化试剂盒对目的产物进行进一步纯化,并对rEK和MgCl22种洗脱剂的洗脱效果进行了比较.SDS-PAGE结果显示,MgCl2洗脱后的产物,分子量未发生变化,仍为43 ku,其纯度为72%;而rEK洗脱后的产物,其纯度达到了72%,且分子量减小至约40 ku,表明去除了融合蛋白中的非目的片段. 展开更多
关键词 RPA(K) 包涵体 纯化 复性
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rPA(K)的原核表达及其产物的初步纯化
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作者 罗惠霞 李敏 +1 位作者 王玉炯 石晶 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第6期120-124,共5页
rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超... rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超声破碎次数,包涵体洗涤液(脲,Triton X-100,乙醇)的不同浓度对纯化的影响因素进行了摸索。结果表明,超声2次,2M脲,0.5%Triton X-100,20%乙醇对目的蛋白纯化的效果最好,从而为进一步的纯化和复性奠定基础。 展开更多
关键词 RPA(K) 包涵体 初步纯化
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骨桥蛋白在胃癌中的表达及与胃癌侵袭转移的关系 被引量:18
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作者 张东涛 袁静 +5 位作者 杨力 郭新宁 郝志明 韩者艺 吴开春 樊代明 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期167-169,共3页
目的 探讨骨桥蛋白 (OPN)在胃癌侵袭转移中的作用。方法 采用免疫组织化学SABC法检测OPN、核因子 κBp6 5 (NF κBp6 5 )和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在 12例非癌胃组织和 72例胃癌标本中的表达及分布。结果 OPN、NF κBp6 5和MMP 9... 目的 探讨骨桥蛋白 (OPN)在胃癌侵袭转移中的作用。方法 采用免疫组织化学SABC法检测OPN、核因子 κBp6 5 (NF κBp6 5 )和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在 12例非癌胃组织和 72例胃癌标本中的表达及分布。结果 OPN、NF κBp6 5和MMP 9的阳性表达率 ,在 12例非癌胃组织中均为 0 ,在 30例无淋巴结转移胃癌组织中分别为 4 3.3%、4 0 .0 %和 4 6 .7% ;在 2 6例有淋巴结转移胃癌组织中分别为 76 .9%、73.1%和 80 .8% ,与无淋巴结转移的胃癌组织的差异有统计学意义 (P值分别为 0 .0 11,0 .0 13和 0 .0 0 9) ;在 16例有淋巴结转移且伴胃外器官转移的胃癌组织中分别为 87.5 %、81.3%和 93.8% ,与无淋巴结转移的胃癌组织差异有统计学意义 (P值分别为 0 .0 0 4 ,0 .0 0 7和0 .0 0 2 )。胃癌组织中 ,OPN与NF κB及NF κBp6 5与MMP 9的阳性表达率有差别 ,但有相关关系 ,r分别为 0 .6 7和 0 .72。结论 OPN与胃癌的侵袭转移有关 ,可能机制是通过活化NF κB ,上调转移相关分子MMP 9的表达 ,从而促进癌细胞的侵袭转移。 展开更多
关键词 胃癌组织 淋巴结转移 MMP-9 OPN 癌侵袭 表达 NF-κB 结论 可能机制 意义
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